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7种致病性弧菌xTAG液相芯片快速筛查方法的建立 被引量:5
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作者 叶硕 杨元斌 +1 位作者 周伟艳 高红 《中国卫生检验杂志》 CAS 2020年第20期2446-2450,共5页
目的基于Luminex悬浮芯片系统,建立7种常见致病性弧菌快速筛查体系,为突发公共卫生事件的应对提供保障。方法菌株来源为本中心2008年-2018年食物中毒或食源性疾病主动监测中分离的125株致病性弧菌。分别针对tox R/S、溶血素h A、外膜蛋... 目的基于Luminex悬浮芯片系统,建立7种常见致病性弧菌快速筛查体系,为突发公共卫生事件的应对提供保障。方法菌株来源为本中心2008年-2018年食物中毒或食源性疾病主动监测中分离的125株致病性弧菌。分别针对tox R/S、溶血素h A、外膜蛋白基因omp等靶基因设计x TAG特异引物。多重PCR扩增后,产物和磁珠与SAPE杂交,通过Luminex 200检测中位荧光强度MFI值来进行分析。结果本体系能特异性鉴别霍乱弧菌、副溶血性弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、拟态弧菌、弗尼斯弧菌及河弧菌等7种常见致病性弧菌,并能对O1和O139霍乱弧菌进行分型。方法检出限最高达到102cfu/ml,批内和批间变异系数均在1.03%~4.37%。125株菌株样品检测与传统分离鉴定方法结果总符合率达94.4%。结论本液相芯片方法快速复核了本地区2008年-2018年食品污染物检测中分离的125株致病性弧菌,结果符合率高。通过完善,本方法能为食品风险的监测和食物中毒的诊断提供有效保障。 展开更多
关键词 致病性弧菌 液相芯片 多重PCR LUMINEX
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2022年浙江省宁波市1例恙虫病东方体Boryong基因亚型感染病例调查分析
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作者 徐可叶 平国华 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1264-1267,共4页
目的对2022年1例恙虫病疑似病例进行实验室检测和分析,了解浙江省宁波市恙虫病东方体基因型流行情况。方法对疑似病例进行流行病学调查,询问其病史;采集病例发热期血液,提取总DNA采用实时荧光定量PCR方法扩增目的基因tsa56,根据测得的... 目的对2022年1例恙虫病疑似病例进行实验室检测和分析,了解浙江省宁波市恙虫病东方体基因型流行情况。方法对疑似病例进行流行病学调查,询问其病史;采集病例发热期血液,提取总DNA采用实时荧光定量PCR方法扩增目的基因tsa56,根据测得的序列构建系统进化树,确定该恙虫病东方体基因型。结果实时荧光定量PCR方法检出病例血液中存在恙虫病东方体;扩增序列经比对后与已知恙虫病东方体Boryong具有最近亲缘关系。结论宁波市实验室确诊1例恙虫病东方体感染病例,为Boryong基因亚型。 展开更多
关键词 恙虫病 恙虫病东方体 Boryong基因亚型 进化分析
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PICU产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药率及其与抗菌药物使用频度相关性分析 被引量:1
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作者 吴军华 阮培森 宋启发 《浙江医学》 CAS 2017年第16期1345-1348,1352,共5页
目的了解儿科重症监护病房(PICU)产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药率、耐药基因及耐药率与抗菌药物使用频度(DDDs)的相关性,为临床儿童重症感染的诊治提供依据。方法采用VITEK-2全自动微生物鉴定仪对102株大肠埃希菌进行鉴定... 目的了解儿科重症监护病房(PICU)产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药率、耐药基因及耐药率与抗菌药物使用频度(DDDs)的相关性,为临床儿童重症感染的诊治提供依据。方法采用VITEK-2全自动微生物鉴定仪对102株大肠埃希菌进行鉴定,采用表型确证试验进行ESBLs检测,采用微量肉汤稀释法检测70株产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林等24种抗菌药物的药物敏感性,采用PCR检测耐药基因。结果 102株大肠埃希菌中,70株产ESBLs,检出率为68.6%。70株产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林和头孢唑啉的耐药率高达95.0%以上,对氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、头孢吡肟、头孢曲松、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、四环素和甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲恶唑也存在较高的耐药率(≥50%),检出1株耐亚胺培南大肠埃希菌。耐药基因检出率:intl1为97.1%,amp C为92.9%,tem为62.9%,CTX-M1为25.7%,CTX-M3为37.1%,acc、DHA1、oxa、shv、NDM、fox、per均未检出。携带2、3和4种耐药基因的菌株分别占25.7%(18/70)、25.7%(18/70)和12.9%(9/70)。产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林/舒巴坦和头孢他啶的耐药率与DDDs值呈正相关(r=0.998和0.999,均P<0.05)。结论 PICU产ESBLs大肠埃希菌检出率高,耐药模式复杂;多数菌株包含多个耐药基因,部分药物的DDDs值与大肠埃希菌耐药率呈高度正相关;合理规范使用抗菌药物,加强耐药的监控具有重要意义。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 耐药基因 药物使用频度
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宁波地区滩涂沉积物中多氯联苯及有机提取物的致突变性 被引量:1
4
作者 闫鹏 施家威 徐景野 《环境与健康杂志》 CAS 北大核心 2015年第7期617-620,共4页
目的研究宁波地区滩涂沉积物中多氯联苯(polychlorinated biphenyls,PCBs)的组成及致突变性。方法于2012年8月,采集杭州湾南岸湿地滩涂地区4个采样点的滩涂沉积物进行7种PCBs(PCB-28、PCB-52、PCB-101、PCB-118、PCB-138、PCB-153与PCB-... 目的研究宁波地区滩涂沉积物中多氯联苯(polychlorinated biphenyls,PCBs)的组成及致突变性。方法于2012年8月,采集杭州湾南岸湿地滩涂地区4个采样点的滩涂沉积物进行7种PCBs(PCB-28、PCB-52、PCB-101、PCB-118、PCB-138、PCB-153与PCB-180)的检测,采用Ames试验检测滩涂沉积物有机提取物(0.25、0.5、1 g/皿)的致突变性。结果在所有4个采样点16个深度的64件沉积物样本中,7种PCBs的检出率依次为PCB-180(98.4%)、PCB-52(92.2%)、PCB-118(89.1%)、PCB-138(84.4%)、PCB-101(82.8%)、PCB-153(81.3%)、PCB-28(60.9%)。7种PCBs的残留总量均值依次为采样点A(5.39μg/kg),采样点C(3.73μg/kg),采样点B(2.79μg/kg),采样点D(1.49μg/kg)。对于TA98-S9,采样点A、B 1 g/皿剂量组滩涂沉积物有机提取物均表现出致突变性,采样点C、D各剂量组均无致突变性;对于TA98+S9,采样点A、B 0.5、1 g/皿剂量组和采样点C、D 1 g/皿剂量组滩涂沉积物中有机提取物均表现出致突变性。对于TA100±S9,4个采样点各剂量组滩涂沉积物有机提取物均无致突变性。结论宁波地区滩涂沉积物受到多氯联苯污染,具有一定程度的致突变性。 展开更多
关键词 滩涂 沉积物 多氯联苯 致突变性
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Luminex x-TAG技术在金黄色葡萄球菌肠毒素快速分型中的应用 被引量:1
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作者 叶硕 郑健 +1 位作者 周伟艳 高红 《中国卫生检验杂志》 CAS 2020年第21期2564-2567,2571,共5页
目的基于Luminex悬浮芯片系统,建立多种金黄色葡萄球菌肠毒素快速筛查体系。方法菌株来源为本中心2012年-2018年食品污染物检测中分离的158株金黄色葡萄球菌。分别设计金黄色葡萄球菌的通用引物及SEA、SEB、SEC、SED、SEE 5种特异性肠... 目的基于Luminex悬浮芯片系统,建立多种金黄色葡萄球菌肠毒素快速筛查体系。方法菌株来源为本中心2012年-2018年食品污染物检测中分离的158株金黄色葡萄球菌。分别设计金黄色葡萄球菌的通用引物及SEA、SEB、SEC、SED、SEE 5种特异性肠毒素分型引物构建成多重引物体系。并通过Luminex200平台进行分析。结果本体系能特异性鉴别金黄色葡萄球菌并对5种肠毒素进行分型,检出限达到103cfu/ml。实际菌株样品5种肠毒素基因总检出率为43.8%(70/160),sea阳性菌株最多(17.5%,28/160)。共发现16种肠毒素基因组合,sea(15株)、sec(9株)、sea+sec(8株)3种基因组合居于前三位。结论本液相芯片方法快速分型了本地区2012年-2018年食品污染物检测中分离的158株金黄色葡萄球菌,发现SEA型仍然是地区优势的毒力因子,为食品风险的监测和食物中毒的诊断提供有效保障。 展开更多
关键词 液相芯片 金黄色葡萄球菌肠毒素 LUMINEX 多重PCR
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副溶血性弧菌热稳定直接溶血素基因转录水平差异研究
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作者 宋启发 叶硕 +2 位作者 徐景野 朱国良 章丹阳 《浙江预防医学》 2014年第8期761-763,767,共4页
目的运用实时荧光定量PCR检测24株副溶血性弧菌热稳定直接溶血素(TDH)基因转录水平差异。方法普通PCR法检测分离自患者、海产品和环境中的副溶血性弧菌tdh基因,tdh阳性菌株提取细菌总RNA后逆转录合成cDNA,检测无DNA污染后定量至同一浓度... 目的运用实时荧光定量PCR检测24株副溶血性弧菌热稳定直接溶血素(TDH)基因转录水平差异。方法普通PCR法检测分离自患者、海产品和环境中的副溶血性弧菌tdh基因,tdh阳性菌株提取细菌总RNA后逆转录合成cDNA,检测无DNA污染后定量至同一浓度,采用实时荧光定量PCR同时检测cDNA产物中tdh基因和内标基因16 S rRNA的Ct值,ΔCt等于tdh的Ct值减去16 S rRNA的Ct值,以ΔCt值反应tdh相对于内标基因16 S rRNA的转录水平。结果 24株副溶血性弧菌的tdh Ct值、内标基因16 S rRNA Ct值和各样本两者之差的ΔCt值结果范围分别为18.04~25.95、8.30~10.93和8.28~15.34,ΔCt最大值与最小值差为7.06,最高转录水平菌株为最低菌株的133倍(ΔΔCt=27.06)。结论副溶血性弧菌tdh基因转录水平存在较大差异,该差异性形成的分子机制以及与该菌的致病性的关系有待进一步研究。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 热稳定直接溶血素 转录 实时荧光定量PCR
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宁波地区志贺菌血清分型、耐药性和毒力分析
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作者 周伟艳 陈万义 +2 位作者 郑剑 高红 叶硕 《中国卫生检验杂志》 CAS 2023年第2期164-168,共5页
目的 了解志贺菌血清型动态、耐药性和毒力情况,为防控和治疗提供依据。方法 志贺菌检测和鉴定采用国家标准方法,药敏试验采用改良K-B法,耐药和毒力基因采用PCR法。结果 254株志贺菌分B、D和C共3个血清群,分别为170株、83株和1株,占66.... 目的 了解志贺菌血清型动态、耐药性和毒力情况,为防控和治疗提供依据。方法 志贺菌检测和鉴定采用国家标准方法,药敏试验采用改良K-B法,耐药和毒力基因采用PCR法。结果 254株志贺菌分B、D和C共3个血清群,分别为170株、83株和1株,占66.93%、32.68%和0.39%。B群又分为10个亚型,其中福氏c亚型(1c、2c和4c)最多,占54.12%(92/170)。ipaH、set1A、set1B、sen、ial和virA毒力基因中,菌株检出率分别为100.00%、88.04%、88.04%、80.43%、93.48%和88.04%,菌株携带毒力基因最多5种,最少2种。药敏检测显示2株B群志贺菌对检测抗生素全部敏感,其余菌株耐药在4种~13种,未检出耐碳青霉烯类抗生素的志贺菌。结论 随着福氏c亚型志贺菌传入本市,其流行株血清型发生了变迁,Fc亚型志贺菌成为新的流行株,且ESBLs株最高,携带毒力基因最多,使其更容易逃避宿主的免疫杀伤,增加临床抗生素治疗难度。 展开更多
关键词 志贺菌 血清型 福氏c亚型 耐药性
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