目的运用实时荧光定量PCR检测24株副溶血性弧菌热稳定直接溶血素(TDH)基因转录水平差异。方法普通PCR法检测分离自患者、海产品和环境中的副溶血性弧菌tdh基因,tdh阳性菌株提取细菌总RNA后逆转录合成cDNA,检测无DNA污染后定量至同一浓度...目的运用实时荧光定量PCR检测24株副溶血性弧菌热稳定直接溶血素(TDH)基因转录水平差异。方法普通PCR法检测分离自患者、海产品和环境中的副溶血性弧菌tdh基因,tdh阳性菌株提取细菌总RNA后逆转录合成cDNA,检测无DNA污染后定量至同一浓度,采用实时荧光定量PCR同时检测cDNA产物中tdh基因和内标基因16 S rRNA的Ct值,ΔCt等于tdh的Ct值减去16 S rRNA的Ct值,以ΔCt值反应tdh相对于内标基因16 S rRNA的转录水平。结果 24株副溶血性弧菌的tdh Ct值、内标基因16 S rRNA Ct值和各样本两者之差的ΔCt值结果范围分别为18.04~25.95、8.30~10.93和8.28~15.34,ΔCt最大值与最小值差为7.06,最高转录水平菌株为最低菌株的133倍(ΔΔCt=27.06)。结论副溶血性弧菌tdh基因转录水平存在较大差异,该差异性形成的分子机制以及与该菌的致病性的关系有待进一步研究。展开更多
文摘目的运用实时荧光定量PCR检测24株副溶血性弧菌热稳定直接溶血素(TDH)基因转录水平差异。方法普通PCR法检测分离自患者、海产品和环境中的副溶血性弧菌tdh基因,tdh阳性菌株提取细菌总RNA后逆转录合成cDNA,检测无DNA污染后定量至同一浓度,采用实时荧光定量PCR同时检测cDNA产物中tdh基因和内标基因16 S rRNA的Ct值,ΔCt等于tdh的Ct值减去16 S rRNA的Ct值,以ΔCt值反应tdh相对于内标基因16 S rRNA的转录水平。结果 24株副溶血性弧菌的tdh Ct值、内标基因16 S rRNA Ct值和各样本两者之差的ΔCt值结果范围分别为18.04~25.95、8.30~10.93和8.28~15.34,ΔCt最大值与最小值差为7.06,最高转录水平菌株为最低菌株的133倍(ΔΔCt=27.06)。结论副溶血性弧菌tdh基因转录水平存在较大差异,该差异性形成的分子机制以及与该菌的致病性的关系有待进一步研究。