目的 观察自噬在IL-1β促进INS-1胰岛β细胞凋亡中的作用。方法 体外培养大鼠INS-1胰岛β细胞株,给予不同浓度IL-1β干预,用CCK-8法检测在不同作用时间点INS-1细胞的存活率;用Western blot技术检测不同IL-1β浓度下自噬相关蛋白LC3、Bec...目的 观察自噬在IL-1β促进INS-1胰岛β细胞凋亡中的作用。方法 体外培养大鼠INS-1胰岛β细胞株,给予不同浓度IL-1β干预,用CCK-8法检测在不同作用时间点INS-1细胞的存活率;用Western blot技术检测不同IL-1β浓度下自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62的表达水平;Western blot法和流式细胞术检测INS-1细胞的凋亡水平。结果 IL-1β可以降低INS-1细胞的存活率,且呈浓度及时间依赖性( P <0.05, P <0.01)。与对照组相比,随着IL-1β浓度的增高,INS-1细胞凋亡水平逐渐升高( P <0.05),且细胞自噬水平也随着IL-1β浓度的增高而逐渐增高(自噬相关蛋白LC3、Beclin1表达上升,P62降低, P <0.05)。采用自噬激动剂雷帕霉素预处理细胞上调自噬可进一步增加IL-1β诱导的细胞凋亡,而用自噬抑制剂3-MA预处理抑制细胞自噬后则可逆转IL-1β诱导的INS-1胰岛细胞凋亡。结论 IL-1β通过诱导自噬增加促进INS-1胰岛β细胞凋亡。展开更多
目的在分子水平探讨Nek2B与β-catenin在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的表达及意义。方法利用生物信息学分析的方法[GEO2R在线工具、基因本体(GO)功能分析、KEGG生物途径富集分析]筛选TNBC基因芯片集数据中的差...目的在分子水平探讨Nek2B与β-catenin在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的表达及意义。方法利用生物信息学分析的方法[GEO2R在线工具、基因本体(GO)功能分析、KEGG生物途径富集分析]筛选TNBC基因芯片集数据中的差异表达基因;运用Western blot及即时定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Nek2B、β-catenin在TNBC细胞系中的表达水平;收集山西医科大学第二医院2007年1月1日至2012年12月31日的80例TNBC患者资料,采用免疫组织化学法检测Nek2B在TNBC肿瘤组织芯片的表达,分析其与TNBC临床病理学特征之间的关系。结果通过生信分析2个TNBC肿瘤的cDNA芯片集(GSE38959和GSE27447),初筛共得到998个差异表达基因(DEG),其中13个共同DEG,生物途径分析结果显示共同DEG与Wnt/β-catenin通路有密切联系,其中Nek2的表达差异最大,且与患者不良预后相关;Western blot和qRT-PCR结果提示在同一种TNBC细胞系中,Nek2B与β-catenin的表达强度一致;免疫组织化学结果显示,在TNBC肿瘤组织中,Nek2B的高表达与高组织学分级(G3;84.3%比37.9%,P<0.001),淋巴结转移(76.7%比54.1%,P=0.032)和高Ki-67阳性指数(78.6%比52.6%,P=0.007)以及β-catenin阳性表达(72.5%比27.3%,P=0.018)相关。结论Nek2B高表达与TNBC患者的不良预后有关,在TNBC组织与细胞中,Nek2B的表达与β-catenin呈正相关性,提示Nek2B可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响TNBC的发生与发展。展开更多
文摘目的 观察自噬在IL-1β促进INS-1胰岛β细胞凋亡中的作用。方法 体外培养大鼠INS-1胰岛β细胞株,给予不同浓度IL-1β干预,用CCK-8法检测在不同作用时间点INS-1细胞的存活率;用Western blot技术检测不同IL-1β浓度下自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62的表达水平;Western blot法和流式细胞术检测INS-1细胞的凋亡水平。结果 IL-1β可以降低INS-1细胞的存活率,且呈浓度及时间依赖性( P <0.05, P <0.01)。与对照组相比,随着IL-1β浓度的增高,INS-1细胞凋亡水平逐渐升高( P <0.05),且细胞自噬水平也随着IL-1β浓度的增高而逐渐增高(自噬相关蛋白LC3、Beclin1表达上升,P62降低, P <0.05)。采用自噬激动剂雷帕霉素预处理细胞上调自噬可进一步增加IL-1β诱导的细胞凋亡,而用自噬抑制剂3-MA预处理抑制细胞自噬后则可逆转IL-1β诱导的INS-1胰岛细胞凋亡。结论 IL-1β通过诱导自噬增加促进INS-1胰岛β细胞凋亡。
