建立提升医学院校青年教师教学能力机制的分析 被引量：6

1

作者 李洋 范礼斌 《基础医学教育》 2014年第1期70-72,78,共4页

青年教师是目前高校教育教学的主力军,他们的教学能力直接决定了整个高等教育的质量和水平。然而,目前我国教育体系中存在的诸多体制性问题以及医学院校基础医学教育中的一些学科特点都影响了高校青年教师教学能力的提升。文章以一个医... 青年教师是目前高校教育教学的主力军,他们的教学能力直接决定了整个高等教育的质量和水平。然而,目前我国教育体系中存在的诸多体制性问题以及医学院校基础医学教育中的一些学科特点都影响了高校青年教师教学能力的提升。文章以一个医学院校青年教师的视角探讨了其中部分原因并试探性地提出了一些解决方法,以期促进医学院校青年教师教学能力的提高。 展开更多

关键词 青年教师 教学能力 医学院校

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BMSC-CM通过抑制Notch1信号通路减轻H_2O_2诱导的神经干细胞凋亡 被引量：4

2

作者 牛杨 申才良 +1 位作者 宋旆文 刘晓颖 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第6期845-850,共6页

目的探讨骨髓间充质干细胞条件培养基(BMSCCM)对氧化应激损伤的神经干细胞(NSCs)的保护作用,以及Notch1信号通路在其中所发挥的作用。方法通过使用过氧化氢(H_2O_2)来模拟氧化应激环境,采用流式细胞仪检测NSCs的凋亡率。Western blot法... 目的探讨骨髓间充质干细胞条件培养基(BMSCCM)对氧化应激损伤的神经干细胞(NSCs)的保护作用,以及Notch1信号通路在其中所发挥的作用。方法通过使用过氧化氢(H_2O_2)来模拟氧化应激环境,采用流式细胞仪检测NSCs的凋亡率。Western blot法检测Notch1蛋白、Hes1蛋白、含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶3蛋白(Caspase-3)、Caspase-9、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白和B细胞淋巴瘤蛋白2(Bcl-2)的表达量。结果结果表明,BMSC-CM可以降低H_2O_2引起的氧化应激环境的损害。BMSC-CM可以抑制Notch1信号通路,提高神经干细胞的存活率。结论 BMSCCM可以通过抑制Notch1信号通路来中和氧化应激损伤对NSCs细胞凋亡的影响。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞条件培养基 神经干细胞 凋亡 氧化应激 NOTCH信号通路

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FoxO1蛋白在癌细胞质中的差异表达及其功能研究 被引量：4

3

作者 陈洁 耿慧武 +3 位作者 王凤杰 陈姝文 刘晓颖 范晓云 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第12期1847-1852,共6页

目的探讨叉形头转录因子O亚型1(FoxO1)蛋白在肺癌和食管癌细胞中的差异表达及分布特点,并初步了解其亚细胞定位与功能的关系。方法采用免疫组化的方法评判收集到的临床术后肺癌和食管癌组织细胞质中FoxO1蛋白的表达情况;统计学方法分析... 目的探讨叉形头转录因子O亚型1(FoxO1)蛋白在肺癌和食管癌细胞中的差异表达及分布特点,并初步了解其亚细胞定位与功能的关系。方法采用免疫组化的方法评判收集到的临床术后肺癌和食管癌组织细胞质中FoxO1蛋白的表达情况;统计学方法分析细胞质中FoxO1蛋白表达水平与患者临床病理各指标间的相关性;免疫荧光实验确定FoxO1在肺癌细胞系A549和食管癌细胞系Eca109中的表达及定位,siRNA干扰技术敲低FoxO1在上述两种细胞中的表达,随后进行克隆形成实验研究FoxO1对肿瘤细胞增殖的影响。结果FoxO1在肺癌组织细胞质中的表达高于相应癌旁组织(P<0.05),但在肺鳞癌和肺腺癌细胞质中的表达差异无统计学意义;FoxO1在食管癌组织细胞质中的表达高于相应癌旁组织,且与肿瘤分期呈相关性(P<0.05);FoxO1敲低对肿瘤细胞A549及Eca109的增殖具有抑制作用。结论FoxO1蛋白在肺癌及食管癌细胞质中表达上调,而在细胞核中的表达减少;FoxO1在肿瘤细胞质中的表达上调可能促进细胞增殖。 展开更多

关键词 FOXO1 肺癌 食管癌 免疫组化 差异表达

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受体相互作用蛋白激酶1在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义 被引量：2

4

作者 崔凯 耿慧武 +5 位作者 姬强 朱克超 卢晨 夏杰 刘晓颖 于在诚 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第8期1175-1179,共5页

目的探讨受体相互作用蛋白激酶1(RIP1)蛋白在食管鳞癌中的表达情况及临床意义。方法应用Western blot法和免疫组织化学法检测并且分析100例食管鳞癌患者的癌组织、相应癌旁组织和对应正常黏膜组织中RIP1的表达情况。结果 71%食管鳞癌组... 目的探讨受体相互作用蛋白激酶1(RIP1)蛋白在食管鳞癌中的表达情况及临床意义。方法应用Western blot法和免疫组织化学法检测并且分析100例食管鳞癌患者的癌组织、相应癌旁组织和对应正常黏膜组织中RIP1的表达情况。结果 71%食管鳞癌组织中RIP1蛋白的表达水平高于对应癌旁组织和正常黏膜组织,20%食管鳞癌癌旁组织RIP1蛋白的表达水平高于对应癌组织和正常食管黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05)。食管鳞癌组织中高表达的RIP1蛋白水平与其TNM分期、病理分级、有无淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄无关。癌旁组织中高表达的RIP1蛋白水平与肿瘤浸润深度、TNM分期有关(P<0.05),与性别、年龄、有无淋巴结转移及病理分级无关。结论RIP1蛋白在食管鳞癌中的高表达可能与肿瘤的病理分级、TNM分期及预后有关,对于食管鳞癌的发生发展有一定的预测作用。 展开更多

关键词 食管肿瘤 鳞状细胞 免疫组织化学 受体相互作用蛋白激酶1

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新形势下病原微生物与免疫学教学探新 被引量：2

5

作者 乔静 《科技视界》 2022年第11期36-39,共4页

病原微生物与免疫学课程涵盖了复杂多样的微生物学和免疫学知识,以及疾病诊断、预防等方面的相关知识,是生物学和临床医学专业课程中一门重要的基础课程,对相关领域的人才培养至关重要。对课程教学内容及方法方面的改革探索一直是高校... 病原微生物与免疫学课程涵盖了复杂多样的微生物学和免疫学知识,以及疾病诊断、预防等方面的相关知识,是生物学和临床医学专业课程中一门重要的基础课程,对相关领域的人才培养至关重要。对课程教学内容及方法方面的改革探索一直是高校专业教学从业者关注的话题,尤其是在今年新冠肺炎疫情的影响下,病原微生物与免疫学领域的专业人才愈发稀缺和重要。在这种新形势下,文章对该课程的教学内容、教学方法及教学成果评价三个方面的改革探索进行分析改良,以促进教学效率,培养出适合职业岗位需求的人才。 展开更多

关键词 病原微生物与免疫学 教学改革 新型冠状肺炎病毒 循证医学

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条件培养基对神经干细胞增殖与分化作用的影响 被引量：2

6

作者 杨昆 申才良 +3 位作者 宋旆文 刘晓颖 徐鹏 张峰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第6期735-739,共5页

目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)条件培养基对体外培养神经干细胞(NSCs)增殖与分化作用的影响。方法用BMSCs条件培养基分别在增殖与分化条件下培养NSCs,观察NSCs形态变化。用MTT法及NSCs球数目和直径的统计分析了解NSCs增殖情况,... 目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)条件培养基对体外培养神经干细胞(NSCs)增殖与分化作用的影响。方法用BMSCs条件培养基分别在增殖与分化条件下培养NSCs,观察NSCs形态变化。用MTT法及NSCs球数目和直径的统计分析了解NSCs增殖情况,同时行免疫荧光及Western blot法鉴定其分化情况。结果原代培养获得大量未分化且悬浮生长的NSCs球,并能分化为神经元细胞、星形胶质细胞及少突胶质细胞。BMSCs条件培养基组能够促进NSCs球的吸附贴壁,但与对照组相比光密度(OD)值差异无统计学意义,NSCs球数目和直径差异亦无统计学意义。另外,BMSCs条件培养基组少突胶质细胞特异性蛋白MBP表达量高于对照组(P<0.05),星形胶质细胞特异性蛋白GFAP表达量低于对照组(P<0.05),而神经元特异性蛋白MAP-2表达量未见明显异常。结论大鼠BMSCs条件培养基促进NSCs向少突胶质细胞方向分化,但不抑制其增殖作用。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 条件培养基 神经干细胞 增殖 分化

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Sedlin突变体的表达及其与RB1在细胞中的共定位 被引量：2

7

作者 何叶 潘林鑫 +2 位作者 张永 范礼斌 刘晓颖 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第10期1526-1531,共6页

目的构建脊椎骨骺发育不良蛋白(Sedlin)的缺失突变和点突变体质粒,检测其在细胞内的表达、定位及其与RB1蛋白的共定位情况,为后续研究蛋白质相互作用提供依据。方法以Sedlin全长cDNA序列为模板,扩增目的基因序列,连接至表达载体,构建3... 目的构建脊椎骨骺发育不良蛋白(Sedlin)的缺失突变和点突变体质粒,检测其在细胞内的表达、定位及其与RB1蛋白的共定位情况,为后续研究蛋白质相互作用提供依据。方法以Sedlin全长cDNA序列为模板,扩增目的基因序列,连接至表达载体,构建3个原核表达质粒,即pGEX-3X-SedlinN/Y115A/Y115F和相应的真核表达质粒,即pCDGFP-SedlinN/Y115A/Y115F。分别转化pGEX-3X-SedlinN/Y115A/Y115F到大肠杆菌BL21感受态细胞中,IPTG诱导表达、谷胱甘肽琼脂糖球珠纯化后进行SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色法检测其表达情况;分别转染pCDGFP-SedlinN/Y115A/Y115F于HEK 293T细胞,Western blot法检测相关蛋白在真核细胞中的表达情况;分别单转pCDGFP-SedlinN/Y115A/Y115F以及将上述质粒与pDNA3.1-FLAG-RB1共转到COS7细胞中,进行免疫荧光制片,观察其在真核细胞内的定位情况。结果测序结果显示pGEX-3X-SedlinN/Y115A/Y115F和pCDGFP-SedlinN/Y115A/Y115F重组质粒构建成功;考马斯亮蓝染色显示融合蛋白GST-SedlinN/Y115A/Y115F在BL21细胞中能够大量表达;Western blot结果显示GFP-SedlinN/Y115A/Y115F在HEK 293T细胞中能够高效表达;免疫荧光结果显示GFP-SedlinN/Y115A/Y115F蛋白在COS7细胞的细胞质和细胞核中均有分布,并与RB1蛋白存在明显的核内共定位。结论人Sedlin及其突变体在BL21菌株和HEK 293T细胞中均能有效表达;在COS7细胞中,Sedlin主要表达于细胞核,而Sedlin突变体除在细胞核中表达外,在细胞质中也有相当量的表达,Sedlin及其突变体均与RB1蛋白共定位,显示Sedlin羧基端以及NPFY基序中的Y磷酸化与否并不影响与RB1蛋白的共定位。 展开更多

关键词 突变体 质粒构建 蛋白表达 免疫荧光

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人EBI3蛋白及其突变体的表达及定位研究 被引量：1

8

作者 邢雪梅 耿慧武 +5 位作者 潘林鑫 刘泽宇 姚亮 邓欢欢 刘晓颖 范礼斌 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第11期1573-1578,共6页

目的 研究人EB病毒诱导的基因3（EBI3）及其突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位差异及其原因。方法 基于NCBI数据库中人EBI3氨基酸的序列分析,利用分子克隆技术构建人EBI3真核表达质粒pcDNA3.1-EBI3-FLAG、单独包含氨基端或羧基端Ⅲ型... 目的 研究人EB病毒诱导的基因3（EBI3）及其突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位差异及其原因。方法 基于NCBI数据库中人EBI3氨基酸的序列分析,利用分子克隆技术构建人EBI3真核表达质粒pcDNA3.1-EBI3-FLAG、单独包含氨基端或羧基端Ⅲ型纤连蛋白（FN3）结构域的缺失突变体的表达质粒pcDNA3.1-EBI3（1~135）-FLAG和pcDNA3.1-EBI3（125~230）-FLAG以及第210位天冬氨酸（Asp）点突变体Asp210的表达质粒pcDNA3.1-EBI3-D210A-FLAG;Westernblot方法检测EBI3及其突变体在HEK293T细胞中的表达;免疫荧光实验观察人EBI3及各突变体在COS7细胞中的定位。结果 成功构建了下游携带FLAG标签的人EBI3及其突变体的真核表达质粒;Westernblot结果显示重组蛋白均能在HEK293T细胞中稳定表达;经激光共聚焦显微镜观察,EBI3及其缺失突变体在COS7细胞的表达位置发生明显变化。结论 人EBI3及其突变体真核表达质粒均能在HEK293T、COS7细胞中成功表达;人EBI3缺失突变体在COS7细胞中的定位发生明显变化,氨基端结构域可能在EBI3蛋白的正确定位中发挥重要作用;EBI3蛋白的第210位Asp的突变影响了其在细胞内的定位。 展开更多

关键词 EBI3 质粒构建 WESTERNBLOT 免疫荧光

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MiR-29b-3p在膀胱癌化疗耐受机制中的作用 被引量：1

9

作者 李洋 梁瑜 《皖南医学院学报》 CAS 2015年第2期117-121,共5页

目的:探讨miR-29b-3p在膀胱癌化疗耐受机制中的作用。方法:通过对多药敏感的膀胱癌细胞株5637及多药耐受的膀胱癌细胞株H-bc进行microRNA测序分析,miR-29b-3p作为表达差异较为明显的候选microRNA被挑选进行下一步研究。分别合成并转染mi... 目的:探讨miR-29b-3p在膀胱癌化疗耐受机制中的作用。方法:通过对多药敏感的膀胱癌细胞株5637及多药耐受的膀胱癌细胞株H-bc进行microRNA测序分析,miR-29b-3p作为表达差异较为明显的候选microRNA被挑选进行下一步研究。分别合成并转染miR-29b-3p的mimic或antagomiR序列以提高或抑制其细胞中的表达水平。应用MTT法检测膀胱癌细胞中miR-29b-3p及其下游基因DNMT3A表达水平改变后对于多种化疗药物杀伤敏感性的改变。结果:qRT-PCR验证表明miR-29b-3p在5637中表达水平低于H-bc(1.00∶4.41)。5637细胞中转染mimic提高其表达后,细胞对于丝裂霉素诱发的死亡比例上升了37%,而H-bc细胞中转染antagomiR后,对于IC50剂量的丝裂霉素诱发的死亡比例下降了19%。作为miR-29b-3p的下游基因,DNMT3A的表达抑制也可以受到miR-29b-3p的调控。在5637细胞中转染其siRNA抑制表达后,同样可以提高细胞对于丝裂霉素的耐受。结论:miR-29b-3p可能通过抑制其靶基因DNMT3A促进了膀胱癌对于丝裂霉素的耐受。 展开更多

关键词 DNMT3A miR-29b-3p 化疗耐受 膀胱癌

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胞内氯离子通道蛋白在单增李斯特菌感染的炎性小体活化中的作用 被引量：1

10

作者 张连军 陈晨 +4 位作者 黄俊松 姬强 耿慧武 李新颖 刘晓颖 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第10期1483-1486,共4页

目的探究胞内氯离子通道蛋白(CLICs)在单增李斯特菌(L.monocytogenes)感染的巨噬细胞炎性小体活化中的作用。方法原代培养小鼠来源的骨髓巨噬细胞,加入CLICs抑制剂IAA94用以抑制CLICs活性,感染L.monocytogenes,并分别通过ELISA、Western... 目的探究胞内氯离子通道蛋白(CLICs)在单增李斯特菌(L.monocytogenes)感染的巨噬细胞炎性小体活化中的作用。方法原代培养小鼠来源的骨髓巨噬细胞,加入CLICs抑制剂IAA94用以抑制CLICs活性,感染L.monocytogenes,并分别通过ELISA、Western blot方法检测细胞培养上清液、细胞裂解液中白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,研究CLICs对感染细胞炎性小体的活化作用。结果ELISA实验显示IAA94处理的巨噬细胞在L.monocytogenes感染后释放的IL-1和乳酸脱氢酶(LDH)浓度下降;Western blot结果显示IAA94对L.monocytogenes感染引起的NOD样受体蛋白3(NLRP3)表达无影响。结论CLICs促进L.monocytogenes感染的炎性小体的活化,但可能不通过NLRP3炎性小体通路,具体机制有待进一步研究。 展开更多

关键词 氯离子通道蛋白 炎性小体 单增李斯特菌

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RBM25在结直肠癌中的表达及其对细胞增殖的影响 被引量：1

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作者 王凤杰 郭爱军 +6 位作者 龚治忠 冯成 纪奥强 董子鉴 李超 刘刚 刘晓颖 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第11期1713-1718,共6页

目的探究RNA结合基序蛋白25(RBM25)在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞功能的影响。方法利用TCGA数据库分析RBM25在结直肠癌和正常结肠组织中的表达差异及RBM25表达水平与患者预后之间的关系;分别采用qRT-PCR和Western blot检测结... 目的探究RNA结合基序蛋白25(RBM25)在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞功能的影响。方法利用TCGA数据库分析RBM25在结直肠癌和正常结肠组织中的表达差异及RBM25表达水平与患者预后之间的关系;分别采用qRT-PCR和Western blot检测结直肠癌组织中RBM25在mRNA和蛋白水平的表达情况。将RBM25-siRNAs转染结直肠癌细胞系HCT 116,采用CCK-8实验、克隆形成实验检测RBM25敲低对结直肠癌细胞生长、增殖的影响;利用TCGA数据库分析RBM25 mRNA表达水平与结直肠癌患者预后之间的相关性。结果对TCGA数据库分析显示,RBM25 mRNA在结直肠癌与正常组织的表达差异无统计学意义(P>0.05),但RBM25 mRNA水平与患者的预后呈负相关(P<0.05);qRT-PCR结果显示RBM25 mRNA在结直肠癌患者癌组织中高表达,但差异无统计学意义(P>0.05),Western blot结果显示RBM25蛋白在结直肠癌组织中高表达(P<0.05);RBM25-siRNAs敲低导致HCT 116细胞生长、增殖能力下降(P<0.05)。结论RBM25蛋白在结直肠癌组织中高表达,并促进结肠癌细胞的生长、增殖,提示RBM25可能与结直肠癌的发生、发展相关。 展开更多

关键词 结直肠癌 RBM25 增殖 差异表达

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科学史在“遗传学”教学中的价值及实施策略 被引量：1

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作者 刘刚 《科教文汇》 2015年第31期52-53,共2页

科学史是一种宝贵的教育资源,其教育价值不仅能够增加教学时的兴趣,还能够介绍科学知识本身及其产生的背景,并且能够促进遗传学知识体系的建构。在遗传学教学中适当穿插科学史,使学生在潜移默化中掌握科学知识,学会科学的思维和研究方法... 科学史是一种宝贵的教育资源,其教育价值不仅能够增加教学时的兴趣,还能够介绍科学知识本身及其产生的背景,并且能够促进遗传学知识体系的建构。在遗传学教学中适当穿插科学史,使学生在潜移默化中掌握科学知识,学会科学的思维和研究方法,从而可以全面提高学生学习遗传学的效率。 展开更多

关键词 科学史 “遗传学”教学 实施策略

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研究生细胞生物学教学改革的实践与思考 被引量：1

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作者 刘晓颖 牛利华 +2 位作者 姚华 李洋 范礼斌 《基础医学教育》 2014年第12期1000-1002,共3页

研究生教育是我国培养高层次人才的主要环节,注重培养学生解决问题的探索精神和创新能力是研究生教育的基本特征。文章深入探讨了研究生细胞生物学课程教学中,在激发研究生科研兴趣、提高科研素养和创新能力方面所做的改革并分析存在的... 研究生教育是我国培养高层次人才的主要环节,注重培养学生解决问题的探索精神和创新能力是研究生教育的基本特征。文章深入探讨了研究生细胞生物学课程教学中,在激发研究生科研兴趣、提高科研素养和创新能力方面所做的改革并分析存在的问题,旨在促进医学教育质量的提高。 展开更多

关键词 细胞生物学 教学改革 课程体系设置

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ARAP3-VAV2新结合方式鉴定与功能分析

14

作者 徐光生 许文娟 +1 位作者 宋雪燕 王峰松 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第1期27-32,共6页

目的探索腺苷二磷酸糖基化因子6的鸟苷三磷酸酶激活蛋白3(ARAP3)与VAV鸟苷交换因子2(VAV2)新的作用方式及可能的生理功能。方法通过构建VAV2和ARAP3的突变体,在人子宫颈癌细胞(HeLa细胞)中共转VAV2的野生型和APAP3的突变体或者在人胚胎... 目的探索腺苷二磷酸糖基化因子6的鸟苷三磷酸酶激活蛋白3(ARAP3)与VAV鸟苷交换因子2(VAV2)新的作用方式及可能的生理功能。方法通过构建VAV2和ARAP3的突变体,在人子宫颈癌细胞(HeLa细胞)中共转VAV2的野生型和APAP3的突变体或者在人胚胎肾细胞(HEK-293T细胞)中共转ARAP3的野生型和VAV2的突变体,免疫共沉淀揭示二者的相互作用方式;在HeLa细胞中分别过表达VAV2和ARAP3野生型或突变体,荧光标记实验观察它们对纤维状肌动蛋白(F-actin)的调控作用。结果除了肉瘤基因同源2(SH2)结构域以外,VAV2的N端(1-660氨基酸)区域亦能介导其与ARAP3的相互作用,HeLa细胞中过表达VAV2和ARAP3均能影响细胞内F-actin的形成。结论 VAV2多个结构域均能介导其与ARAP3相互作用,两者之间的相互作用可能是促进大鼠肉瘤同源癌基因A(Rho A)活性的动态变化或循环,从而调节细胞内F-actin动态性以及肿瘤细胞的迁移和侵染能力。 展开更多

关键词 ARAP3 VAV2 磷酸化 F-ACTIN

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RACK1及其缺失突变体与CLIC1的共定位研究

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作者 王蓓华 朱亮亮 +1 位作者 刘晓颖 范礼斌 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第11期1543-1547,共5页

目的运用分子克隆技术构建活化蛋白激酶C受体1(RACK1)突变体的真核表达质粒,进行RACK1突变体的表达、定位及其与胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)蛋白的共定位研究,为其进一步的功能研究奠定基础。方法以RACK1全长c DNA序列为模板,构建真核... 目的运用分子克隆技术构建活化蛋白激酶C受体1(RACK1)突变体的真核表达质粒,进行RACK1突变体的表达、定位及其与胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)蛋白的共定位研究,为其进一步的功能研究奠定基础。方法以RACK1全长c DNA序列为模板,构建真核表达质粒pc DNA3.1-RACK1-N(1-138)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1-C(130-317)-FLAG;Western blot法检测突变体在哺乳动物细胞中的表达;用免疫荧光技术了解突变体蛋白在哺乳动物细胞中的共定位情况。结果成功构建了RACK1突变体的真核表达质粒;Western blot法检测到蛋白主要在胞质中表达,核内有部分表达;免疫荧光实验表明,RACK1及突变体蛋白主要定位在胞质与核膜,细胞核中也有少量表达,与CLIC1蛋白存在共定位。结论成功构建了RACK1缺失突变体,并在真核细胞中成功表达;RACK1及突变体与CLIC1蛋白在哺乳动物细胞中均存在不同程度的共定位,蛋白之间可能存在相互作用,为RACK1蛋白的功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 RACK1 质粒构建 转染 免疫荧光 Western BLOT

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人类胞内氯离子通道蛋白3在原核细胞及真核细胞内的表达

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作者 李春雨 潘林鑫 +1 位作者 刘晓颖 范礼斌 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第9期1202-1205,共4页

目的研究人类胞内氯离子通道蛋白3(CLIC3)在真核细胞中的定位和表达,及其GST融合蛋白在原核细胞中的表达。方法以含人CLIC3的全长cDNA序列的质粒为模板,PCR扩增CLIC3片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-CLIC3-FLAG,检测其定位及表达;构建原... 目的研究人类胞内氯离子通道蛋白3(CLIC3)在真核细胞中的定位和表达,及其GST融合蛋白在原核细胞中的表达。方法以含人CLIC3的全长cDNA序列的质粒为模板,PCR扩增CLIC3片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-CLIC3-FLAG,检测其定位及表达;构建原核表达载体pGEX-5X-3-CLIC3,转化到大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导融合蛋白GST-CLIC3表达。结果细胞免疫荧光结果表明CLIC3在COS7细胞质和细胞核中均有分布;Western blot结果显示CLIC3在HEK-293T细胞中能有效表达;考马斯亮蓝染色结果表明融合蛋白GST-CLIC3在BL21菌株中能有效表达。结论人类的CLIC3蛋白COS7、HEK-293T及大肠杆菌BL21菌株均能有效表达,为进一步了解CLIC3的功能奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 CLIC3 细胞定位 蛋白表达

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RACK1突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位研究

17

作者 朱亮亮 韩卢 +4 位作者 王蓓华 耿慧武 潘林鑫 刘晓颖 范礼斌 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第11期1595-1599,共5页

目的根据活化蛋白激酶C受体1(RACK1)的蛋白结构,构建其缺失突变体的真核表达质粒,研究RACK1缺失突变体在真核细胞内的表达及定位改变。方法根据RACK1蛋白的结构域特点,以pc DNA3.1-RACK1-FLAG为模板,构建真核表达质粒pc DNA3.1-RACK1(51... 目的根据活化蛋白激酶C受体1(RACK1)的蛋白结构,构建其缺失突变体的真核表达质粒,研究RACK1缺失突变体在真核细胞内的表达及定位改变。方法根据RACK1蛋白的结构域特点,以pc DNA3.1-RACK1-FLAG为模板,构建真核表达质粒pc DNA3.1-RACK1(51-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(93-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(135-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(180-317)-FLAG、pc DNA3.1-RACK1(219-317)-FLAG;Western blot检测上述重组质粒在HEK 293T细胞中的表达;免疫荧光技术检测RACK1的各缺失突变体在COS7细胞中的定位情况。结果成功构建了RACK1各缺失突变体的真核表达质粒;Western blot结果表明,除pc DNA3.1-RACK1(219-317)-FLAG外,其余缺失突变体在HEK 293T细胞中均有效表达;免疫荧光实验表明RACK1缺失突变体在COS7细胞中主要定位在胞质,细胞核中也有少量分布。结论成功构建了RACK1缺失突变体真核表达质粒,并在HEK 293T和COS7细胞中成功表达;在COS7细胞中不同缺失突变体的表达定位均有差异,与野生型的RACK1相比也有所不同,表明缺失不同的结构域后其在细胞中的定位表达也发生了改变。这为研究RACK1各结构域的功能提供了重要依据。 展开更多

关键词 突变体 质粒构建 免疫荧光 WESTERNBLOT 结构域

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HDAC抑制剂对食管癌细胞FKBP3的调节作用

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作者 程晓敏 丁一楠 +3 位作者 姬强 冯成 饶德法 刘晓颖 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第8期1169-1173,共5页

目的探究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂对食管癌细胞FK506结合蛋白3(FKBP3)的调节作用及其具体调节机制。方法使用HDAC抑制剂处理食管癌细胞ECA109和KYSE30,于48 h后收集细胞并分别进行Western blot及qPCR检测FKBP3蛋白与其mRNA水平;利... 目的探究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂对食管癌细胞FK506结合蛋白3(FKBP3)的调节作用及其具体调节机制。方法使用HDAC抑制剂处理食管癌细胞ECA109和KYSE30,于48 h后收集细胞并分别进行Western blot及qPCR检测FKBP3蛋白与其mRNA水平;利用siRNA干扰技术对食管癌细胞进行HDACs敲低实验,Western blot和qPCR分别检测FKBP3的表达水平;通过检索STRING数据库,得到FKBP3和HDACs相互作用的网络。结果HDAC的广谱抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)和HDAC1/HDAC3的特异性抑制剂恩替诺特(MS-275)表现出对FKBP3的抑制作用,且通过降低FKBP3的mRNA水平实现的;特异性敲低HDAC1和HDAC2均会导致细胞中FKBP3蛋白水平的降低,而HDAC3的敲低并无上述效应;数据库检索结果表明FKBP3和HDAC1、HDAC2存在相互作用,并可能通过形成复合体发挥生物功能。结论在食管癌细胞中,HDAC抑制剂可以降低FKBP3的表达,且很可能是通过抑制HDAC1和HDAC2实现的。 展开更多

关键词 组蛋白去乙酰化酶 HDAC抑制剂 FKBP3

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氯离子通道蛋白1的缺失突变体CLIC1(Δ49-51)与Sedlin蛋白相互作用的研究

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作者 洪翠丽 金振辉 +3 位作者 朱亮亮 潘林鑫 耿慧武 刘晓颖 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第11期1690-1695,共6页

目的探究胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)的缺失突变体CLIC1(Δ49-51)在哺乳动物细胞中的表达、定位改变,及与Sedlin蛋白在体内、体外相互作用的影响。方法构建CLIC1的缺失突变体的真核表达质粒pc DNA3. 1-CLIC1(Δ49-51)-FLAG;免疫荧光观察... 目的探究胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)的缺失突变体CLIC1(Δ49-51)在哺乳动物细胞中的表达、定位改变,及与Sedlin蛋白在体内、体外相互作用的影响。方法构建CLIC1的缺失突变体的真核表达质粒pc DNA3. 1-CLIC1(Δ49-51)-FLAG;免疫荧光观察CLIC1(Δ49-51)与Sedlin在COS7细胞中的共定位;在HEK 293T细胞中进行免疫共沉淀和GST pulldown实验,研究CLIC1(Δ49-51)与Sedlin的相互作用。结果 CLIC1(Δ49-51)在COS7细胞中主要定位于细胞质,小部分定位于细胞核。相对于野生型CLIC1的细胞核定位,缺失突变体的细胞内定位发生明显改变并且与Sedlin蛋白没有共定位。Western blot结果显示CLIC1(Δ49-51)能在HEK 293T细胞中有效表达;免疫共沉淀实验结果表明其与Sedlin在体内没有相互作用; GST pulldown结果表明其与Sedlin在体外没有相互作用。结论 CLIC1蛋白的第49~51位氨基酸序列KRR对CLIC1蛋白在细胞内的正确定位发挥重要作用;其缺失突变后影响了CLIC1在细胞内的定位、表达及CLIC1与Sedlin的相互作用。 展开更多

关键词 CLIC1缺失突变体 免疫荧光 免疫共沉淀 GST pulldown

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人EBI3及其截短体蛋白在哺乳动物细胞中的分泌

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作者 刘泽宇 潘林鑫 +3 位作者 李紫阳 冯成 刘晓颖 范礼斌 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第11期1688-1691,1697,共5页

目的:研究人EB病毒诱导基因3(EBI3)蛋白氨基端的缺失是否影响人EBI3蛋白在哺乳动物细胞中的分泌,并探究人EBI3蛋白能否经由外泌体介导的非经典蛋白分泌途径分泌至胞外。方法:将pcDNA3.1-EBI3-FLAG、pcDNA3.1-EBI3(1~135)-FLAG、pcDNA3.1... 目的:研究人EB病毒诱导基因3(EBI3)蛋白氨基端的缺失是否影响人EBI3蛋白在哺乳动物细胞中的分泌,并探究人EBI3蛋白能否经由外泌体介导的非经典蛋白分泌途径分泌至胞外。方法:将pcDNA3.1-EBI3-FLAG、pcDNA3.1-EBI3(1~135)-FLAG、pcDNA3.1-EBI3(125~230)-FLAG真核表达重组质粒分别转染至HEK 293T细胞中,Western blot检测相关蛋白在细胞中及细胞培养液中的表达情况;分别收集转染了上述重组质粒的HEK 293T细胞的培养液,提取外泌体,Western blot检测相关蛋白在外泌体中的表达情况。结果:Western blot结果表明,人野生型EBI3及其截短体重组蛋白在HEK 293T细胞中均能正常表达,细胞培养液中能够检测到EBI3与EBI3(1~135)蛋白的表达,但并不能检测到EBI3(125~230)蛋白的表达。HEK 293T细胞外泌体的Western blot结果表明,外泌体中仅能检测到EBI3蛋白的表达,而无法检测到EBI3(1~135)和EBI3(125~230)蛋白的表达。结论:人EBI3及其截短体真核表达重组质粒均能在HEK 293T细胞中正常表达;人EBI3蛋白氨基端的缺失会抑制EBI3蛋白在哺乳动物细胞中的分泌,人EBI3蛋白能够通过外泌体介导的非经典分泌途径分泌至细胞外,而EBI3氨基端或羧基端的缺失都会导致这一过程受到阻碍。 展开更多

关键词 EBI3 截短体 信号肽 外泌体

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