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Epstein-Barr病毒载体及其在基因治疗中的应用 被引量:1
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作者 孔建平 孙汶生 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 2001年第4期249-252,共4页
EB病毒具有多种生物学特性 ,据此构建了宿主范围广泛的 EB病毒载体。因其较其它病毒载体具有明显优势 ,所以具有良好的应用前景。本文对 EB病毒生物学特性和载体的研制及在基因治疗中的应用作了较全面阐述。
关键词 Epstein-Barr病毒载体 基因治疗 应用
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重组人肿瘤坏死因子α联合变异型IL-2治疗肝癌的实验研究
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作者 曹英林 马春红 +2 位作者 宋静 张利宁 孙汶生 《山东医科大学学报》 2001年第5期387-390,共4页
目的 :从大肠杆菌中获得高活性重组人肿瘤坏死α因子 (rhTNF α) ,并探索TNF α与其它细胞因子临床治疗肝癌的合理配伍方案。方法 :CaCl2 法转化大肠杆菌JM 10 9,温度诱导rhTNF α ,收获菌体 ,裂解后 ,Westernblot检测表达产物的特异性 ... 目的 :从大肠杆菌中获得高活性重组人肿瘤坏死α因子 (rhTNF α) ,并探索TNF α与其它细胞因子临床治疗肝癌的合理配伍方案。方法 :CaCl2 法转化大肠杆菌JM 10 9,温度诱导rhTNF α ,收获菌体 ,裂解后 ,Westernblot检测表达产物的特异性 ,薄层分析rhTNF α表达量 ,MTT 短程法测定rhTNF α对L92 9杀伤作用。以表达的rhTNF α作用于肝癌细胞株BEL74 0 2和荷瘤鼠 (肝癌腹水瘤 ) ,验证其对肝癌细胞的体内外抑制作用。采用嵌套设计 ,MTT 短程法测定rhTNF α与变异型IL 2对BEL74 0 2的协同抑制作用。结果 :Westernblot证实 pAW 711转化JM 10 9后筛得的重组菌表达产物特异性良好 ,薄层分析表明rhTNF α表达量可达菌体蛋白的 17 8% ,MTT 短程法证实表达产物具有良好生物活性 ,并可在体外明显杀伤肝癌细胞 ,其杀瘤活性优于标准对照。体内实验证实rhTNF α可使人肝癌腹水瘤荷瘤鼠生命延长率达31 5 %。rhTNF α与变异型IL 2具有协同抑癌作用 ,其协同作用具有特殊的剂量依赖性。结论 :在大肠杆菌中可获得高活性rhTNF α ,rhTNF α在体内外均可明显抑制肝癌细胞 ,变异型IL 2对此有协同作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 白细胞介素2 肝癌 治疗 实验研究
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肝癌组织靶向性正义与反义表达载体pEBAF/N-ras的构建
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作者 孔建平 孙汶生 +3 位作者 曹英林 宋静 张利宁 马春红 《山东医科大学学报》 2001年第3期193-196,共4页
目的 :用分子克隆技术构建肝癌组织特异性N rascDNA正义与反义表达载体。方法 :用BamHI酶切携带目的基因的质粒 pZIP NeoSV (X) 1,获得 1 0 6kbN rascDNA ;同时以BamHI将载体 pE BAF线性化 ,并行去磷酸化修饰 ,用T4DNA连接酶将两者连接 ... 目的 :用分子克隆技术构建肝癌组织特异性N rascDNA正义与反义表达载体。方法 :用BamHI酶切携带目的基因的质粒 pZIP NeoSV (X) 1,获得 1 0 6kbN rascDNA ;同时以BamHI将载体 pE BAF线性化 ,并行去磷酸化修饰 ,用T4DNA连接酶将两者连接 ,转化感受态细菌DH5α。先以酶切和随机引物法标记的N rascDNA探针进行菌落原位杂交筛选阳性重组克隆 ,再以PvuⅡ酶切鉴定插入方向 ,同时进行DNA测序和同源性分析。结果 :成功构建肝癌组织特异性正义与反义表达载体 pEBAF/s N ras和 pE BAF/as N ras。结论 :成功构建的N rascDNA正 /反义表达载体 。 展开更多
关键词 基因 RAS 肝细胞 核苷酸类 基因表达
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感染性腹泻病原微生物的实验诊断
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作者 曹英林 《世界华人消化杂志》 CAS 2001年第8期927-928,共2页
0引言 感染性腹泻病是一大类发病急、传播快、危害广的常见传染病,其发病率在我国为传染病之首,因此快速、敏感、特异地诊断对于治疗和预防均具重要意义.能引起人类感染性腹泻的病原微生物(infectious diarrheal pathogenic microorgani... 0引言 感染性腹泻病是一大类发病急、传播快、危害广的常见传染病,其发病率在我国为传染病之首,因此快速、敏感、特异地诊断对于治疗和预防均具重要意义.能引起人类感染性腹泻的病原微生物(infectious diarrheal pathogenic microorganisms,IDPM)近50种,包括细菌、病毒、真菌与寄生虫四大类.它们种类繁多,结构与化学组成复杂,代谢产物复杂,核酸类型、基因与蛋白质的表达特性也显著不同利用这些物质的结构和化学组成的不同以及功能表达的不同特征选择合适的实验诊断技术方法是十分必要的,这就要求不仅对IDPM的生物学特性有所认识,还要对实验诊断技术的技术特点、优缺点有较全面的认识,从而选择适当的实验技术. 展开更多
关键词 感染性腹泻 微生物学 诊断 感染 病原体
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非淋菌性尿道炎患者支原体感染及药敏分析
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作者 宋静 张利宁 +2 位作者 贾继辉 王晓燕 肖颖 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2003年第5期541-541,共1页
关键词 非淋菌性尿道炎 支原体感染 药敏分析 治疗 解脲支原体
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反义寡核苷酸体外抗乙型肝炎病毒研究 被引量:7
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作者 刘素侠 孙汶生 +3 位作者 曹英林 张利宁 马春红 丁培芳 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期338-340,共3页
目的 探讨反义寡核苷酸的体外抗病毒作用 ,为基因水平上防治乙型肝炎病毒 (HBV)感染及HBV相关肝细胞癌的基因治疗提供实验依据。方法 用PCR方法分别合成了互补于HBVX基因的翻译起始区、DR2区、ENⅡ区的反义寡核苷酸 (AsON)及无关序列 ... 目的 探讨反义寡核苷酸的体外抗病毒作用 ,为基因水平上防治乙型肝炎病毒 (HBV)感染及HBV相关肝细胞癌的基因治疗提供实验依据。方法 用PCR方法分别合成了互补于HBVX基因的翻译起始区、DR2区、ENⅡ区的反义寡核苷酸 (AsON)及无关序列 ,其中针对ENⅡ设计的AsON ,目前尚未见互补于该区段反义寡核苷酸的报道。以HBVDNA转染的HepG2 2 15细胞为靶细胞 ,ELISA法检测AsON作用前后细胞上清中的HBsAg和HBeAg分泌情况。结果 当AsON的最佳作用浓度为 10 μmol L时 ,3种反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg抑制率分别为 :5 7%、6 0 %、5 2 %和 5 6 %、45 %、5 6 % ,AsON对HBV抗原的抑制作用具双峰现象。无关序列无明显抑制作用 (<12 % )。利用锥虫蓝染色、四甲基偶氮唑盐比色试验观察到当AsON作用浓度为 40 μmol L时 ,对细胞代谢无明显毒副作用。结论 反义寡核苷酸封闭HBVX基因区的关键区段 ,可有效抑制HBV抗原的分泌。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 反义寡核苷酸类 基因转染 肿瘤细胞 细胞培养 肝细胞癌 基因治疗
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