产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种导致新生犊牛和仔猪腹泻的主要病原体之一。ETEC的毒力因子主要有黏附素(CFs)、不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST)三种。在前期研究中,利用PCR和酶切连接技术成功构建了两种ETEC亚单位疫苗3STaM(G)-K99...产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种导致新生犊牛和仔猪腹泻的主要病原体之一。ETEC的毒力因子主要有黏附素(CFs)、不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST)三种。在前期研究中,利用PCR和酶切连接技术成功构建了两种ETEC亚单位疫苗3STaM(G)-K99和3STaM(S)-K99,且在大肠杆菌中获得高效表达。本研究利用阴离子交换层析纯化融合蛋白3STaM(G)-K99 and3STaM(S)-K99,辅以弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,通过Elisa分析其免疫学性质,并利用肠毒素中和实验在昆明系乳鼠中评价其激发抗STa中和抗体的能力。实验结果表明:亚单位疫苗3STaM(G)-K99 and 3STaM(S)-K99能够激发相对较高水平、可针对天然STa、ETEC和融合蛋白STa-K99的特异性抗体。其次,亚单位疫苗中STa突变体(STaM)组分的肠毒素活性显著降低,且其所激发的特异性抗体属于中和抗体,能有效抑制天然STa的肠毒素活性。亚单位疫苗3STaM(G)-K99 and3STaM(S)-K99为研制预防ETEC感染性腹泻的多价基因工程疫苗提供了基本素材和理论指导。展开更多
文摘产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是一种导致新生犊牛和仔猪腹泻的主要病原体之一。ETEC的毒力因子主要有黏附素(CFs)、不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST)三种。在前期研究中,利用PCR和酶切连接技术成功构建了两种ETEC亚单位疫苗3STaM(G)-K99和3STaM(S)-K99,且在大肠杆菌中获得高效表达。本研究利用阴离子交换层析纯化融合蛋白3STaM(G)-K99 and3STaM(S)-K99,辅以弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,通过Elisa分析其免疫学性质,并利用肠毒素中和实验在昆明系乳鼠中评价其激发抗STa中和抗体的能力。实验结果表明:亚单位疫苗3STaM(G)-K99 and 3STaM(S)-K99能够激发相对较高水平、可针对天然STa、ETEC和融合蛋白STa-K99的特异性抗体。其次,亚单位疫苗中STa突变体(STaM)组分的肠毒素活性显著降低,且其所激发的特异性抗体属于中和抗体,能有效抑制天然STa的肠毒素活性。亚单位疫苗3STaM(G)-K99 and3STaM(S)-K99为研制预防ETEC感染性腹泻的多价基因工程疫苗提供了基本素材和理论指导。
