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lncRNA DANCR通过调控miR-214-5p在宫颈癌细胞增殖及侵袭中的作用研究 被引量：9
1
作者 李慰 翁立斌 李学和 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第13期1672-1675,共4页
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)通过调控miR-214-5p对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测DANCR在宫颈癌组织和细胞系中的表达情况,向HeLa细胞... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)分化拮抗非蛋白编码RNA(DANCR)通过调控miR-214-5p对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测DANCR在宫颈癌组织和细胞系中的表达情况,向HeLa细胞转染过表达DANCR质粒(过表达DANCR组),并设置Vector组作为对照,检测DANCR的相对表达情况,进一步向过表达DANCR的HeLa细胞中转染miR-214-5p模拟物(DANCR+miR-214-5p组)和miR阴性对照物(DANCR+miR NC组),并设置Vector组作为空白对照组,检测miR-214-5p在各组中的相对表达情况;用细胞计数(CCK-8)法和Transwell实验检测DANCR对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响;用双荧光素酶报告基因实验检测DANCR与miR-214-5p的结合关系。结果DANCR在癌旁组织和宫颈癌组织中的相对表达分别为1.00±0.09,1.79±0.15,差异有统计学意义(P<0.01)。与人宫颈上皮永生化细胞H8相比,DANCR在人宫颈癌细胞系SiHa、HeLa、MS751和HT-3中表达均显著上调(均P<0.01);与Vector组相比,过表达DANCR促进了HeLa细胞的增殖(均P<0.05)。对照组和过表达DANCR组的侵袭细胞数分别为15.33±1.51和28.33±2.76,过表达DANCR组的细胞侵袭能力显著高于对照组(P<0.01)。Vector组和过表达DANCR组中miR-214-5p的相对表达水平分别为1.00±0.09,0.38±0.03,差异有统计学意义(P<0.01)。Vector组、DANCR+miR NC组和DANCR+miR-214-5p组miR-214-5p相对表达分别为1.00±0.10,0.37±0.03,0.84±0.08,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。对照组和DANCR+miR NC组以及DANCR+miR-214-5p组的细胞侵袭数分别为13.66±1.33,19.66±1.94,14.33±1.42,与对照组相比,DANCR+miR NC组的细胞侵袭能力显著增强(P<0.05),与DANCR+miR NC组相比,DANCR+miR-214-5p组的细胞侵袭能力显著降低(P<0.05)。结论DANCR通过调控miR-214-5p促进宫颈癌细胞的增殖及侵袭。 展开更多
关键词 宫颈癌 长链非编码RNA 宫颈癌细胞 增殖 侵袭
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BMI1基因下调使宫颈癌和子宫内膜癌对紫杉醇敏感
2
作者 赵奕婷 林燕 +1 位作者 杨玮丽 陈俊 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第4期924-943,共20页
目的研究B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(BMI1)基因对宫颈癌及子宫内膜癌增殖浸润及紫杉醇耐受的影响及其机制。方法首先利用Cbioportal、TCGA和CPTAC数据库分析BMI1基因在宫颈癌和子宫内膜癌中的突变及表达情况。接着对人宫... 目的研究B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(BMI1)基因对宫颈癌及子宫内膜癌增殖浸润及紫杉醇耐受的影响及其机制。方法首先利用Cbioportal、TCGA和CPTAC数据库分析BMI1基因在宫颈癌和子宫内膜癌中的突变及表达情况。接着对人宫颈癌组织样本和人子宫内膜癌组织样本中BMI1的蛋白质表达水平进行免疫组化分析。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测BMI1敲低后宫颈癌及子宫内膜癌细胞中BMI1下游调控因子的蛋白质水平变化。此外,通过细胞功能实验研究了BMI1在宫颈癌HeLa及子宫内膜癌HEC-1-A细胞中的功能。最后,通过实验评估si BMI1联合紫杉醇治疗的协同抗生长作用。结果数据库分析结果显示,BMI1在1.5%的子宫颈癌患者及1.9%的子宫内膜癌的患者中存在不同程度的扩增、错义及剪接突变。此外,高mRNA水平的BMI1与宫颈癌的病理类型相关,且高蛋白质水平的BMI1与子宫内膜癌的病理类型和肿瘤分级及较低的生存率相关。进一步的免疫组化分析发现,与正常组织相比,宫颈癌和子宫内膜癌组织中BMI1蛋白水平表达升高,且与肿瘤的病理分化及浸润深度相关。药物敏感性实验显示,BMI1过表达导致HeLa及HEC-1-A细胞对多种抗癌药物的敏感性下降,其中包括紫杉醇。为了进一步分析BMI1与紫杉醇耐受的关系,通过Western blot检测BMI1敲除后HeLa及HEC-1-A细胞中BMI1下游因子的蛋白质水平变化。结果显示,抗凋亡相关蛋白Bcl-2随着BMI1的敲低而表达水平下降,而促凋亡相关蛋白BAX则显著升高。此外,细胞功能实验结果显示,体外过表达BMI1可促进HeLa及HEC-1-A细胞的增殖和迁移,且BMI1低表达的HeLa及HEC-1-A细胞对紫杉醇更敏感。结论BMI1在宫颈癌和子宫内膜癌患者的肿瘤组织中过表达,BMI1的下调通过调控凋亡通路使CC和EC细胞对紫杉醇更加敏感。 展开更多
关键词 宫颈癌 子宫内膜癌 BMI1 BCL-2 紫杉醇
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血清外泌体中miR-335-5p作为诊断三阴性乳腺癌的生物标志物研究 被引量：2
3
作者 姚丽娜 陈国忠 +1 位作者 张磊 张勤维 《中华内分泌外科杂志》 CAS 2021年第5期458-462,共5页
目的探讨三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)患者血清外泌体中微小RNA(microRNA-335-5p,miR-335-5p)和重组人血管内皮生长因子受体1(human vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR-1,FLT1)表达水平及其诊... 目的探讨三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)患者血清外泌体中微小RNA(microRNA-335-5p,miR-335-5p)和重组人血管内皮生长因子受体1(human vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR-1,FLT1)表达水平及其诊断价值。方法高通量基因表达数据库(Gene Expression Omnibus database,GEO)分析并筛选乳腺癌组织中差异表达的miRNA,于2016年1月至2017年11月收集宁波大学附属人民医院的56例TNBC患者的外周血标本,分离外泌体并鉴定。生物信息学分析筛选出FLT1作为miR-335-5p的靶基因。qRT-PCR分别检测miR-335-5p、FLT1在血清外泌体中的表达水平。分析miR-335-5p与TNBC患者临床病理参数的关系,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)评估miR-335-5p的诊断价值,Kaplan-Meier生存曲线对miR-335-5p和FLT1做生存预后分析。结果TNBC患者血清外泌体中miR-335-5p表达低于对照组,FLT1在血清外泌体中的表达高于对照组(均P<0.05)。miR-335-5p表达情况与TNBC患者组织分级(χ^(2)=22.02,P<0.0001)、分化程度(χ^(2)=20.67,P<0.0001)、淋巴结转移有关(χ^(2)=4.667,P=0.0308);miR-335-5p诊断ROC下面积为0.8098(95%CI:0.7263~0.8932,P<0.0001)。Kaplan-Meier生存分析显示,miR-335-5p低表达组患者的总生存期较高表达组明显缩短(P=0.0045)。其靶基因FLT1的高表达与低生存率相关(P=0.0480)。结论血清外泌体源性miR-335-5p可作为预测TNBF预后的重要指标,有望在TNBC的诊断和治疗中发挥作用。 展开更多
关键词 miR-335-5p 三阴性乳腺癌 血清外泌体 重组人血管内皮生长因子受体1
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ATR/CHK1通路在卵巢上皮癌发生发展中的作用机制研究 被引量：1
4
作者 李慰 翁立斌 黄慧 《中华内分泌外科杂志》 CAS 2021年第6期612-617,共6页
目的探讨共济失调毛细血管扩张突变基因Rad3相关激酶(ATR)/沉默细胞周期检测点激酶1(CHK1)信号通路在卵巢上皮癌发生、发展过程中的作用。方法体外培养人卵巢上皮癌细胞OVCAR3,分为空白对照组(NC组)、siRNAsc组(转染siRNAsc的OVCAR3细胞... 目的探讨共济失调毛细血管扩张突变基因Rad3相关激酶(ATR)/沉默细胞周期检测点激酶1(CHK1)信号通路在卵巢上皮癌发生、发展过程中的作用。方法体外培养人卵巢上皮癌细胞OVCAR3,分为空白对照组(NC组)、siRNAsc组(转染siRNAsc的OVCAR3细胞)、siRNAATR组(转染siRNAATR的OVCAR3细胞)、VE822组(加入1μmol/L的ATR抑制剂VE822)、和siRNAATR+VE822组。采用siRNA技术和VE822干扰OVCAR3细胞中的ATR,通过实时荧光定量PCR(qRTPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中ATR的表达确定干扰有效后,CCK8法检测各组细胞增殖抑制情况,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡情况,qRTPCR检测卵巢上皮癌细胞中凋亡相关基因半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ATR/CHK1通路相关蛋白的表达。结果siRNA-ATR转染和VE-822干预后,与NC组和siRNA-sc组相比,siRNA-ATR组、VE-822组、siRNA-ATR+VE-822组OVCAR3细胞中ATR的mRNA[(1.55±0.12)、(1.51±0.13)、(0.71±0.11)、(0.73±0.12)、(0.49±0.09)]表达水平显著降低(P<0.05),细胞增殖抑制率[(0.00±0.00)%、(0.00±0.00)%、(32.84±1.08)%、(30.75±1.44)%、(43.90±1.57)%]、细胞G0/G1期的比例[(40.08±2.57)、(36.35±3.44)、(53.28±4.34)、(56.37±5.03)、(70.63±3.81)]、细胞凋亡率[(4.28±0.67)%、(5.35±0.94)%、(23.63±1.13)%、(24.57±1.20)%、(35.86±1.09)%]、Caspase-3、Bax mRNA表达明显升高(P<0.05),S期[(32.93±3.02)、(35.35±2.82)、(25.79±3.61)、(23.74±3.54)、(18.04±2.37)]和G2/M期[(26.99±2.84)、(28.30±2.72)、(20.93±3.01)、(19.98±2.87)、(11.33±2.11)]的细胞比例、Bcl-2 mRNA、ATR、p-CHK1/CHK1、细胞分裂周期蛋白25C(CDC25C)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)蛋白表达显著降低(P<0.05);与siRNA-ATR组相比,siRNA-ATR+VE-822组细胞中ATR的mRNA表达水平进一步降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、细胞凋亡、Caspase-3、Bax mRNA表达进一步增� 展开更多
关键词 卵巢上皮癌 细胞增殖 细胞凋亡 共济失调毛细血管扩张突变基因Rad3相关激酶/沉默细胞周期检测点激酶1
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