饲喂乳源免疫调节肽对大鼠生长和免疫的影响 被引量：12

1

作者 李素萍 秦宜德 +3 位作者 董琼珠 方敏 张伟 刘慧 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2005年第6期499-501,共3页

目的探讨乳源免疫调节肽(PGPIPN)对大鼠生长和免疫的影响。方法取42只40日龄的SD大鼠(♀♂各半)随机分为两个实验组和一个对照组(每组14只且♀♂相等,分开饲养)。预饲1周后,实验组Ⅰ和Ⅱ分别被灌喂2.5×10-3g/L和2.5×10-2g/L... 目的探讨乳源免疫调节肽(PGPIPN)对大鼠生长和免疫的影响。方法取42只40日龄的SD大鼠(♀♂各半)随机分为两个实验组和一个对照组(每组14只且♀♂相等,分开饲养)。预饲1周后,实验组Ⅰ和Ⅱ分别被灌喂2.5×10-3g/L和2.5×10-2g/L免疫调节肽,对照组灌喂生理盐水,记录大鼠日采食量和体重。饲养1个月后检测对照组和实验组大鼠淋巴细胞转化、红细胞免疫、巨噬细胞吞噬、日采食量和体重等差别。结果乳源免疫调节肽对大鼠腹腔巨噬细胞吞噬和红细胞免疫有显著促进功能(P<0.05);而对淋巴细胞转化作用有增长的趋势,但未达到显著水平(P>0.05)。与对照组相比,实验组Ⅱ的大鼠日采食量显著地增加(P<0.05),♀♂大鼠分别提高了10.95%和8.03%;增重率有提高的趋势,♀♂大鼠增重率分别提高了5.13%和7.10%,但均未达显著水平(P>0.05)。实验组Ⅰ的大鼠,其日采食量和增重与对照组相比均变化不大。结论乳源免疫调节肽能促进机体的免疫功能,提高其免疫力;增加日采食量。 展开更多

关键词 大鼠 生长 免疫

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稳定敲低SIGIRR的人肾小管上皮细胞的构建及其初步功能的研究 被引量：4

2

作者 蒋克国 王德光 +7 位作者 周海胜 查晓军 张桂霞 金福泉 季爽 潘海峰 叶冬青 郝丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第2期129-135,共7页

目的建立稳定敲低单免疫球蛋白白介素1相关受体(SIGIRR)基因的人肾小管上皮细胞株(HKC),并初步研究其功能。方法针对SIGIRR基因的有效靶点设计shRNA序列,与GV248-GFP-Puro慢病毒载体连接产生重组体(GV248-GFP-Puro-sh SIGIRR)。将测序... 目的建立稳定敲低单免疫球蛋白白介素1相关受体(SIGIRR)基因的人肾小管上皮细胞株(HKC),并初步研究其功能。方法针对SIGIRR基因的有效靶点设计shRNA序列,与GV248-GFP-Puro慢病毒载体连接产生重组体(GV248-GFP-Puro-sh SIGIRR)。将测序验证正确的重组体与包装质粒(p MDL、pRev、p VSVG)共转染293T细胞进行病毒包装,收集病毒并感染HKC细胞。实时荧光定量PCR(qRTPCR)和Western blot法分析检测HKC细胞中SIGIRR干涉效率。应用白细胞介素-1β(IL-1β)刺激成功敲低SIGIRR的HKC细胞及对照细胞,Western blot法检测其下游核转录因子NF-κB(p65)的磷酸化水平,qRT-PCR分析单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、正常T细胞表达和分泌的活化调节蛋白(RANTES)mRNA水平。结果成功构建重组慢病毒载体GV248-GFP-Puro-sh SIGIRR。qRT-PCR和Western blot法均证实在HKC细胞中成功敲低SIGIRR的表达。此外,IL-1β刺激后,与对照细胞相比,敲低SIGIRR的HKC细胞(HKC/sh SIGIRR)的p65磷酸化水平上调,MCP-1和RANTES mRNA表达水平升高。结论 HKC的炎症反应中,SIGIRR蛋白对Toll样受体/白介素1受体(TLR/IL-1R)通路起"刹车"作用。该研究为狼疮性肾炎的治疗提供了新的潜在的靶点。 展开更多

关键词 狼疮性肾炎 人肾小管上皮细胞 SIGIRR 慢病毒载体 NF-ΚB 趋化因子

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小鼠CTSK敲降重组腺相关病毒的构建及其功能研究

3

作者 何静 禚鑫喆 +2 位作者 邹欣雨 王梦凡 王秀云 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第6期1001-1005,共5页

目的构建小鼠组织蛋白酶K(CTSK)基因的敲降重组腺相关病毒(AAV-shCTSK),检测AAV-shCTSK在小鼠体内的敲降效率,及其对脂肪组织脂质储存的影响。方法设计阴性对照组(NC)及CTSK的shRNA引物,退火后插入到骨架载体中,挑选克隆并测序鉴定,重... 目的构建小鼠组织蛋白酶K(CTSK)基因的敲降重组腺相关病毒(AAV-shCTSK),检测AAV-shCTSK在小鼠体内的敲降效率,及其对脂肪组织脂质储存的影响。方法设计阴性对照组(NC)及CTSK的shRNA引物,退火后插入到骨架载体中,挑选克隆并测序鉴定,重组质粒经纯化后,利用转染试剂PEI将构建好的腺相关病毒载体、包装质粒和辅助质粒共转染到293T细胞中,进行腺相关病毒包装与扩增,得到AAV-shNC以及AAV-shCTSK。利用脂肪组织原位注射将AAV病毒注射入小鼠附睾脂肪组织,2周后免疫印迹实验检测小鼠脂肪组织中CTSK蛋白的表达量及HE染色检测脂肪组织中脂滴大小。结果成功获得AAV-shNC以及AAV-shCTSK腺相关病毒。原位注射AAV-shCTSK的小鼠脂肪组织中CTSK成功敲降,脂肪组织中白色脂肪细胞显著变小。结论小鼠CTSK的敲降腺相关病毒构建成功,脂肪组织CTSK敲降引起脂肪组织中脂质含量减少。 展开更多

关键词 CTSK 腺相关病毒 脂肪组织原位注射

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基于“卓越医生教育培养计划”的医学生物化学教学模式改革探究 被引量：6

4

作者 章华兵 顾芳 《基础医学与临床》 CSCD 2018年第8期1211-1213,共3页

目的为了适应"卓越医生教育培养计划"的实施和新形式下对医学卫生人才的要求,高等医学院校需要不断完善和改进临床卫生人才培养体系和模式,包括对现有教学模式和评价方式的改变。方法医学生物化学是一门非常重要的基础学科;... 目的为了适应"卓越医生教育培养计划"的实施和新形式下对医学卫生人才的要求,高等医学院校需要不断完善和改进临床卫生人才培养体系和模式,包括对现有教学模式和评价方式的改变。方法医学生物化学是一门非常重要的基础学科;针对现有的教学现状,本教研室进行了五年制临床医学专业相应生物化学课程的教学改革,包括课堂教学和实验课教学;在教学和考核方式等方面采取了一系列措施。结果改革后增强了学生学习的积极性和主动性,拓宽了学生的知识面,并培养了学生严谨的科研实验作风,提高了学生的科研思维能力。结论为学校实施"卓越医生教育培养计划"提供了很好的帮助。 展开更多

关键词 生物化学 教学模式 卓越医生

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五年制临床医学专业生命的化学课程整合探索 被引量：2

5

作者 鲁云霞 张利平 +5 位作者 胡金兰 许功林 查晓军 李静 耿慧武 贾雪梅 《基础医学教育》 2022年第5期323-325,共3页

医学课程体系的整合是培养21世纪复合型医学人才的必由之路。2013年以来,安徽医科大学开始了五年制临床医学专业整合课程的教学改革试点,其中生物化学与分子生物学和细胞生物学被整合为生命的化学。整合课程在实施过程中组织了跨学科教... 医学课程体系的整合是培养21世纪复合型医学人才的必由之路。2013年以来,安徽医科大学开始了五年制临床医学专业整合课程的教学改革试点,其中生物化学与分子生物学和细胞生物学被整合为生命的化学。整合课程在实施过程中组织了跨学科教学团队,在原有生物化学和细胞生物学整合的基础上添加了原生理学中细胞的生物电专业知识,创新了教学内容,贯彻了以学生为中心和自主学习的教学理念;逐渐摸索建立了形成性评价体系进行课程考核和成绩评定,取得了较好的教学效果。 展开更多

关键词 生命的化学 生物化学 细胞生物学 课程整合 教学改革

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厚朴酚抑制NF-κB信号阻止乳腺癌细胞转移的实验研究 被引量：5

6

作者 余贤军 冯婷婷 +4 位作者 郭阳 李珊 阮绪芝 唐微 刘莹 《湖北医药学院学报》 CAS 2015年第3期224-227,F0002,共5页

目的:探讨天然化合物厚朴酚(Magnolol,Mag)对人乳腺癌细胞转移的抑制作用,并探讨其机制是否与NF-κB信号通路相关。方法:乳腺癌细胞MDA-MB-231经不同浓度Mag处理后,接种到Transwell小室,作用24 h,染色并计穿过Transwell小室的细胞数目;... 目的:探讨天然化合物厚朴酚(Magnolol,Mag)对人乳腺癌细胞转移的抑制作用,并探讨其机制是否与NF-κB信号通路相关。方法:乳腺癌细胞MDA-MB-231经不同浓度Mag处理后,接种到Transwell小室,作用24 h,染色并计穿过Transwell小室的细胞数目;用Western blot法检测不同浓度Mag处理的MDA-MB-231细胞NF-κB信号通路蛋白表达情况。结果:Mag显著抑制乳腺癌细胞的侵袭、迁移和黏附等恶性转移行为,Western blot显示Mag抑制了NF-κB信号通路。结论:Mag具有抑制乳腺癌细胞转移的作用,其机制可能与NF-κB信号通路失活相关。 展开更多

关键词 厚朴酚 乳腺癌 转移 NF-ΚB

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葡萄糖调节蛋白78与糖尿病因素影响瑞芬太尼后处理心肌保护作用的关系：离体实验 被引量：4

7

作者 陈满丽 陈立建 +3 位作者 万俐娟 张雷 都建 顾尔伟 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期762-765,共4页

目的 评价葡萄糖调节蛋白78（GRP78）与糖尿病因素影响瑞芬太尼后处理心肌保护作用的关系.方法 H9c2细胞在含10％胎牛血清DMEM/F12培养基中培养、传代,接种于96孔板（100μl/孔）或6孔板（2 ml/孔）,接种密度10 5个/ml,接种12 h后细胞贴... 目的 评价葡萄糖调节蛋白78（GRP78）与糖尿病因素影响瑞芬太尼后处理心肌保护作用的关系.方法 H9c2细胞在含10％胎牛血清DMEM/F12培养基中培养、传代,接种于96孔板（100μl/孔）或6孔板（2 ml/孔）,接种密度10 5个/ml,接种12 h后细胞贴壁.采用随机数字表法,将细胞分为6组（n=24）：正常糖对照组（NC组）、正常糖缺氧复氧组（NHR组）、正常糖瑞芬太尼后处理组（NRP组）、高糖对照组（HC组）、高糖缺氧复氧组（HHR组）和高糖瑞芬太尼后处理组（HRP组）.NC组、NHR组和NRP组细胞换用正常糖DMEM培养基（5.5 mmol/L）培养48 h;HC组、HHR组和HRP组细胞换用高糖DMEM培养基（25.0 mmol/L）孵育48 h.NHR组、NRP组、HHR组和HRP组弃去培养液,加入Tyrode液,将培养板置于95％N2-5％CO2培养罐中孵育5h,NHR组和HHR组更换为含10％胎牛血清的相应糖DMEM培养基孵育1h,NRP组和HRP组更换为含终浓度为1μmol/L瑞芬太尼的DMEM培养基孵育1h.于复氧1h时,每组取9孔细胞,采用CCK8法检测细胞活力;每组取12孔细胞,采用化学比色法测定培养液乳酸脱氢酶（LDH）活性;每组取3孔细胞,采用Western blot法测定GRP78表达.结果 与NC组比较,NHR组细胞活力降低,LDH活性升高,GRP78表达上调（P＜0.05）;与NHR组比较,NRP组细胞活力升高,LDH活性降低,GRP78表达下调,HRP组细胞活力降低,LDH活性升高,GRP78表达上调（P＜0.05）;与HC组比较,HHR组细胞活力降低,LDH活性升高,GRP78表达上调（P＜0.05）;与HHR组比较,HRP组细胞活力、LDH活性和GRP78表达差异无统计学意义（P＞0.05）;与NRP组比较,HRP组细胞活力降低,LDH活性升高,GRP78表达上调（P＜0.05）.结论 糖尿病因素取消瑞芬太尼后处理心肌保护作用的机制可能与其上调GRP78的表达有关. 展开更多

关键词 热休克蛋白质类 糖尿病 哌啶类 心肌再灌注损伤 缺血后处理

原文传递

人皮肤表皮干细胞外泌体的分离培养与鉴定 被引量：1

8

作者 李碧优 马洁 +2 位作者 张启宇 章华兵 朱云平 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第2期224-229,共6页

目的通过优化技术流程,探究人皮肤表皮干细胞(EPSCs)体外分离培养及表皮干细胞外泌体(EPSCs-Exo)分离纯化的方法。方法首先通过优化人源EPSCs的分离酶,运用改良的无血清培养液,添加10种因子刺激EPSCs生长,促进其分泌EPSCs-Exo,同时维持E... 目的通过优化技术流程,探究人皮肤表皮干细胞(EPSCs)体外分离培养及表皮干细胞外泌体(EPSCs-Exo)分离纯化的方法。方法首先通过优化人源EPSCs的分离酶,运用改良的无血清培养液,添加10种因子刺激EPSCs生长,促进其分泌EPSCs-Exo,同时维持EPSCs干性和增殖性,延缓EPSCs的分化和成熟。进一步优化差速离心的条件,高效高纯度提取人源的EPSCs-Exo。对人皮肤组织进行免疫荧光染色溯源EPSCs;对分离的EPSCs进行Western blot和免疫荧光染色检测其表面多个标志物;对EPSCs-Exo从形态、粒径大小、多个胞内和膜上标志物进行鉴定。结果人皮肤组织分层表达表皮细胞的标志物,EPSCs高表达整合素α6(integrin-α6)、整合素β1(integrin-β1)、P63蛋白(P63)、细胞角蛋白19(CK19)等标志物,EPSCs上清液超速离心后的透射电镜显示茶托状结构,粒径大小检测直径介于30~150 nm,蛋白印迹显示Tsg101、CD9、CD63(溶酶体相关膜蛋白3)呈阳性,Calnexin、GAPDH呈阴性。结论该研究成功在体外分离培养了人源EPSCs并获得人源EPSCs-Exo。 展开更多

关键词 外泌体 人表皮干细胞 超速离心 再生医学

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乳源五肽PGPIP缓解酒精性脂肪肝及其机制研究 被引量：1

9

作者 黄九九 耿奇龙 +2 位作者 李安琪 秦宜德 戚楠 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第11期1813-1818,共6页

目的研究乳源五肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸(PGPIP)缓解小鼠慢性酒精性肝损伤及其相关的分子机制。方法40只C57BL/6小鼠,随机均分为对照组、模型组、谷胱甘肽(GSH)组、PGPIP组。采用10 d Lieber-Decarli酒精饲料喂养加1次... 目的研究乳源五肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸(PGPIP)缓解小鼠慢性酒精性肝损伤及其相关的分子机制。方法40只C57BL/6小鼠,随机均分为对照组、模型组、谷胱甘肽(GSH)组、PGPIP组。采用10 d Lieber-Decarli酒精饲料喂养加1次急性酒精灌胃的方法建立小鼠慢性酒精性脂肪肝模型,造模的同时给予药物干预。根据已有的基因表达综合(GEO)数据库中RNA测序数据,采用聚类热图对肝脏内质网应激相关基因差异表达分析。肝脏苏木素-伊红(HE)染色分析各处理组对小鼠酒精性肝损伤的病理学影响,油红O染色分析各处理组对小鼠肝脏脂滴积累的影响。透射电子显微镜分析酒精代谢引起的脂滴积累对肝细胞显微结构的影响并验证PGPIP的作用效果。蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激相关信号转导蛋白表达变化。结果PGPIP组病理学检查类似正常对照组,小鼠肝脏损伤明显减轻。模型组小鼠肝脏中有明显的脂滴积累,表现为大小不同程度的混合型脂滴,PGPIP处理后明显减少酒精诱导的肝脏脂滴积累。PGPIP对PERK-eIF2α-ATF4通路有较大影响,且对转录激活因子6(ATF6)和Cleaved Caspase 3蛋白的表达有显著性的效果。结论五肽PGPIP能缓解小鼠慢性酒精性脂肪肝和肝损伤,其机制可能是通过减少肝细胞中的脂滴积累,并且减少内质网应激和肝细胞凋亡从而发挥作用。 展开更多

关键词 PGPIP 酒精性脂肪肝 内质网应激 ATF4 ATF6

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敲低和敲除OPTN基因SKOV3细胞的构建及其对抗癌药物敏感性的影响 被引量：3

10

作者 王鹏 陈曦 +5 位作者 徐恰 刘会 郭若文 刘芸 许尹 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第9期1315-1320,共6页

目的利用RNA干扰技术建立稳定敲低OPTN蛋白的人SKOV3细胞株和利用CRISPR/Cas 9基因编辑技术建立稳定敲除OPTN蛋白的人SKOV3细胞株,并研究降低OPTN基因表达对细胞抗癌药物敏感性的影响。方法针对OPTN基因设计shRNA和sgRNA的序列,并与慢... 目的利用RNA干扰技术建立稳定敲低OPTN蛋白的人SKOV3细胞株和利用CRISPR/Cas 9基因编辑技术建立稳定敲除OPTN蛋白的人SKOV3细胞株,并研究降低OPTN基因表达对细胞抗癌药物敏感性的影响。方法针对OPTN基因设计shRNA和sgRNA的序列,并与慢病毒载体质粒pGPU 6_GFP_Neo和敲除质粒PX 459载体连接产生重组载体。并将重组的质粒测序验证,将测序成功的重组质粒载体与包装质粒(psPAX 2、pMD 2.G)共转染293 T细胞进行病毒包装,收集病毒上清液并感染SKOV3细胞,获得稳定敲低和稳定敲除OPTN基因的SKOV3细胞株。RT-PCR检测敲低组OPTN基因的表达的变化,PCR检测敲除组的基因组DNA的变化,Western blot法分析检测OPTN蛋白的表达情况。MTT法检测DDP对卵巢癌细胞增殖的影响,qRT-PCR检测caspase3、Bax、Bcl-2的mRNA的表达情况,Western blot检测caspase3、Bax、和Bcl-2蛋白的表达情况。结果成功构建慢病毒载体和基因敲除载体,在SKOV3细胞中的OPTN蛋白表达降低(敲减细胞株)或完全敲除(敲除细胞株)。OPTN基因被敲减和敲除的卵巢癌细胞(SKOV3)对顺铂(DDP)的敏感性降低;与对照组相比,DDP对细胞抑制率降低(P<0.05,P<0.01),基因敲除的细胞效果更好。通过qRT-PCR和Western blot检测稳定敲减和敲除OPTN蛋白的SKOV3细胞其凋亡相关基因caspase3、Bax的mRNA和蛋白的表达量降低,而Bcl-2的表达量上升(P<0.05,P<0.01)。结论在卵巢癌中降低或去除OPTN基因表达,能够降低卵巢癌细胞对抗癌药物DDP的敏感性,OPTN可能通过影响凋亡相关途径实现的。 展开更多

关键词 卵巢癌 OPTN 基因敲减 基因敲除 细胞耐药性

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脯氨酰-4-羟化酶亚基α-2通过肌醇需要酶1α介导的UPR信号通路调控肝癌细胞凋亡并预测早期肝细胞癌的不良预后

11

作者 朱睿安 李朝英 姜颖 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期269-276,共8页

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)严重危害着人类健康。尽管大量研究表明,在HCC早期进行手术切除可提高患者的生存率,但其高复发率仍然阻碍着治疗进程。本研究分析蛋白质组学数据发现。脯氨酰-4-羟化酶亚基α-2(prolyl 4-hydroxy... 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)严重危害着人类健康。尽管大量研究表明,在HCC早期进行手术切除可提高患者的生存率,但其高复发率仍然阻碍着治疗进程。本研究分析蛋白质组学数据发现。脯氨酰-4-羟化酶亚基α-2(prolyl 4-hydroxylase subunit α-2,P4HA2)在早期HCC组织中高表达,Kaplan-Meier曲线、Cox比例风险回归模型(cox regression model)证明,P4HA2高表达的早期肝癌患者预后较差,且P4HA2可作为患者预后的独立预测因子。通过敲低或过表达实验发现,P4HA2明显促进肿瘤细胞的增殖、迁移等恶性生物学行为。敲低P4HA2激活了由肌醇需要酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)介导的促凋亡非折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)。以上结果表明,P4HA2可能通过调节内质网稳态来调控肝癌细胞凋亡,P4HA2有望成为HCC潜在的治疗靶点。 展开更多

关键词 肝细胞癌 脯氨酰-4-羟化酶亚基α-2 预后 细胞凋亡

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基础医学专业生物化学课程教学改革初探 被引量：4

12

作者 鲁云霞 张胜权 +1 位作者 陈兵 周胤 《中华医学教育杂志》 2008年第2期43-44,共2页

本文根据基础医学专业人才的培养目标，对基础医学专业生物化学课程的理论和实验教学进行了改革，即采用特定的专业教材结合临床医学的基础知识，尽量扩大学生的知识面，强化课堂教学效果，加大双语教学力度，让学生早日进入实验室参与... 本文根据基础医学专业人才的培养目标，对基础医学专业生物化学课程的理论和实验教学进行了改革，即采用特定的专业教材结合临床医学的基础知识，尽量扩大学生的知识面，强化课堂教学效果，加大双语教学力度，让学生早日进入实验室参与科研等，取得了一定的效果。 展开更多

关键词 基础医学专业 生物化学 理论与实验教学 教学改革

原文传递

乳源免疫调节肽提高DDP对卵巢癌细胞的影响 被引量：3

13

作者 周娟 刘琛 +4 位作者 顾芳 赵梦静 杨雪 王晶 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第10期1440-1444,共5页

目的观察体外实验中乳源免疫调节肽(PGPIPN)与抗癌药物顺铂(DDP)联合用药对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响。方法 MTS检测DDP联合PGPIPN对原代卵巢癌细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测DDP联合PGPIPN对原代卵巢癌细胞凋亡率和周期的影响,细... 目的观察体外实验中乳源免疫调节肽(PGPIPN)与抗癌药物顺铂(DDP)联合用药对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响。方法 MTS检测DDP联合PGPIPN对原代卵巢癌细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测DDP联合PGPIPN对原代卵巢癌细胞凋亡率和周期的影响,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 MTS实验表明PGPIPN联合DDP处理组对卵巢癌细胞抑制率显著高于单独用DDP组,差异有统计学意义(P<0.05),且呈剂量和时间依赖性。流式细胞术显示PGPIPN可以协同DDP促进人原代卵巢癌细胞的凋亡,并使得肿瘤细胞停滞于G0/G1期。细胞划痕实验显示联合用药明显抑制细胞的运动能力,与单独用药差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PGPIPN可以提高DDP对原代卵巢癌细胞的作用。 展开更多

关键词 人原代卵巢癌细胞 联合用药 免疫调节肽 顺铂

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乳源六肽增加人卵巢癌细胞对顺铂的敏感性 被引量：2

14

作者 徐恰 阮昕 +3 位作者 汪慎燚 席浩 韦文美 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第8期1221-1226,共6页

目的研究乳源六肽(PGPIPN)促进人卵巢癌细胞对顺铂(DDP)的敏感性及其机制。方法体外培养人卵巢癌敏感细胞株COC1和耐DDP的耐药细胞株COC1/DDP,用CCK8法检测其在DDP作用下的细胞增殖抑制率,计算DDP在作用24、48、72 h的半抑制浓度(IC_(5... 目的研究乳源六肽(PGPIPN)促进人卵巢癌细胞对顺铂(DDP)的敏感性及其机制。方法体外培养人卵巢癌敏感细胞株COC1和耐DDP的耐药细胞株COC1/DDP,用CCK8法检测其在DDP作用下的细胞增殖抑制率,计算DDP在作用24、48、72 h的半抑制浓度(IC_(50))。不同浓度的PGPIPN联合DDP(IC_(50))分别作用COC1和COC1/DDP 24、48、72 h,CCK8法检测其对生长增殖的影响,用流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响。用RT-PCR和Western blot检测人卵巢癌细胞中切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的表达情况。结果 PGPIPN联合DDP组同单独使用DDP组相比,人卵巢癌细胞敏感株COC1和人卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的抑制率与凋亡率均增加,增加的幅度与PGPIPN浓度在一定范围内成正比,PGPIPN对耐药株COC1/DDP效果高于敏感株COC1。PGPIPN增加人卵巢癌细胞对DDP敏感性在作用48 h时效果最好,对COC1/DDP和COC1的抑制率最高分别为76.8%和62.3%,凋亡率最高分别为67.4%和45.4%,显著高于单独DDP作用(P<0.01)。PCR和Western blot检测COC1和COC1/DDP的ERCC1基因的表达,结果显示在DDP联合不同浓度PGPIPN作用下ERCC1基因的表达均低于单独使用DDP组,COC1/DDP中ERCC1基因表达量随着PGPIPN浓度的升高而显著降低,尤其是对耐药细胞株COC1/DDP的ERCC1基因表达最为显著,显著高于单独DDP作用(P<0.05,P<0.01)。敏感细胞株COC1细胞中ERCC1基因的表达受PGPIPN的影响不如COC1/DDP明显,只是在高剂量(1×10^(-2)g/L)时,ERCC1基因表达明显下降。结论 PGPIPN能增加人卵巢癌细胞对DDP敏感性,其可能是通过调低ERCC1的表达来实现的。 展开更多

关键词 PGPIPN 人卵巢癌细胞 ERCC1基因 细胞调亡

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乳铁蛋白抗菌肽抑制胃癌细胞增殖诱导其凋亡的体外研究 被引量：1

15

作者 杨雪 石皖荣 +5 位作者 杨伟杰 何韬 胡阳生 王珊珊 韦文美 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第6期781-785,790,共6页

目的探讨乳铁蛋白抗菌肽(Lfcin B)对人胃癌细胞株MGC803细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法用CCK-8法测定不同浓度Lfcin B对胃癌细胞株MGC803 24、48和72h细胞增殖影响。用流式细胞术检测胃癌MGC803细胞凋亡的变化。用RT-PCR检测凋亡相关基... 目的探讨乳铁蛋白抗菌肽(Lfcin B)对人胃癌细胞株MGC803细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法用CCK-8法测定不同浓度Lfcin B对胃癌细胞株MGC803 24、48和72h细胞增殖影响。用流式细胞术检测胃癌MGC803细胞凋亡的变化。用RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3 mRNA的变化情况。用Western blot检测MGC803细胞中的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达。结果 Lfcin B对胃癌细胞株MGC803的增殖具有抑制作用,促进胃癌细胞株MGC803细胞凋亡,并且具有时间和剂量依赖性(P<0.05,P<0.01);Lfcin B能显著抑制胃癌细胞株MGC803 bcl-2 mRNA表达,同时促进bax和caspase-3 mRNA表达,并且随着Lfcin B浓度的增高相关基因下降或上升越明显(P<0.05,P<0.01);Western blot结果也显示,Lfcin B能抑制Bcl-2蛋白表达,促进Caspase-3和Bax蛋白表达,其变化规律与mRNA相同(P<0.05,P<0.01)。结论 Lfcin B通过调控相关基因,抑制胃癌细胞MGC803增殖,并诱导其细胞凋亡。 展开更多

关键词 LfcinB MGC803 增殖 凋亡

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乳源六肽预防和降低小鼠急性酒精性肝损伤及其机制 被引量：2

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作者 席浩 刘沁雪 +6 位作者 陈曦 王鹏 李敬文 姚晓炜 吕志昊 许尹 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第10期1546-1551,共6页

目的研究乳源六肽(PGPIPN)在降低小鼠酒精性肝损伤方面的作用及其机制。方法建立小鼠急性酒精肝损伤的动物模型,健康雄性昆明种小鼠60只,体质量18~22 g,动物预饲养1周后分成6组:对照组、模型组、PGPIPN L组、PGPIPN M组、PGPIPN H组和... 目的研究乳源六肽(PGPIPN)在降低小鼠酒精性肝损伤方面的作用及其机制。方法建立小鼠急性酒精肝损伤的动物模型,健康雄性昆明种小鼠60只,体质量18~22 g,动物预饲养1周后分成6组:对照组、模型组、PGPIPN L组、PGPIPN M组、PGPIPN H组和谷胱甘肽(GSH)组,每组10只小鼠。为了制作小鼠急性酒精性肝损伤的动物模型,实验最后3 d,PGPIPN低、中、高剂量组、GSH组和模型对照组以56°红星二锅头酒灌胃,对照组使用等量蒸馏水灌胃,建立小鼠的急性酒精性肝损伤的对照模型。12 h后,将小鼠颈椎脱臼处死,取材检测相关指标。在实验结束时,将小鼠称重并麻醉,收集血清和肝脏样品,取肝脏称重后保存,计算出肝脏指数。同时,测定小鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量,血清和肝匀浆中三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的含量。取肝脏组织制作成病理切片,观察肝脏细胞的病理学变化。原代细胞培养,流式细胞术检测肝脏组织的凋亡状况。结果生化分析显示模型组小鼠血清TG、TC和肝脏TG(肝匀浆中TG的浓度)高于对照组,PGPIPN H剂量组、PGPIPN M剂量组和PGPIPN L剂量组血清中ALT、AST含量与模型组相比降低,PGPIPN高剂量组中TNF-α含量较模型组也有减少。对照组中,肝细胞结构完整,凋亡指数为3.61%。而模型组中肝索结构紊乱,液泡数目增加,肝脏细胞的边界不清晰,细胞核消失,细胞皱缩,凋亡指数为36.87%,出现了明显的细胞凋亡状态。PGPIPN L组细胞出现凋亡状态,而PGPIPN H组细胞状态良好,无凋亡现象发生。流式细胞术检测细胞凋亡,对照组为4.558%,模型组为31.50%。结论PGPIPN能够预防和降低小鼠急性酒精性肝损伤。 展开更多

关键词 乳源六肽 小鼠 急性酒精肝损伤 保护机制

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去泛素化酶JOSD2促进肝癌细胞的存活和转移 被引量：2

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作者 韩祯祯 刘禹辰 王建 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期762-771,共10页

蛋白质泛素化是一种可逆的蛋白质翻译后修饰,在信号转导和蛋白质稳定性调控中发挥关键作用。去泛素化酶调控在许多种肿瘤中的作用机制尚不清楚。本文对63种去泛素化酶在肝细胞癌病人的生存和预后进行分析,发现去泛素化酶JOSD2(josephin ... 蛋白质泛素化是一种可逆的蛋白质翻译后修饰,在信号转导和蛋白质稳定性调控中发挥关键作用。去泛素化酶调控在许多种肿瘤中的作用机制尚不清楚。本文对63种去泛素化酶在肝细胞癌病人的生存和预后进行分析,发现去泛素化酶JOSD2(josephin domain containing 2)在肝细胞癌组织中表达显著高于癌旁(P<0.0001),且与总生存期相关(P<0.05)。JOSD2属于去泛素化酶MJD(machado josephin domain)亚家族成员,该家族其它成员与肝细胞癌发生无显著的相关性。对TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据中JOSD2高表达样本和低表达样本的差异基因进行功能富集分析,显示JOSD2高表达样本中与细胞增殖相关通路显著富集(FDR<0.05)。在肝癌细胞系中过表达JOSD2,发现其能促进肝癌细胞的存活、迁移和侵袭(P<0.01)。综上所述,本文发现去泛素化酶JOSD2在肝细胞癌组织中高表达,高表达JOSD2的肝细胞癌病人总生存期显著降低(P=0.041),过表达JOSD2能促进肝癌细胞的存活和转移,提示JOSD2可能促进肝细胞癌的转移。 展开更多

关键词 肝细胞癌 去泛素化酶 泛素化 JOSD2

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白藜芦醇减少肥胖小鼠肝细胞焦亡的初步探讨 被引量：2

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作者 龙月明 徐冬梅 +2 位作者 曹琼琼 虞芳梅 鲁云霞 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期194-199,共6页

目的 研究白藜芦醇(resveratrol,RES)减少肥胖小鼠细胞焦亡致肝损伤的机制。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为标准(SCD)、高脂(HFD)及高脂+白藜芦醇(HFD+RES)饮食3组,标准或高脂饮食喂养,HFD+RES小鼠在高脂饮食的同时胃饲白藜芦醇(400 mg... 目的 研究白藜芦醇(resveratrol,RES)减少肥胖小鼠细胞焦亡致肝损伤的机制。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为标准(SCD)、高脂(HFD)及高脂+白藜芦醇(HFD+RES)饮食3组,标准或高脂饮食喂养,HFD+RES小鼠在高脂饮食的同时胃饲白藜芦醇(400 mg/(kg·d)),持续22 w。测定体重,分析血脂和interleukin-1 beta (IL-1β)、interleukin-18(IL-18)水平,HE染色检测肝脏组织的形态学变化,免疫组化检测去乙酰化酶sirtuin-1(SIRT1)、P66SHC、NLR family pyrin domain containing 3 (NLRP3)的定位和表达,实时荧光定量RT-PCR和Western blot分析SIRT1、P66SHC(66ku Src homology 2 domain-containing protein)、NLRP3、cysteinyl aspartate specific proteinase-1(caspase-1)、gasdermin-D (GSDMD)、interleukin-1 beta (IL-1β)、interleukin-18 (IL-18)等的表达。结果 体重、血液指标和HE染色结果均显示饮食诱导肥胖小鼠的炎症损伤模型构建成功;SIRT1表达量明显减少,P66SHC、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18表达均显著增加。与HFD小鼠相比,HFD+RES小鼠的体重、血脂指标和肝脏脂质沉积均显著减少,SIRT1表达量明显增加,P66SHC、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18表达均显著降低,且具有统计学意义。结论白藜芦醇有明显的抑制P66SHC-NLRP3炎性小体介导的GSDMD活化和细胞焦亡的效应,其机制可能与增加肥胖小鼠肝脏组织SIRT1的表达有关。[营养学报,2022,44(2):194-199] 展开更多

关键词 白藜芦醇 SIRT1 肥胖 肝脏 NLRP3炎性小体 焦亡

原文传递

乳铁蛋白活性六肽(LfcinB 4-9)增加人宫颈癌细胞对顺铂的敏感性及其机制 被引量：1

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作者 刘芸 徐恰 +2 位作者 刘力伟 戚楠 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第8期1268-1274,共7页

目的研究乳铁蛋白活性六肽(LfcinB 4-9)增加人宫颈癌细胞对顺铂的敏感性并探究其作用机制。方法MTT检测顺铂(DDP)联合不同浓度的LfcinB 4-9对人宫颈癌细胞Hela细胞株、敲除p62基因的Hela细胞株(Hela/KO p62)增殖的影响;平板克隆实验检测... 目的研究乳铁蛋白活性六肽(LfcinB 4-9)增加人宫颈癌细胞对顺铂的敏感性并探究其作用机制。方法MTT检测顺铂(DDP)联合不同浓度的LfcinB 4-9对人宫颈癌细胞Hela细胞株、敲除p62基因的Hela细胞株(Hela/KO p62)增殖的影响;平板克隆实验检测DDP联合LfcinB 4-9对人宫颈癌细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术实验检测联合用药对人宫颈癌细胞凋亡的影响;qRT-PCR检测联合用药对人宫颈癌细胞Hela、Hela/KO p62中SIAH、PSMA、β-catenin等基因表达水平的影响;Western blot检测联合用药对人宫颈癌细胞中SIAH、PSMA、β-catenin等蛋白表达水平的影响。结果LfcinB 4-9和DDP联合用药对宫颈癌细胞的抑制率高于DDP单独作用组或单独LfcinB 4-9组(P<0.05或P<0.01),与DDP单独组相比,DDP联合LfcinB4-9作用后人卵巢癌细胞克隆形成能力降低,凋亡增加(P<0.05或P<0.01)。qRT-PCR和Western blot实验显示,DDP联合LfcinB 4-9作用时联合用药SIAH、PSMA1的表达量增加,而β-catenin的表达量降低。结论LfcinB4-9与DDP联合作用后增强了宫颈癌细胞对DDP的敏感性,其作用是通过蛋白酶体途径来实现的。 展开更多

关键词 宫颈癌细胞 乳源六肽 顺铂 耐药性 基因表达

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乳源免疫调节肽通过泛素-蛋白酶体途径抑制卵巢癌耐药性及其机制研究 被引量：2

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作者 阮昕 汪慎燚 +3 位作者 徐恰 席浩 薛绍礼 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第7期989-993,共5页

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)抑制卵巢癌耐药性及其机制。方法 MTT法检测PGPIPN与抗癌药顺铂(DDP)联合用药抑制人卵巢癌敏感细胞株(SKOV_3)、耐药细胞株(SKOV_3-DDP)和原代卵巢癌细胞的半数抑制浓度(IC_(50))和细胞增殖抑制率,PCR法... 目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)抑制卵巢癌耐药性及其机制。方法 MTT法检测PGPIPN与抗癌药顺铂(DDP)联合用药抑制人卵巢癌敏感细胞株(SKOV_3)、耐药细胞株(SKOV_3-DDP)和原代卵巢癌细胞的半数抑制浓度(IC_(50))和细胞增殖抑制率,PCR法和Western blot法检测人卵巢癌细胞株和原代卵巢癌细胞用药情况下泛素-蛋白酶体途径相关基因的表达。结果 PGPIPN和DDP联合用药细胞增殖抑制率显著高于单独DDP组或PGPIPN组,差异有统计学意义(P<0.05),PCR和Western blot结果表明PGPIPN通过调节泛素-蛋白酶体途径相关基因表达降低卵巢癌细胞的耐药性。PGPIPN促进SIAH和PSMA1表达,降低β-catenin基因的表达(P<0.05,P<0.01),且有剂量依赖性。结论 PGPIPN通过泛素-蛋白酶体途径降低卵巢癌细胞对DDP的耐药性。 展开更多

关键词 卵巢癌 乳源免疫调节肽 顺铂 泛素-蛋白酶体途径

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