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低氧预处理骨髓间充质干细胞耐受缺血缺氧的能力 被引量：10
1
作者 徐巧岩 夏琳 王吉昌 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第49期8474-8480,共7页
背景:有研究表明骨髓间充质干细胞的生理环境氧体积分数低于常规培养用的20%-21%,适度低氧体积分数下,骨髓间充质干细胞表现出促进生长增殖,保持分化潜能的特性。目的:观察低氧预处理后的大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性,以期为低氧... 背景:有研究表明骨髓间充质干细胞的生理环境氧体积分数低于常规培养用的20%-21%,适度低氧体积分数下,骨髓间充质干细胞表现出促进生长增殖,保持分化潜能的特性。目的:观察低氧预处理后的大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性,以期为低氧预处理后的骨髓间充质干细胞体内移植治疗寻找体外依据。方法:将大鼠骨髓间充质干细胞传代接种后置于体积分数1%O2,5%CO2的低氧培养箱内培养,以体积分数20%O2,5%CO2常氧培养的骨髓间充质干细胞同样封闭作为对照。结果与结论:MTT检测显示,在低氧条件下培养的经低氧预处理的骨髓间充质干细胞较常氧条件下培养的细胞在贴壁后会经历一个相对较长时间的潜伏期,随后才进入指数生长期,体积分数1%O2为非致死性的培养条件。锥虫蓝染色显示,封闭无血清条件下,两组细胞存活率均随着时间的推移而降低(P<0.05),而常氧组下降更快。流式细胞仪检测显示,低氧组的细胞表面分子标记物CD29(+),CD90(+),CD31(-),CD45(-)的表达与低氧预处理前差异无显著性意义,未向血管内皮细胞分化。实时定量PCR和酶联免疫实验检测结果显示,低氧预处理48 h后,骨髓间充质干细胞中血管内皮生长因子mRNA和蛋白的表达均升高(P<0.05)。Western-blot检测显示,低氧预处理24-48 h后,骨髓间充质干细胞中缺氧诱导因子1α的蛋白表达明显增多(P<0.05)。证实,体积分数1%O2能短暂抑制骨髓间充质干细胞的增殖,但不会产生致死性效应,可以作为低氧预处理的氧体积分数。体积分数1%O2预处理48 h后,骨髓间充质干细胞的表型未发生明显变化,仍维持其干性。低氧预处理提高骨髓间充质干细胞对缺血缺氧的耐受能力,机制可能与低氧诱导因子1α表达增多有关。 展开更多
关键词 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 低氧预处理 低氧诱导因子1Α 血管内皮生长因子 大鼠 国家自然科学基金
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pcDNA3．1-血管内皮生长因子165质粒局部注射对大鼠软组织缺损修复的影响 被引量：2
2
作者 杨加峰 武士清 +4 位作者 赵冬梅 刘军莉 邱丽萍 王海斌 许复郁 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第20期3901-3904,共4页
背景:目前关于血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在创伤及整形外科领域主要集中在骨折及组织工程化材料等方面,在软组织损伤方面报道不多。目的:构建的pcDNA3.1-VEGF165质粒,直接注射于大鼠软组织缺损局部,探... 背景:目前关于血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在创伤及整形外科领域主要集中在骨折及组织工程化材料等方面,在软组织损伤方面报道不多。目的:构建的pcDNA3.1-VEGF165质粒,直接注射于大鼠软组织缺损局部,探讨其对软组织缺损修复的影响。设计、时间及地点:于2004-09/2006-01在山东大学动物实验中心和分子生物学实验室完成自身对照观察实验。材料:健康SD大鼠30只。方法:Trizol法提取兔组织中总RNA,反转录合成VEGF165cDNA序列,将此基因片段与pMD18-T构建真核表达载体,双酶切,在T4DNA连接酶作用下,再与pcDNA3.1载体构建成重组真核表达质粒pcDNA3.1-VEGF165;采用SD大鼠30只,于脊背后部两侧对称部位制备圆形全层皮肤(直径15mm)、肌肉(切除2mm厚肌肉)软组织缺损,两创缘相距4cm;选择一侧为实验组,直接注射0.2mL(含200ng)质粒液,对侧为对照组,以等量生理盐水同法处理。主要观察指标:创面愈合、血管生成及局部胶原表达。结果:30只均进入结果分析。①经赵冬梅等的方法鉴定,pcDNA3.1-VEGF165质粒构建成功。②质粒液局部注射后实验组创面愈合时间早于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);实验组术后7,14d微血管密度高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。③实验组3d即有Ⅲ型胶原表达,14d达高峰,30d时略有降低。对照组Ⅲ型胶原表达部位和趋势与实验组一致,只是时间延迟。结论:pcDNA3.1-VEGF165质粒局部注射可促进软组织缺损区血管生成和细胞外基质合成,加速创面愈合。 展开更多
关键词 基因转染 血管内皮细胞生长因子 胶原 免疫组织化学
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人骨髓基质干细胞体外三维立体培养的实验研究
3
作者 李东 马鲁新 +5 位作者 马玲 蔡景龙 刘伟 崔磊 曹谊林 胡振生 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第9期865-868,共4页
目的:探讨人骨髓基质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)在部分脱钙骨三维支架上立体培养的可行性。方法:将自人骨髓中分离出的骨髓基质干细胞进行培养、扩增,接种于多孔的部分脱钙骨支架上,通过荧光活性染料DiI... 目的:探讨人骨髓基质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)在部分脱钙骨三维支架上立体培养的可行性。方法:将自人骨髓中分离出的骨髓基质干细胞进行培养、扩增,接种于多孔的部分脱钙骨支架上,通过荧光活性染料DiI标记和扫描电镜观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的生长和粘附情况,并测量hBMSCs在部分脱钙骨上的粘附率。结果:hBMSCs在部分脱钙骨上的粘附率为(99.1±1)%;DiI标记的细胞于接种后第2、4、7天激光共聚焦检测,见支架空隙中细胞逐渐增多;电镜观察,接种7天后,电镜下见细胞覆盖了部分脱钙骨表面;自部分脱钙骨中份切开,横断面电镜观察见断面中充满细胞。结论:hBMSCs在部分脱钙骨支架的三维立体环境中生长良好,是一种较好的体外培养方法。 展开更多
关键词 骨髓基质干细胞 脱钙骨 组织工程
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烧伤变性脱细胞真皮基质可再生利用的实验研究 被引量：12
4
作者 王晓川 李川 +3 位作者 单菲 王文婷 朱旭国 姜笃银 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期201-206,共6页
目的探讨烧伤变性脱细胞真皮基质（DADM）作为真皮替代物用于创面修复的可行性。方法（1）取12只Wistar大鼠，其中9只背部造成深Ⅱ度烫伤（以下称烧伤）创面，分别于伤后1、2、3d（每时相点3只）取创面全厚皮肤，用2．5g／L胰蛋白酶-体... 目的探讨烧伤变性脱细胞真皮基质（DADM）作为真皮替代物用于创面修复的可行性。方法（1）取12只Wistar大鼠，其中9只背部造成深Ⅱ度烫伤（以下称烧伤）创面，分别于伤后1、2、3d（每时相点3只）取创面全厚皮肤，用2．5g／L胰蛋白酶-体积分数0．5％Triton X-100行脱细胞处理制成DADM，相应称为DADM-1d、DADM-2d、DADM-3d；余下3只大鼠不致伤，同法制备ADM作为对照。对ADM和各DADM行大体、组织学观察及微生物学和生物力学检测（极限抗拉强度、最大拉力、断裂伸长率、应力-应变关系）。（2）另取64只Wistar大鼠，按随机数字表法分为ADM组、DADM．1d组、DADM-2d组、DADM-3d组，每组16只。于各大鼠背部制作-2．0cm×1．8cm大小皮瓣，将前述ADM和DADM-1d、DADM-2d、DADM-3d切制成1．8cm×1．5cm大小后分别埋植于皮瓣下。术后1、3、5、9周，每组每时相点取4只大鼠，肉眼观察创面愈合情况及埋植物的变化，并对埋植物行组织学观察。对数据行单因素方差分析及t检验。结果（1）新鲜制备的各DADM呈乳白色，质地柔软有弹性，韧性较ADM弱。光学显微镜下见ADM和各DADM中均无上皮结构和细胞存在，DADM胶原纤维增粗程度不均匀，排列紊乱，嗜伊红性增强。各DADM微生物学检测结果均为阴性。DADM-1d、DADM-2d、DADM-3d之间极限抗拉强度、最大拉力、断裂伸长率和应力-应变关系比较，差异均无统计学意义（F值为0．088-3．591，P值均大于0．05）；其中DADM-3d此4项指标值最高，分别为（13．0±2．4）MPa、（61±4）N、（173±7）％、（45．7±2．0）％。ADM此4项指标各为（19．0±2．6）MPa、（95±4）N、（201±5）％、（62．5±2．2）％，与3种DADM两两比较均偏高（t值为6．42±17．125。P值均小于0．01）。（2）埋植术后1周，各组大鼠创面元渗出或红肿，埋植物未收缩或卷曲；创面有炎性细胞浸润并有Fb及� 展开更多
关键词 烧伤 细胞外基质 变性真皮 脱细胞真皮基质 创面修复
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蛋白降解靶向纳米嵌合体在肿瘤治疗中的应用进展
5
作者 李永正 张静娟 +1 位作者 宋健 祁迎秋 《中国医学前沿杂志（电子版）》 CSCD 北大核心 2024年第10期26-34,I0002,共10页
蛋白降解靶向嵌合体(proteolysis-targeting chimeras,PROTACs)技术是一种新兴的治疗手段,通过特异性降解肿瘤相关蛋白,实现了对癌细胞的精准打击,而不影响正常细胞,为癌症治疗提供了新路径。然而,PROTACs分子在实际应用中仍面临诸多挑... 蛋白降解靶向嵌合体(proteolysis-targeting chimeras,PROTACs)技术是一种新兴的治疗手段,通过特异性降解肿瘤相关蛋白,实现了对癌细胞的精准打击,而不影响正常细胞,为癌症治疗提供了新路径。然而,PROTACs分子在实际应用中仍面临诸多挑战,如溶解度低、器官靶向性差,脱靶效应以及代谢不稳定等。蛋白降解靶向纳米嵌合体(nano-proteolysis-targeting chimeras,nano-PROTACs)是纳米技术与PROTAC技术相结合的产物,为克服当前癌症治疗中的种种挑战提供了新的解决思路。我们结合最新的研究进展,总结了用于肿瘤治疗的nano-PROTACs的种类,并概述了不同种类nano-PROTACs的设计策略,包括递送系统、装载方法、释放方式以及联合治疗效果等。进一步加深对这一快速发展的领域的理解,以期为基于PROTAC技术的抗肿瘤药物研发提供有益的思路和参考。 展开更多
关键词 蛋白降解靶向嵌合体 纳米技术 蛋白降解靶向纳米嵌合体 肿瘤治疗
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自噬相关基因Beclin1在大鼠深Ⅱ度烧伤皮肤中的表达 被引量：2
6
作者 朱绪国 刘磊 +5 位作者 姜笃银 于冠英 李川 李耀南 刘振中 张基勋 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2013年第9期60-63,共4页
目的观察自噬相关基因Beclin1在大鼠深Ⅱ度烧伤皮肤中的表达,初步探讨自噬与烧伤皮肤之间的关系。方法 16只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(对照组)和烧伤组(实验组),每组各8只。实验组建立深Ⅱ度烧伤模型,烧伤后分别于1、3、7 d取材。... 目的观察自噬相关基因Beclin1在大鼠深Ⅱ度烧伤皮肤中的表达,初步探讨自噬与烧伤皮肤之间的关系。方法 16只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(对照组)和烧伤组(实验组),每组各8只。实验组建立深Ⅱ度烧伤模型,烧伤后分别于1、3、7 d取材。组织学检查观察各组动物皮肤全层情况,免疫组化检测Beclin1在各组动物皮肤的表达,并行图像处理和统计学分析。结果 Beclin1基因在实验组表达阳性,对照组表达阴性,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Beclin1基因在Wistar大鼠烧伤皮肤中的表达呈阳性,推测自噬参与深Ⅱ度烧伤皮肤的修复过程。 展开更多
关键词 自噬 基因 Beclin1 大鼠 Wistar 烧伤
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大鼠胚胎皮肤前体复合物裸鼠移植模型的构建
7
作者 李川 程艳娜 姜笃银 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2012年第12期47-51,共5页
目的筛选大鼠胚胎皮肤裸鼠移植的最佳妊娠时间窗,探索研究胚胎皮肤及其附件发育机制并进行干预的新方法。方法获取不同胎龄(E14.5 d、E16.5 d、E18.5 d)的携带少量皮下组织的大鼠胚胎皮肤前体复合物(ESPCs),以皮瓣下埋植的方式移植到裸... 目的筛选大鼠胚胎皮肤裸鼠移植的最佳妊娠时间窗,探索研究胚胎皮肤及其附件发育机制并进行干预的新方法。方法获取不同胎龄(E14.5 d、E16.5 d、E18.5 d)的携带少量皮下组织的大鼠胚胎皮肤前体复合物(ESPCs),以皮瓣下埋植的方式移植到裸鼠背部。7 d后打开皮瓣并暴露成活的ESPCs,观察其成活后胚胎皮肤及附件生长发育的组织学变化。结果 E16.5 d、E18.5 d移植物可顺利成活并继续生长发育,最终生成带皮肤附件的完整的皮肤结构;E14.5 d移植物则形成畸胎瘤样肿物。结论通过皮瓣下埋植可成功移植大鼠ESPCs;E16.5 d左右为ESPCs移植的最佳妊娠时间。 展开更多
关键词 胚胎 皮肤附件 发育 动物模型
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