MHC分子多态性的起源、演变与抗病机理 被引量：22

1

作者 陈芳芳 潘玲 +2 位作者 耿照玉 刘雪兰 余为一 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1061-1067,共7页

主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)的概念源于解释异体间组织排斥和相容现象,现已拓展为与抗感染以及所有免疫反应相关的基因群。MHC是现有物种形成前就存在的原始基因。在进化过程中,MHC基因在物种之间和种... 主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)的概念源于解释异体间组织排斥和相容现象,现已拓展为与抗感染以及所有免疫反应相关的基因群。MHC是现有物种形成前就存在的原始基因。在进化过程中,MHC基因在物种之间和种群的个体之间都产生了明显差异。物种之间的差异主要是基因结构的不同,如有无基因框架和高度可塑性区、单一或重复基因座,还包括等位基因的排列方式以及不同数量的基因座和等位基因。亲缘关系较近的物种之间MHC基因结构相近,其差异表现在有无基因组单元重排方式和假基因。同种动物的MHC等位基因表现高度多态性序列。MHC基因是脊椎动物多态性最高的基因,其遗传基础是等位基因的点突变,即核苷酸发生替换。产生MHC多态性的原因主要是环境中病原压力。许多研究已经探明了与特定病原抗病相关的MHC的单倍型或MHC分子中的特定位点。MHC分子中肽结合区(Peptide binding region,PBR)是多态性最高的区段,PBR和抗原肽之间的亲和力与动物的抗病性/易感性关系最密切。分子生物学和生物信息学技术提供了研究MHC多态性,特别是探明MHC与抗原肽互相作用机理的理想工具。 展开更多

关键词 MHC 多态性 抗病性

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基于单克隆抗体的三聚氰胺ELISA检测方法的建立 被引量：14

2

作者 王黎丽 陈芳芳 +1 位作者 吴超 余为一 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期962-966,共5页

建立三聚氰胺直接和间接竞争ELISA检测方法。三聚氰胺(melamine)-BSA免疫BALB/c小鼠,通过融合小鼠脾细胞与SP2/0细胞,制备分泌MEL单克隆抗体(monoclonal anti-body)的细胞株;体内诱生腹水制备MEL-mAb。用高碘酸钠法制备MEL-OVA-HRP偶联... 建立三聚氰胺直接和间接竞争ELISA检测方法。三聚氰胺(melamine)-BSA免疫BALB/c小鼠,通过融合小鼠脾细胞与SP2/0细胞,制备分泌MEL单克隆抗体(monoclonal anti-body)的细胞株;体内诱生腹水制备MEL-mAb。用高碘酸钠法制备MEL-OVA-HRP偶联物并对其活性进行鉴定。分别用MEL-OVA和制备的MEL-mAb包被,用三聚氰胺标准液作为抑制物,做直接和间接竞争ELISA,并对两种ELISA方法在灵敏度、线性检测范围、检测时间进行比较。筛选出4株可以稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株。其中的C4株腹水效价达到1∶104,亲和力常数(Ka)为2.92×108L/mol。三聚氰胺间接竞争ELISA和直接竞争ELISA检测法的IC50分别为3.12μg/L和56.88μg/L,线性检测范围分别为0.05～10μg/L和0.1～1 000μg/L。两种竞争ELISA方法都能应用于三聚氰胺的快速检测,但间接竞争ELISA比直接竞争ELISA更加灵敏。 展开更多

关键词 三聚氰胺 单克隆抗体 间接竞争ELISA 直接竞争ELISA

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药用真菌葡聚糖免疫调节作用的研究进展 被引量：8

3

作者 叶红 余为一 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期153-156,共4页

药用真菌含有多种对人体有益的生理活性物质,具有多种药用功能,其中真菌多糖所具有的免疫调节作用倍受关注。该文在阐述真菌多糖分子结构与生物学活性关系的基础上,主要综述了葡聚糖在免疫调节中的作用机制及药用真菌多糖的免疫调节功能。

关键词 葡聚糖 免疫调节机制 抗肿瘤

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一株分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞的鉴定 被引量：7

4

作者 张敬梅 余为一 +1 位作者 李林 张春玲 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第27期12955-12956,12983,共3页

[目的]应用杂交瘤技术获得稳定分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]先将原核表达产物His-PoIFN-γ免疫BALB/c小鼠4次,然后进行细胞融合,再以纯化的GST-PoIFN-γ作为包被抗原,用间接ELISA筛选阳性杂交瘤无性系,最终获得... [目的]应用杂交瘤技术获得稳定分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]先将原核表达产物His-PoIFN-γ免疫BALB/c小鼠4次,然后进行细胞融合,再以纯化的GST-PoIFN-γ作为包被抗原,用间接ELISA筛选阳性杂交瘤无性系,最终获得能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对其进行间接ELISA和Western blot检测。[结果]试验获得1株能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,被命名为B3株,经间接ELISA和Western blot检测,该株分泌的抗体能与融合蛋白His-PoIFN-γ和GST-PoIFN-γ发生特异性反应,而与其他表达鸡γ-干扰素、His和GST蛋白等的重组质粒均不发生反应。B3株分泌的抗体小鼠腹水的ELISA效价达到1∶160 000,抗体亚型为IgG1型,且轻链为κ链。[结论]该研究为建立猪γ-干扰素检测方法,研究机体的免疫状态及免疫机制提供了技术基础。 展开更多

关键词 猪Γ-干扰素 融合蛋白 单克隆抗体 制备 鉴定

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应用RACE法克隆鸽恒定链基因的研究 被引量：5

5

作者 刘岗 仲大莲 +1 位作者 刘雪兰 余为一 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期77-80,共4页

为比较禽类恒定链的结构和功能,应用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术首次克隆并鉴定了鸽恒定链基因。首先用一对含高度保守的DNA片段的简并引物,从鸽脾细胞RNA扩增部分恒定链片段,接着测序并设计新引物分别从5′和3′RACE... 为比较禽类恒定链的结构和功能,应用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术首次克隆并鉴定了鸽恒定链基因。首先用一对含高度保守的DNA片段的简并引物,从鸽脾细胞RNA扩增部分恒定链片段,接着测序并设计新引物分别从5′和3′RACE扩增延长该片段。最后根据全基因的序列设计上、下游引物,获得大小为1050bp的全长cDNA。比较核苷酸序列,鸽与鸡的Ii链同源性达到82.8%,而与人等其它动物的同源性则在52.0%以上;其中633bp的开放阅读框编码211个氨基酸残基的前体蛋白。推导和分析氨基酸序列表明,分子结构与鸡恒定链相似,其中有些氨基酸残基表现出较高的保守性。 展开更多

关键词 鸽 恒定链 RACE 克隆

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两种基于恒定链活性片段载体在增强抗体分泌中作用的比较 被引量：5

6

作者 孟凡涛 陈芳芳 余为一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期728-732,共5页

目的:比较基于恒定链片段的两种载体的免疫效果和作用机理。方法:分别构建了含新城疫病毒抗原表位F306和Ii不同片段的三个嵌合体(Ii-key/F306、Ii-key/F306/ND(两个氨基酸残基)和用抗原表位取代Ii-CLIP的Ii/F306),经纯化后的融合蛋白免... 目的:比较基于恒定链片段的两种载体的免疫效果和作用机理。方法:分别构建了含新城疫病毒抗原表位F306和Ii不同片段的三个嵌合体(Ii-key/F306、Ii-key/F306/ND(两个氨基酸残基)和用抗原表位取代Ii-CLIP的Ii/F306),经纯化后的融合蛋白免疫小鼠,并用ELISA检测其抗体效价。同时嵌合体与Mhc共转染COS7细胞,观察两者的细胞定位与结合。结果:Ii-key/F306免疫组比单独F306抗原肽免疫组的抗体效价提高2倍,Ii-key/F306/ND免疫组增至4倍,而Ii-F306免疫组只增强2.5倍。在与Mhc共转染的COS7细胞和免疫共沉淀中,Ii-key/F306和Ii-key/F306/ND既没有与MHCⅡ分子的膜共定位作用,也不能与后者结合;而Ii-F306却能与MHCⅡ分子在浆膜共定位,并与后者结合。结论:这些结果表明,嵌合体都具有增强免疫效果的作用,并提示Ii片段促进了抗原肽与MHCⅡ分子结合。 展开更多

关键词 恒定链 抗体 共定位 MHCⅡ类分子

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一种新型的免疫载体—MHCⅡ类分子的恒定链 被引量：4

7

作者 陈芳芳 余为一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期573-576,共4页

关键词 MHCⅡ类分子 恒定链 免疫载体 白细胞分化抗原 肿瘤细胞表面 跨膜糖蛋白 树突状细胞 巨噬细胞

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鸡IgG单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2

8

作者 王骏俊 余为一 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第28期15653-15654,共2页

[目的]制备鸡免疫球蛋白单克隆抗体,提高诊断鸡特异性抗体的水平。[方法]应用盐析法粗提和葡聚糖G200凝胶层析分离纯化鸡血清IgG,免疫BALB/c小鼠,并进行细胞融合和ELISA筛选。[结果]间接ELISA法检测C44、C45、C67和C68共4株鸡IgG单克隆... [目的]制备鸡免疫球蛋白单克隆抗体,提高诊断鸡特异性抗体的水平。[方法]应用盐析法粗提和葡聚糖G200凝胶层析分离纯化鸡血清IgG,免疫BALB/c小鼠,并进行细胞融合和ELISA筛选。[结果]间接ELISA法检测C44、C45、C67和C68共4株鸡IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞的腹水效价分别为1∶640000、1∶320000、1∶640000和1∶80000。Westernblot分析显示,C44和C45株单克隆抗体识别鸡IgG轻链,而C67和C68株单克隆抗体识别鸡IgG重链,它们与鸭、猪等血清Ig均没有反应。小鼠Ig亚类分析表明,4株细胞分泌的抗体均为IgG1型。[结论]成功获得了4株稳定分泌鸡IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞。 展开更多

关键词 鸡IGG 单克隆抗体 特异性 鉴定

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鸡Ii与B-L基因表达产物的细胞定位与结合活性特征 被引量：3

9

作者 罗兰芳 余为一 陈芳芳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期879-883,889,共6页

目的:研究鸡Ii与B-L基因表达产物在细胞内定位和互相结合的活性特征。方法:将克隆的Ii、B-LA和B-LB基因片段分别插入原核或真核表达质粒;然后分别单独转染或共转染工程菌Rosetta(DE3)或293T细胞。所有重组菌经鉴定后进行诱导表达后再复... 目的:研究鸡Ii与B-L基因表达产物在细胞内定位和互相结合的活性特征。方法:将克隆的Ii、B-LA和B-LB基因片段分别插入原核或真核表达质粒;然后分别单独转染或共转染工程菌Rosetta(DE3)或293T细胞。所有重组菌经鉴定后进行诱导表达后再复性。单一表达产物用免疫印迹检测它们的抗原性,共转染表达的产物用pull-down法和(SDS-)PAGE观察其互相结合特征。结果:成功构建了6个原核和真核表达重组质粒。在真核细胞中Ii、B-LA和B-LB基因表达产物定位于细胞浆膜,而原核表达产物经复性后和亲和层析纯化,获得单一蛋白分子。其次,原核表达的Ii与B-LA和B-LB复性蛋白能够诱导产生鼠源抗体,这些抗体特异性结合真核表达产物,表明它们保持相同的免疫原性。最后,用pull-down从共转染的工程菌表达并复性的蛋白分子中分别获得纯化的Ii/B-LA和Ii/B-LB复合物,它们经SDS处理后分别被解离成单体。结论:鸡Ii和B-L基因的原核与真核表达的产物能够保持其抗原性,而原核共表达的Ii和B-L蛋白分子复性后可以互相结合。本研究的结果为进一步研究Ii与B分子关系提供了方法。 展开更多

关键词 恒定链 B-L Pull-down 表达 复合物

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鸡MHC Ⅱ类分子部分基因的原核表达及单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2

10

作者 叶平 余为一 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第28期15668-15669,共2页

[目的]制备鸡MHCⅡ类分子的单克隆抗体。[方法]在分析鸡MHCII类分子蛋白序列基础上,选取鸡MHCⅡα链基因第2～6外显子和β链基因第3～6外显子进行原核表达,以纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经克隆... [目的]制备鸡MHCⅡ类分子的单克隆抗体。[方法]在分析鸡MHCII类分子蛋白序列基础上,选取鸡MHCⅡα链基因第2～6外显子和β链基因第3～6外显子进行原核表达,以纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经克隆和间接ELISA筛选阳性细胞株。[结果]共得到1株分泌鸡MHCⅡα链抗体和2株MHCⅡβ链抗体的杂交瘤细胞,分别命名为MHCⅡα-4、Ⅱβ6-2和Ⅱβ6-31,其腹水效价分别为1∶256000、1∶256000和1∶1280000。Western blotting分析表明其特异性强,能与相应蛋白结合。[结论]成功获得了3株稳定分泌抗鸡MHCⅡ类分子抗体的杂交瘤细胞。 展开更多

关键词 鸡MHCⅡ类分子 单克隆抗体 鉴定

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鸡CD4基因片段原核表达及其单抗制备 被引量：2

11

作者 程航 余为一 《中国家禽》 北大核心 2011年第8期22-24,共3页

将PCR扩增的鸡CD4基因片段克隆到pET-32a原核表达载体,构建获得原核表达重组载体pET-32a-CD4。重组载体导入大肠杆菌BL21(DE3),经过IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和树脂纯化获得融合蛋白His-CD4。以此融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤细... 将PCR扩增的鸡CD4基因片段克隆到pET-32a原核表达载体,构建获得原核表达重组载体pET-32a-CD4。重组载体导入大肠杆菌BL21(DE3),经过IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和树脂纯化获得融合蛋白His-CD4。以此融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤细胞技术制备了1株能够稳定传代并分泌抗CD4多肽单抗的杂交瘤细胞株,命名为3E12。经检测该抗体亚类为IgG2b,单抗腹水的间接ELISA效价为1:105,Westernblot结果显示单抗与CD4多肽能特异性地结合。 展开更多

关键词 鸡 CD4 原核表达 单抗

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2种制备三聚氰胺酶标抗原方法的比较 被引量：2

12

作者 王黎丽 余为一 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第22期13273-13274,共2页

[目的]对直接和间接法制备酶标记三聚氰胺抗原进行比较。[方法]2种方法均用辣根过氧化物酶和过碘酸钠法,但直接法是酶与三聚氰胺偶联,而间接法是用酶标记三聚氰胺与载体蛋白OVA的结合物。用上述方法分别制备了2种酶标抗原后,从酶活性、... [目的]对直接和间接法制备酶标记三聚氰胺抗原进行比较。[方法]2种方法均用辣根过氧化物酶和过碘酸钠法,但直接法是酶与三聚氰胺偶联,而间接法是用酶标记三聚氰胺与载体蛋白OVA的结合物。用上述方法分别制备了2种酶标抗原后,从酶活性、抗原性和效价方面对这2种酶标抗原做质量对比试验。[结果]间接法制备的HRP-OVA-MEL有抗原性,且效价达到1∶2 560以上,而直接法制备的HRP-MEL却没有抗原性,且效价较低。[结论]间接法制备的三聚氰胺酶标抗原的活性比直接法好。 展开更多

关键词 三聚氰胺 辣根过氧化物酶 直接法 间接法

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用噬菌体肽库筛选IBDV单克隆抗体的模拟表位 被引量：2

13

作者 李向红 陈芳芳 +1 位作者 黄成斌 余为一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期231-234,共4页

目的:筛选法氏囊病毒(IBDV)单克隆抗体所针对的模拟抗原表位。方法:以纯化的3株IBDV单克隆抗体为靶分子用噬菌体12肽库筛选相应抗原模拟表位;应用间接和竞争ELISA鉴定所筛选的阳性样品;最后对与抗体高亲和结合的噬菌体进行测序分析。结... 目的:筛选法氏囊病毒(IBDV)单克隆抗体所针对的模拟抗原表位。方法:以纯化的3株IBDV单克隆抗体为靶分子用噬菌体12肽库筛选相应抗原模拟表位;应用间接和竞争ELISA鉴定所筛选的阳性样品;最后对与抗体高亲和结合的噬菌体进行测序分析。结果:经过四轮淘洗,随机挑取30个克隆经间接ELISA鉴定,发现其中22个克隆结合活性较高。进一步应用竞争ELISA,获得14个噬菌体克隆,其抑制率高达50%以上。对这些噬菌体进行DNA测序,并分析比对了IBDV相应序列,确定了3个抗原模拟表位。结论:通过噬菌体随机肽库成功筛选出3个IBDV模拟表位,为进一步研究IBDV抗原性质奠定了基础。 展开更多

关键词 噬菌体肽库 单克隆抗体 IBDV 模拟表位

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鸡Ⅰ类抗原递呈分子亚单位与恒定链的细胞定位及相互关系研究 被引量：2

14

作者 叶红 许发芝 余为一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期528-532,共5页

目的:研究鸡Ⅰ类抗原递呈分子亚单位和鸡恒定链的细胞定位及相互关系。方法:RT-PCR获得鸡MHCⅠ类分子α、β2m亚单位,并进一步构建了能表达红色和绿色荧光蛋白的α、β2m亚单位的真核表达载体,利用脂质体介导法与能表达增强型绿色荧光... 目的:研究鸡Ⅰ类抗原递呈分子亚单位和鸡恒定链的细胞定位及相互关系。方法:RT-PCR获得鸡MHCⅠ类分子α、β2m亚单位,并进一步构建了能表达红色和绿色荧光蛋白的α、β2m亚单位的真核表达载体,利用脂质体介导法与能表达增强型绿色荧光的Ii真核表达载体共转染COS-7细胞,荧光显微镜检测Ii与MHCⅠ亚单位的细胞定位,并通过免疫共沉淀进一步研究它们之间的相互关系。结果:GFP-Ii与MHCⅠα-RFP、MHCⅠβ2m-RFP在细胞中共表达后出现共定位现象,且共定位于细胞的内膜系统;免疫共沉淀结果显示,只有当GFP-Ii链与MHCⅠα-GFP、MHCⅠβ2m-GFP三者共转染后,才可以检测到MHCⅠα-GFP、MHCⅠβ2m-GFP的表达。结论:鸡Ii与单个的MHCⅠα、MHCⅠβ2m亚单位不能有效结合,Ii只有与完整的Ⅰ类抗原递呈分子才能够形成复合体,且共定位于细胞的内膜系统。 展开更多

关键词 鸡 Ⅰ类抗原递呈分子亚单位 恒定链 共定位 免疫沉淀

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基于活性肽Ii-Key与异种病毒抗原表位的疫苗设计及其免疫效应

15

作者 徐姗姗 孙菲菲 +3 位作者 吴亚荣 叶红 李槿年 刘雪兰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1448-1452,共5页

跨膜糖蛋白恒定链在抗原递呈细胞内主要参与主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子与抗原肽复合物的装配,其关键活性基团(Ii-Key)在此过程中发挥重要作用。为了研究Ii-Key携带异种病毒抗原表位能否有效增强机体的免疫应答,本试验首先构建Ii... 跨膜糖蛋白恒定链在抗原递呈细胞内主要参与主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子与抗原肽复合物的装配,其关键活性基团(Ii-Key)在此过程中发挥重要作用。为了研究Ii-Key携带异种病毒抗原表位能否有效增强机体的免疫应答,本试验首先构建Ii-Key与鸡传染性法氏囊病病毒VP2肽表位(aa197-209)和新城疫病毒HN肽表位(aa345-353)的嵌合体,并将嵌合体基因插入pET-32α原核表达载体,转化E.coli Rosetta诱导表达,用镍柱亲和层析纯化融合蛋白,免疫SPF级BALB/c小鼠,分别通过间接酶联免疫吸附试验和免疫印记试验检测小鼠体内的抗体水平和融合蛋白的反应原性。结果表明,与VP2/HN串联表位对照组相比较,Ii-Key/VP2/HN嵌合体疫苗处理组抗体效价平均提高了13.7倍。通过将嵌合体基因导入pmCherry-C1真核表达载体与pEGFP-N1-MHCⅡα共转染293T细胞,结果表明Ii-Key/VP2/HN嵌合体与VP2/HN和空载体蛋白在细胞内均呈现弥散状,与MHCⅡ类分子共定位无明显差异。综上所述,Ii-Key能够携带异种病毒串联抗原表位有效增强免疫应答,其增强机制还有待于进一步研究。 展开更多

关键词 Ii-Key 嵌合体疫苗 抗体水平 细胞转染

原文传递

法氏囊炎病毒VP2基因高变区片段的克隆与鉴定 被引量：1

16

作者 周丽莎 余为一 程帮照 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第21期8941-8942,共2页

[目的]研究法氏囊病毒VP2蛋白的抗原表位在机体免疫应答中的作用和特点。[方法]以接种传染性法氏囊病毒(IBDV)的鸡胚尿囊液为模板,根据Genbank中登录的IBDV的VP2蛋白基因的全序列设计引物,通过RT-PCR扩增获得VP2高变区部分片段,将其克... [目的]研究法氏囊病毒VP2蛋白的抗原表位在机体免疫应答中的作用和特点。[方法]以接种传染性法氏囊病毒(IBDV)的鸡胚尿囊液为模板,根据Genbank中登录的IBDV的VP2蛋白基因的全序列设计引物,通过RT-PCR扩增获得VP2高变区部分片段,将其克隆到原核表达质粒PGEX-4T-1中,经酶切鉴定后,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)BL21,筛选阳性克隆并对其进行测序鉴定。[结果]通过PCR扩增获得一个504bp的扩增片段,序列分析结果表明它与GenBank中登录的IBDV的VP2蛋白基因的核苷酸序列同源性达99.8%,其氨基酸序列的同源性为99.4%,说明各毒株间高变区基因序列保守性很高。[结论]法氏囊炎病毒毒株在两个大小亲水区内的氨基酸都非常保守。 展开更多

关键词 法氏囊病毒 VP2基因 克隆

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鸡恒定链功能片段跨物种增强小鼠对新城疫F2抗原免疫作用的研究 被引量：1

17

作者 王琛 刘雪兰 +1 位作者 陈芳芳 余为一 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2014年第5期33-38,共6页

【目的】研究恒定链（Invariant chain,Ii）功能片段作为载体的跨物种免疫增强作用及其潜在机制。【方法】构建基于鸡Ii功能片段与新城疫病毒抗原表位F2的嵌合体（Ii-F2、Cyt/Tm/Ii-key/F2/AP、Tm/Ii-key/F2/AP、Ii-key/F2/AP、Ii-key/F... 【目的】研究恒定链（Invariant chain,Ii）功能片段作为载体的跨物种免疫增强作用及其潜在机制。【方法】构建基于鸡Ii功能片段与新城疫病毒抗原表位F2的嵌合体（Ii-F2、Cyt/Tm/Ii-key/F2/AP、Tm/Ii-key/F2/AP、Ii-key/F2/AP、Ii-key/F2）,将其定向克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta（DE3）并用IPTG诱导表达,嵌合体融合蛋白纯化后免疫小鼠,用ELISA法测定血清抗体效价。同时,分别构建含鸡Ii和小鼠MHCⅡ类分子基因的真核表达载体,并将其共转染COS7细胞,通过激光共聚焦显微镜观察其在细胞内的共定位。【结果】用F2与Ii-key等Ii功能片段连接的融合蛋白免疫的试验组小鼠的抗体效价,较单独用F2抗原肽免疫的对照组小鼠产生的抗体效价提高了1.5~3倍。显微观察发现,鸡Ii和小鼠MHCⅡ分子在细胞内可以共定位。【结论】Ii具有跨越物种限制增强免疫的作用。 展开更多

关键词 恒定链 肽载体 嵌合体 异种免疫

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鲢鱼恒定链cDNA的克隆及其分子结构分析 被引量：1

18

作者 叶显峰 孟凡涛 +1 位作者 刘洪明 祖国掌 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2013年第3期9-14,共6页

为研究鱼类恒定链(Invariant chain,Ii)的结构与功能,应用RT-PCR和RACE(rapid amplification of cDNAends)法,从脾脏细胞中克隆了鲢(Aristichthys molitrix)Ii基因cDNA,并进行了测序。该基因cDNA全长为1 136bp,其中开放阅读框为699 bp,... 为研究鱼类恒定链(Invariant chain,Ii)的结构与功能,应用RT-PCR和RACE(rapid amplification of cDNAends)法,从脾脏细胞中克隆了鲢(Aristichthys molitrix)Ii基因cDNA,并进行了测序。该基因cDNA全长为1 136bp,其中开放阅读框为699 bp,编码232个氨基酸。比对氨基酸序列发现,鲢与其他物种的Ii链有相同的结构域。将Ii基因cDNA片段和表达不同结构域的DNA片段分别插入真核表达质粒pEGFP-C1,转染真核细胞系COS7,发现鲢Ii跨膜区和胞浆区在细胞内具有定位作用。根据推测的氨基酸序列,分析不同种间Ii的同源性,表明鲢与斑马鱼(Brachydanio rerio)的同源性最高(78%),与人等哺乳动物Ii的同源性较低(30%～40%)。进一步模拟构建和比较不同物种Ii链的3D结构,显示链鱼和小鼠、人和鸡的Ii链结构非常相似,甚至在一些具有重要作用的氨基酸是相同的。上述结果表明,作为重要的免疫分子,不同脊椎动物的Ii链不仅在遗传上具有高度同源性,而且在结构方面仍保持着高度的相似性。 展开更多

关键词 恒定链 鲢(Aristichthys molitrix) RACE 克隆 定位分析

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猪γ干扰素基因的克隆表达及其抗原性的初步研究 被引量：1

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作者 李林 余为一 +1 位作者 张敬梅 刘雪兰 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期32-35,共4页

为研究猪γ干扰素(poIFN-γ)的生物学活性及其在机体免疫应答中的作用机理,克隆并表达了猪IFN-γ基因。首先应用RT-PCR方法通过一对自行设计的引物从猪脾脏淋巴细胞中扩增了猪γ干扰素基因片段,分别将其定向插入原核表达载体pGEX-4T-1和... 为研究猪γ干扰素(poIFN-γ)的生物学活性及其在机体免疫应答中的作用机理,克隆并表达了猪IFN-γ基因。首先应用RT-PCR方法通过一对自行设计的引物从猪脾脏淋巴细胞中扩增了猪γ干扰素基因片段,分别将其定向插入原核表达载体pGEX-4T-1和pET-32 a中,经测序表明与已报道的核苷酸序列同源性为100%。接着将重组质粒pGEX-poIFN-γ和pET-poIFN-γ分别转化大肠杆菌BL21株,经IPTG诱导,得到高效表达。所表达的融合蛋白均以不溶性的包涵体形式存在,分子量分别为43.0和35.0 ku,与理论推算值相符。为研究IFN-γ在表达中结构的变化,采用上述2种融合蛋白分别作为免疫抗原和检测抗原。结果用GST-poIFN-γ免疫小鼠所诱导的抗体可与poIFN-γ产生特异性结合,表明不同原核质粒表达的猪IFN-γ仍保持其特有的结构。 展开更多

关键词 猪Γ干扰素 克隆 原核表达 抗原性

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恒定链辅助肿瘤免疫逃逸的研究进展 被引量：1

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作者 刘雪兰 许发芝 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期846-848,共3页

恒定链（Invariant chain,Ii）属于Ⅱ型跨膜糖蛋白,在MHCⅡ类分子与抗原肽复合物的装配过程中发挥重要作用。在内质网中,Ii在calnexin辅助下形成三聚体,然后与MHCⅡ类分子的α和β链形成九聚体,占据Ⅱ类分子的抗原肽结合槽,阻止内源性... 恒定链（Invariant chain,Ii）属于Ⅱ型跨膜糖蛋白,在MHCⅡ类分子与抗原肽复合物的装配过程中发挥重要作用。在内质网中,Ii在calnexin辅助下形成三聚体,然后与MHCⅡ类分子的α和β链形成九聚体,占据Ⅱ类分子的抗原肽结合槽,阻止内源性抗原肽的结合,与MHCⅡ类分子聚合后将其靶向定位到内体中。此外,Ii还能与MHCⅠ类分子结合,辅助MHCⅠ类分子进行抗原的交叉呈递[1]。 展开更多

关键词 Ⅱ类分子 恒定链 肿瘤免疫逃逸 抗原肽 Ⅱ型跨膜糖蛋白 九聚体 肽结合槽 靶向定位 内源性抗原 递呈

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