一种检测细菌性阴道病方法的建立及临床评价 被引量：15

1

作者 朱园园 沈佐君 万士林 《检验医学》 CAS 北大核心 2009年第5期350-354,共5页

目的评估一种国内自主建立利用唾液酸酶检测细菌性阴道病（BV）方法的临床应用价值。方法比色法探索研发试剂与酶标准品的最佳反应条件,包括底物溶液的pH值和反应的最适温度及时间。采用研发试剂、BV BLUE、临床现用国产试剂盒对临床标... 目的评估一种国内自主建立利用唾液酸酶检测细菌性阴道病（BV）方法的临床应用价值。方法比色法探索研发试剂与酶标准品的最佳反应条件,包括底物溶液的pH值和反应的最适温度及时间。采用研发试剂、BV BLUE、临床现用国产试剂盒对临床标本进行检测,判断研发试剂的临床应用价值。结果研发试剂在pH值6.0-6.2、37℃10 min时与酶标准品达到最佳反应,与BV BLUE相比,检出限相同时研发试剂底物用量仅为BV BLUE的1/2.78。临床实验中,研发试剂与BV BLUE对BV的检测效果差异无统计学意义（P=1.000,Kappa=0.905）,符合率为96%。而国产试剂盒与BV BLUE对BV的检测效果差异有统计学意义（P=0.000,Kappa=0.362）,符合率为65%。结论研发试剂可以达到与BV BLUE相同的检出效果,其快速、方便、可信度高且成本较低,优于国内类似产品,更有利于在临床推广和使用。 展开更多

关键词 阴道病 细菌 唾液酸酶

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氨甲蝶呤对映体耐药A549细胞株的建立及其生物学特征 被引量：10

2

作者 陶绍能 何晓东 +4 位作者 董林 李明 朱园园 孙自敏 沈佐君 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期273-277,共5页

目的诱导并建立耐氨甲蝶呤对映体的A549细胞株并观察耐药细胞系(L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549)的生物学特性。方法以MTX对映体为诱导剂,采用浓度递增结合低剂量持续诱导方法诱导A549细胞株,建立MTX不同对映体耐药细胞系;倒置相差显... 目的诱导并建立耐氨甲蝶呤对映体的A549细胞株并观察耐药细胞系(L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549)的生物学特性。方法以MTX对映体为诱导剂,采用浓度递增结合低剂量持续诱导方法诱导A549细胞株,建立MTX不同对映体耐药细胞系;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;MTT法绘制细胞生长曲线;MTT法检测耐药细胞株的耐药指数;流式细胞仪检测细胞周期和细胞的分裂增殖能力。结果L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549耐药指数分别为6.0的和20.2。倒置相差显微镜观察细胞形态发生了改变;细胞生长曲线显示D-(-)-MTX/A549的增殖略慢于亲本细胞,而L-(+)-MTX/A549的增殖最慢;流式细胞仪检测细胞周期结果显示L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549耐药细胞株S期细胞数量减少(P<0.05),G0/G1期细胞增多(P<0.05);CFSE检测A549、L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549的MFI分别为(6.08±0.55)、(7.72±0.30)、(6.90±0.18)。两对映体细胞株间有明显手性差异。结论本研究建立了MTX两种对映体耐药细胞株,为进一步研究其耐药机制提供了一种实验模型。 展开更多

关键词 氨甲蝶呤 A549细胞 对映体 耐药性 肿瘤

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某三甲医院EB病毒感染的临床回顾性分析 被引量：9

3

作者 许大兵 孙余婕 沈佐君 《中华疾病控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期191-194,共4页

目的探讨某三甲医院一年来EB病毒(epstein-barr virus,EBV)感染的情况,分析常见病种的构成及临床特征,为EBV感染及相关疾病的防治提供科学的理论依据。方法回顾分析该院2015年10月~2016年9月采用荧光PCR法检测EBV核酸载量,并对检测结果... 目的探讨某三甲医院一年来EB病毒(epstein-barr virus,EBV)感染的情况,分析常见病种的构成及临床特征,为EBV感染及相关疾病的防治提供科学的理论依据。方法回顾分析该院2015年10月~2016年9月采用荧光PCR法检测EBV核酸载量,并对检测结果及患者的临床资料进行分析。结果 1 313例血浆标本中EBV脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)阳性标本314例,总体阳性检出率为23.91%,其中女性患者的阳性检出率为21.60%,男性为25.27%,男女不同性别的阳性检出率无差异(X^2=2.26,P=0.133)。在不同年龄段的EBVDNA阳性检出率出现两个高峰,分别为1~10岁和61~70岁。不同季节间的EBV阳性检出率也有不同,其中秋季最高为36.44%,冬季最低为13.00%。该院科室之间患者EBV的阳性检出率前五位的依次为:儿科(40.91%)、放疗科(39.30%)、血液科(18.50%)、感染科(16.98%)、重症加强护理病房(intensive care unit,ICU)(15.79%)。不同疾病的EBV阳性检出率不同。结论 EBV的阳性检出率与国内其他地区报道相似,有年龄、季节差异,无性别差异。EBV感染的临床表现复杂多样。 展开更多

关键词 疱疹病毒4型 人 感染 DNA

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双表型急性白血病的免疫分型 被引量：5

4

作者 宣柳 沈佐君 李筱青 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第6期705-706,共2页

关键词 白血病 免疫表型分型 流式细胞术

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Bcl-2家族在肿瘤进展和治疗中的意义 被引量：4

5

作者 朱园园(综述) 沈佐君(审校) 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2008年第10期726-728,共3页

Bcl-2家族对于线粒体途径细胞凋亡具有双重调控作用，其促凋亡蛋白与抑凋亡蛋白的比例与肿瘤形成、肿瘤耐药性的产生及预后密切相关。因此，Bcl-2家族成为肿瘤生物治疗中的重要靶点，针对Bcl-2家族的某些生物治疗手段和短肽、有机小分... Bcl-2家族对于线粒体途径细胞凋亡具有双重调控作用，其促凋亡蛋白与抑凋亡蛋白的比例与肿瘤形成、肿瘤耐药性的产生及预后密切相关。因此，Bcl-2家族成为肿瘤生物治疗中的重要靶点，针对Bcl-2家族的某些生物治疗手段和短肽、有机小分子等新药被开发应用于Bcl-2高表达肿瘤的治疗。 展开更多

关键词 基因 BCL-2 肿瘤 细胞凋亡

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BLMmRNA在白血病细胞中的表达及其临床意义 被引量：4

6

作者 张永娟 何晓东 +4 位作者 孙余婕 张白银 黄蓉 嵇金陵 沈佐君 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1130-1134,共5页

目的分析BLM基因在白血病骨髓细胞中的表达情况及其临床意义。方法收集2011年1月至12月安徽省立医院血液科住院和门诊随访的125例白血病患者骨髓标本为研究对象。其中包括59例慢性粒细胞白血病（CML），66例急性白血病（AL）。对照组为... 目的分析BLM基因在白血病骨髓细胞中的表达情况及其临床意义。方法收集2011年1月至12月安徽省立医院血液科住院和门诊随访的125例白血病患者骨髓标本为研究对象。其中包括59例慢性粒细胞白血病（CML），66例急性白血病（AL）。对照组为5例门诊非恶性血液病患者的骨髓标本，其中女性3例，男性2例，年龄在15岁至53岁。采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测了已通过细胞形态学和免疫分型检查骨髓细胞中BLMmRNA的表达情况，按患者年龄、性别、所患白血病类型、外周血白细胞计数情况、有无肝脾肿大、融合基因表达情况、染色体核型、是否初诊以及是否移植进行分组。回顾性分析BLM基因在各分组中的表达情况以及与以上各因素的相关性。采用，检验、单因素方差分析、t检验以及Pearson相关性检验进行统计学分析。结果BLM基因在各型白血病中均有表达。125例白血病患者骨髓标本中，BLM基因阳性表达71例，阴性表达54例，5例非恶性血液病患者的骨髓标本中均不表达。白血病患者骨髓细胞内BLM基因的表达在不同白细胞计数分组问以及融合基因分组间，差异有统计意义（矿值分别为14．730和22．399，P均〈0．05）。经治疗后的白血病患者BLM基因的表达水平（0．1788±0．1091）低于初诊（0．3276±0．2016）白血病患者，差异有统计学意义（t=3．937，P〈0．05）；移植后的患者BLM基因表达水平（0．1271±0．1009）低于未经过移植（0．2902±0．2034）的患者，差异具有统计学意义（t=2．061，P〈0．05）。Pearson相关性分析显示白血病骨髓细胞中BLM基因的表达与融合基因呈正相关（r=0．357，P〈0．01），并且与染色体核型呈正相关（r=0．279，P〈0．05）。结论BLM基因表达水平的测定可作为判断白血病患者病情严重程度和预后的指标，检测其水平可能为临 展开更多

关键词 白血病 RecQ解旋酶类 骨髓细胞 逆转录聚合酶链反应

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实时荧光定量PCR法检测MTX对映体耐药A549细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGSmRNA的表达 被引量：3

7

作者 孙利 何晓东 +6 位作者 孙余婕 许维东 李道静 张白银 张永娟 刘锐 沈佐君 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期722-726,共5页

目的建立实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞中FPGSmRNA表达的方法，研究MTX对映体[L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX]耐药细胞株中FPGS的基因表达差异，并用于观察白血病患者MTX治疗耐药前后FPGSmRNA表达水平的变化。方法用SYBRGreenI为荧光染料，... 目的建立实时荧光定量PCR检测肿瘤细胞中FPGSmRNA表达的方法，研究MTX对映体[L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX]耐药细胞株中FPGS的基因表达差异，并用于观察白血病患者MTX治疗耐药前后FPGSmRNA表达水平的变化。方法用SYBRGreenI为荧光染料，以β—actin作参照，建立检测FPGSmRNA的实时荧光定量PCR方法。根据Ct值、标准曲线相关系数、斜率、重复性曲线、熔解曲线、扩增效率曲线等进行方法学评价。并用该方法检测MTX对映体耐药细胞株及应用MTX耐药的14例白血病患者骨髓细胞中FPGSmRNA的表达。结果建立的标准曲线ct值与模板浓度有良好的线性关系，FPGS和β-actin标准曲线相关系数分别为0．9968和0．9987，斜率分别为-3．595和-3．740，批内CV为1．27％-2．95％，批间CV为3．82％；熔解曲线均呈单个特异峰，扩增效率相似（斜率为0．0217）；L．（＋）-MTX耐药细胞和D．（-）-MTX耐药细胞中FPGSmRNA相对含量分别为（3．51±0．66）和（0．16±0．01），A549亲本细胞（S）中FPGSmRNA相对含量为（1．00±0．31），差异有统计学意义（F=64．45，P〈0．01）；L-（＋）-MTX耐药细胞和D．（-）-MTX耐药细胞间FPGSmRNA相对含量差异有统计学意义（q=9．29，P〈0．01）。白血病患者应用MTX治疗耐药后，FPGSmRNA表达水平为（0．35±0．04），用药前为（1．00±0．44），差异有统计学意义（t=8．83，P〈0．01）。结论建立的实时荧光定量PCR检测FPGSmRNA的方法重复性好、特异度高，可用于FPGSmRNA含量分析。MTX诱导耐药后细胞株及白血病患者骨髓细胞中FPGSmRNA表达发生了变化，MTX2种对映体形式在细胞耐药机制中可能发挥了不同的作用。 展开更多

关键词 细胞系 肿瘤 白血病 甲氨蝶呤 肽合酶类 抗药性 肿瘤 聚合酶链反应 立体异构现象

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毛细管电泳免疫-激光诱导荧光术测定甲氨蝶呤对映体耐药A549细胞株中叶酰聚谷氨酸合成酶 被引量：3

8

作者 凡任芝 何晓东 +4 位作者 朱园园 李明 陶绍能 董林 沈佐君 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期924-928,共5页

目的为观察甲氨蝶呤（MTX）对映体诱导肺癌A549细胞株耐药后叶酰聚谷氨酸合成酶（folylpolyglutamate synthetase，FPGS）含量变化，建立一种用毛细管电泳免疫-激光诱导荧光术（CEIA-LIF）测定F＇PGS的方法，以便为深入探讨肿瘤耐药机... 目的为观察甲氨蝶呤（MTX）对映体诱导肺癌A549细胞株耐药后叶酰聚谷氨酸合成酶（folylpolyglutamate synthetase，FPGS）含量变化，建立一种用毛细管电泳免疫-激光诱导荧光术（CEIA-LIF）测定F＇PGS的方法，以便为深入探讨肿瘤耐药机制提供新的实验手段。方法实验分别选用耐药浓度为25μmol／L的L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX肺癌A549耐药细胞株，以MTX敏感的细胞株作对照，培养获取上述3株细胞，并粗提取FPGS做CEIA-LIF和免疫印迹（WB）实验；用异硫氰酸荧光素（FITC）标记FPGS抗体，与提取的FPGS进行免疫反应；然后采用CEIA-LIF，根据不同分子量蛋白具有不同的迁移时间，分离检测标记蛋白，检测L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX作用耐药前后3株肺癌A549细胞株中FPGS表达含量；同时用WB作对照，以评价CEIA-LIF的特异性和FPGS定量的准确性。结果CEIA-LIF分离标记FPGs抗体与免疫复合物的分离时间分别为7.1、8．9min，分离度（R）=4．5，在10min内即完成蛋白的分离和检测。经WB鉴定3株细胞液氮冻融裂解后离心提取液中组分与FIGS抗体无非特异性条带出现。CEIA-LIF测定敏感细胞株的检测下限为0．68mg／山细胞；而其检测25μmol／LL-（＋）-MTX和25μmol／LD-（-）-MTX诱导耐药细胞中FPGS的表达含量分别为对照组敏感细胞的46．59％和48．36％。结论本研究建立的CEIA-LIF检测FPGS法具有高效快速的特点，且具与WB类似的特异性；同时提高了检测的敏感度。L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX诱导耐药后细胞株中FPGS表达含量较敏感细胞株明显减少，证明MTX耐药细胞株FPGS表达含量受损。 展开更多

关键词 肺肿瘤 细胞系 肿瘤 甲氨蝶呤 立体异构现象 抗药性 肿瘤 肽合酶类 电泳 毛细管

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聚乙烯吡咯烷酮无胶筛分毛细管电泳法分离鉴定DNA片段 被引量：1

9

作者 伊茂礼 沈佐君 +1 位作者 何晓东 刘广印 《检验医学》 CAS 北大核心 2006年第3期205-209,共5页

目的在非涂层无胶筛分毛细管电泳中探讨一种简便快捷的分离鉴定DNA片段的新方法，以期更好的用于基因诊断。方法在非涂层无胶筛分毛细管电泳中，以聚乙烯吡咯烷酮（PVP）为筛分介质，用pUC19DNA／Mspl（HpaⅡ）标准DNA片段为实验对象，... 目的在非涂层无胶筛分毛细管电泳中探讨一种简便快捷的分离鉴定DNA片段的新方法，以期更好的用于基因诊断。方法在非涂层无胶筛分毛细管电泳中，以聚乙烯吡咯烷酮（PVP）为筛分介质，用pUC19DNA／Mspl（HpaⅡ）标准DNA片段为实验对象，通过调节分离缓冲液中筛分介质的浓度、电泳缓冲液的pH值、运行电压及毛细管的温度，优化出分离26～501bpDNA片段的最适条件。在此条件下分离了Y染色体无精症因子（AZF）区域4个位点的多重聚合酶链反应（PCR）扩增产物。结果PVP作为筛分介质在非涂层无胶筛分毛细管电泳中对于长度〈501bp的短链除了110和111bp外均获得良好的分离效果，且迁移时间与碱基对数目呈良好线性关系。不但对多重PCR扩增产物实施了好的分离，而且依据碱基对数目与迁移时间之间的线性关系，对其大小也进行了精确的推断。结论PVP是一种良好的筛分介质，运用其进行无胶筛分毛细管电泳对于遗传性疾病的诊断将更加快速、准确、简便、灵敏。 展开更多

关键词 聚乙烯吡咯烷酮 无胶筛分 脱氧核糖核酸 毛细管电泳

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甲氨蝶呤对映体诱导肺癌细胞耐药后引起血管内皮细胞分化差异的研究 被引量：2

10

作者 何晓东 胡世莲 +4 位作者 沈佐君 陶绍能 董林 朱园园 李明 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期690-694,共5页

目的研究甲氨蝶呤（MTX）对映体大剂量冲击作用肺癌A549细胞后，MTX对映体耐药细胞血管分化是否具有手性选择性。方法用大剂量冲击法诱导获得A549对映体耐药肺癌细胞，流式细胞双色分析细胞CD44／CD31以及P-170表达；皮下接种裸鼠，成... 目的研究甲氨蝶呤（MTX）对映体大剂量冲击作用肺癌A549细胞后，MTX对映体耐药细胞血管分化是否具有手性选择性。方法用大剂量冲击法诱导获得A549对映体耐药肺癌细胞，流式细胞双色分析细胞CD44／CD31以及P-170表达；皮下接种裸鼠，成瘤后取瘤体切片，进行CD34组化染色，计数新生微血管密度（MVD）。以A549亲本细胞（未获得耐药）作为对照组。结果分别建立耐药浓度为15μmol／L的L—MTX和D—MTX的A549耐药细胞株；它们与各自对映体的耐药指数分别为12．4±1．2和20．14-2．3；A549亲本细胞、L—MTX耐药细胞和D．MTX耐药细胞中：CD31’阳性率分别为55．5％±9．7％、32．9％±8．O％和91．9％±3．2％，差异有统计学意义（F=511．92，P=0．000）；P-170阳性率分别为85．5％±4．6％、71．5％±8．2％和87．0％±8．9％，L—MTX耐药细胞P-170的阳性率低于D．MTX耐药细胞（t=6．13，P=0．002）；3种细胞植入裸鼠成瘤后切片免疫标记CD34统计新生MVD，A549亲本细胞为3．6±1．2，L-MTX耐药细胞为7．24-1．7，D-MTX耐药细胞为55．9±11．9，D．MTX耐药细胞显著高于L—MTX耐药细胞（t=13．37，P=0．000）。结论MTX对映体诱导肺癌A549耐药细胞向血管内皮细胞分化能力不同，D—MTX耐药细胞经血管转移高于L．MTX耐药细胞，这提示MTX制剂中D型组分不能简单当成污染物而忽视，应尽量选用单-对映体的L-MTX药物制剂，减少D—MTX带来的副作用。 展开更多

关键词 抗药性 肿瘤 甲氨蝶呤 细胞分化 对映体

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CML患者TGF-β1 mRNA与bcr/abl^(P210)融合基因转录本表达的关系 被引量：2

11

作者 许大兵 孙余婕 沈佐君 《检验医学》 CAS 2016年第8期671-674,共4页

目的通过分析慢性粒细胞白血病(CML)患者转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA与bcr/abl^(P210)融合基因转录本(简称bcr/abl^(P210))的表达水平,探讨两者在CML发病过程中可能的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测73例CML患者外... 目的通过分析慢性粒细胞白血病(CML)患者转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA与bcr/abl^(P210)融合基因转录本(简称bcr/abl^(P210))的表达水平,探讨两者在CML发病过程中可能的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测73例CML患者外周血和骨髓中TGF-β1 mRNA及bcr/abl^(P210)的表达水平,以22名健康体检者作为正常对照组。TGF-β1 mRNA与bcr/abl^(P210)的相关性采用Pearson相关分析。结果 CML患者骨髓和外周血样本中TGF-β1 mRNA、bcr/abl^(P210)的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组外周血中TGF-β1 mRNA的表达水平明显高于CML患者骨髓中TGF-β1 mRNA的表达水平(P<0.05),正常对照组TGF-β1 mRNA的表达水平是CML组的11.39倍。相关性分析显示CML患者TGF-β1 mRNA与bcr/abl^(P210)呈正相关(r=0.53,P<0.01)。结论骨髓TGF-β1 mRNA有可能作为一种新的CML诊疗指标。 展开更多

关键词 转化生长因子-β1 bcr/ablP210 融合基因 转录本

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非涂渍毛细管无胶筛分电泳诊断Y染色体AZF区域微缺失 被引量：1

12

作者 沈佐君 伊茂礼 +4 位作者 刘圣英 何晓东 刘雨生 童先宏 郭通航 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1181-1184,共4页

目的建立一种快速毛细管电泳检测Y染色体AZF区域微缺失诊断男性不育症的方法。方法利用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作为筛分介质及其兼有的“动态”涂渍作用,采用毛细管非涂渍无胶筛分电泳与多重聚合酶链反应(PCR)相结合技术,配以高灵敏度的激... 目的建立一种快速毛细管电泳检测Y染色体AZF区域微缺失诊断男性不育症的方法。方法利用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作为筛分介质及其兼有的“动态”涂渍作用,采用毛细管非涂渍无胶筛分电泳与多重聚合酶链反应(PCR)相结合技术,配以高灵敏度的激光诱导荧光检测器,对Y染色体AZF(azoospermiafactor)区域微缺失病人15个序列标签位点进行直接基因诊断。结果检测38例严重少精或无精症患者,发现10例存在缺失,缺失率为26.3%。对15例已婚有子女的正常人进行了对照检测,其中缺失率为0%,经χ2检验P<0.01,提示严重少精和无精与正常对照组的AZF区域微缺失率差异有统计学意义,明显高于正常对照组。同时,对AZF四个亚区STS微缺失率进行比较,分别将10例AZF微缺失群体中确定AZFc区的缺失率与另三个区域的缺失率进行分别统计分析,发现AZFc占63.4%,AZFa占4.0%,AZFb占15.2%,AZFd占17.4%,χ2检验P<0.05,提示AZFc区的缺失率与另三个区域差异有统计学意义,AZFc区缺失率明显高于AZFa、AZFb及AZFd区。结论毛细管非涂渍无胶筛分电泳与传统的凝胶琼脂糖电泳相比,本方法在分离速度、分辨率及实验成本方面均有较大改善,其与多重PCR相结合使对严重少精和无精症的诊断更加准确、可靠。 展开更多

关键词 电泳 染色体 聚合酶链反应

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氨甲蝶呤耐药细胞内整体DNA甲基化水平检测方法的建立及其应用 被引量：1

13

作者 李明 胡世莲 +5 位作者 何晓东 陶绍能 董林 朱园园 吴剑锋 沈佐君 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期204-208,共5页

目的建立一种简便快速检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法，以用于临床甲基化诊断。方法采用高效毛细管电泳技术，以pH9．6的48mmol／L碳酸氢钠溶液[含60mmoL／L十二烷基硫酸钠（SDS）]为分离缓冲液，检测波长为256nm，在20kV电压下，0... 目的建立一种简便快速检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法，以用于临床甲基化诊断。方法采用高效毛细管电泳技术，以pH9．6的48mmol／L碳酸氢钠溶液[含60mmoL／L十二烷基硫酸钠（SDS）]为分离缓冲液，检测波长为256nm，在20kV电压下，0．7psi压力进样时间5s，对2’-脱氧胞苷（dC）、5-甲基-2’-脱氧胞苷（mdC）、2’-脱氧腺苷（dA）、2’-脱氧胸苷（dT）、2’-脱氧鸟苷（dG）5种物质进行分离。在此基础上检测氨甲蝶呤（MTX）诱导的肺癌A549耐药细胞株内整体DNA甲基化水平。结果通过不断优化分离缓冲液中SDS浓度（40、60、80mmol／L）、pH值（9．4、9．6、9．8）、分离电压（15、17、19、20、22kV）、进样时间（5、10、15、20、30S）和毛细管温度（15、20、25、30℃），建立高效毛细管电泳检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法，可在10min内实现dC、mdC、dA、dT、dG的完全分离，其日内变异系数（CV）〈0．2％，日间CV〈2％，最低检出限为2μmol／L。检测肺癌A549亲本细胞甲基化水平为（4．80±0．52）％；而不同浓度（15、30、40μmol／L）MTX诱导耐药A549细胞株的甲基化水平分别为（4．20±0．44）％、（3．70±0．36）％、（3．10±0．35）％。结论建立高效毛细管电泳检测整体DNA甲基化水平的方法具有高效、快速、简单、灵敏的特点；MTX耐药细胞株内整体DNA甲基化水平随着耐药浓度的增加明显降低。 展开更多

关键词 氨甲蝶呤 DNA甲基化 电泳 毛细管

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柱上样本堆积毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤及其六种代谢产物 被引量：1

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作者 李道静 何晓东 +3 位作者 李明 孙利 许维东 沈佐君 《检验医学》 CAS 北大核心 2011年第10期667-671,共5页

目的建立柱上堆积高效毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤(MTX)及其6种代谢产物氨甲蝶呤多聚谷氨酸链(MTXPG)的方法。方法采用高效毛细管电泳技术,以75 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH值7.40)作为分离介质,用水和乙腈(V/V=1∶1)作溶剂重组残留... 目的建立柱上堆积高效毛细管电泳法同时检测细胞内氨甲蝶呤(MTX)及其6种代谢产物氨甲蝶呤多聚谷氨酸链(MTXPG)的方法。方法采用高效毛细管电泳技术,以75 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH值7.40)作为分离介质,用水和乙腈(V/V=1∶1)作溶剂重组残留样本的方法进行柱上样本堆积,0.5 psi压力进样,进样时间50 s,在分离电压28 kV、检测波长300 nm条件下对MTX和MTXPG进行分离。在此基础上,检测细胞内MTX及其代谢产物MTXPG的含量。结果通过不断改变分离缓冲液中异丙醇(5%、8%、10%,V/V)和羟丙基-β-环糊精(hp-β-CD)浓度(20、25、30 mmol/L),发现在含8%异丙醇、25 mmol/L hp-β-CD的缓冲液条件下,30 min内实现7种组分的完全分离。用水和乙腈(V/V=1∶1)作溶剂重组残留样本进行柱上样本堆积的方法可使检测灵敏度提高10倍。结论建立柱上样本堆积高效毛细管电泳法可同时检测细胞内MTX及其代谢产物MTXPG。该方法具有高效、快速、简便、高灵敏度的特点。 展开更多

关键词 氨甲蝶呤 氨甲蝶呤多聚谷氨酸链 毛细管电泳法 柱上样本堆积

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检测细菌性阴道病干化学法的建立及评价 被引量：1

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作者 刘锐 沈佐君 万士林 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第6期738-740,共3页

利用肉眼观察反应产物颜色的变化探讨研发试剂与酶标准品的最佳反应条件,在pH值6.2,37℃,15 min,MSTT为10μg时,研发干片与酶标准品达到最佳反应。临床实验中,将研发试剂、细菌性阴道病(BV)BLUE、国产试剂盒分别对临床标本进行对比检测... 利用肉眼观察反应产物颜色的变化探讨研发试剂与酶标准品的最佳反应条件,在pH值6.2,37℃,15 min,MSTT为10μg时,研发干片与酶标准品达到最佳反应。临床实验中,将研发试剂、细菌性阴道病(BV)BLUE、国产试剂盒分别对临床标本进行对比检测,研发试剂与BV BLUE对BV的检测效果差异无统计学意义,符合率为97%。而国产A试剂盒与BV BLUE对BV的检测效果差异有统计学意义(P<0.01,χ2=0.390,r=0.42),符合率仅为67%。 展开更多

关键词 细菌性阴道病 唾液酸酶 干化学法

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甲氨蝶呤对映体耐药A549细胞侵袭、转移能力的差异分析 被引量：1

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作者 陶绍能 何晓东 +1 位作者 沈佐君 董林 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第35期2509-2512,共4页

目的探讨甲氨蝶呤（MTX）对映体耐药A549细胞的体外运动能力、浸润侵袭能力差异，从而说明MTX对映体在肿瘤细胞耐药后的侵袭转移过程中的差异。方法采用浓度递增结合低剂量持续诱导，获得耐受15μmol／LMTX对映体的细胞系，分别命名为L... 目的探讨甲氨蝶呤（MTX）对映体耐药A549细胞的体外运动能力、浸润侵袭能力差异，从而说明MTX对映体在肿瘤细胞耐药后的侵袭转移过程中的差异。方法采用浓度递增结合低剂量持续诱导，获得耐受15μmol／LMTX对映体的细胞系，分别命名为L-（＋）-MTX／A549、D．（-）-MTX／A549；用MTT法测定其耐药指数；通过平板划痕实验反映D-（-）-MTX／A549和L-（＋）．MTX／A549细胞移动能力；采用双层软琼脂克隆形成实验检测D-（-）．MTX／A549组、L-（＋）．MTX／A549组细胞的克隆形成率和集落形成的大小；应用transwell小室实验检测3组细胞体外侵袭能力。结果L-（＋）-MTX／A549、D-（-）-MTX／A549耐药指数分别为（6．1±1．0）和（20．3±1．8）。平板划痕实验72h后L．（＋）-MTX／A549细胞进入划痕区的数量少于D-（-）-MTX／A549细胞；软琼脂实验发现D-（-）．MTX／A549组、L．（＋）-MTX／A549组以及亲本细胞的集落数分别为（50±7）个克隆、（44±6）个克隆、（52±7）个克隆以及集落形成率分别为（1．68％±0．23％）、（I．49％±0．18％）、（1．73％-t-O．23％），3组之间差异无统计学意义（P〉0．05），但D．（-）-MTX／A549组细胞的集落形状大小明显大于L-（＋）-MTX／A549细胞；transwell小室检测D-（-）-MTX／A549、L-（＋）-MTX／A549以及亲本细胞的体外浸润侵袭穿过人工基底膜Matrigel的细胞数分别为（267-4-30）、（106±16）、（134±16）；3组实验的数据均显示D-（-）-MTX／A549组和L．（＋）-MTX／A549组以及亲本细胞组差异有统计学意义（P〈0．05），而L-（＋）-MTX／A549组与亲本细胞组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论D-（-）-MTX诱导的非小细胞肺癌A549耐药细胞在体外运动、浸润侵袭力均大于L-（＋）．MTX耐药细胞，从而说明MTX对映体耐药细胞后细胞的转移力有差异。 展开更多

关键词 甲氨蝶呤 对映体 抗药性 肿瘤 肿瘤侵袭

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