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碳源和氮源对5-酮基-葡萄糖酸生成的影响 被引量：4
1
作者 谭之磊 王洪翠 +3 位作者 魏彧翘 李艳艳 钟成 贾士儒 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期76-82,共7页
氧化葡萄糖杆菌Gluconobacter oxydans可以将葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并进一步氧化成2-酮基-葡萄糖酸(2KGA)和5-酮基-葡萄糖酸(5KGA),其中5KGA在催化剂的作用下能够转化为L(+)-酒石酸。为了提高5-酮基-葡萄糖酸产量,以仅生成5KGA的氧化葡... 氧化葡萄糖杆菌Gluconobacter oxydans可以将葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并进一步氧化成2-酮基-葡萄糖酸(2KGA)和5-酮基-葡萄糖酸(5KGA),其中5KGA在催化剂的作用下能够转化为L(+)-酒石酸。为了提高5-酮基-葡萄糖酸产量,以仅生成5KGA的氧化葡萄糖杆菌Gluconobacter oxydans HGI-1为出发菌株,研究不同碳源(蔗糖、乳糖、麦芽糖、淀粉、葡萄糖)和有机氮源(酵母浸粉、鱼粉、玉米浆、黄豆饼粉、棉籽饼粉)对5KGA产量的影响。500 mL摇瓶试验结果表明,当葡萄糖浓度为100 g/L时,5KGA产量最高为98.20 g/L;当有机氮源为酵母浸粉、鱼粉和玉米浆,其添加量的蛋白含量为1.60%时,5KGA产量分别为100.20 g/L、109.10 g/L和99.83 g/L,其中,使用鱼粉的5KGA产量最高,使用玉米浆的5KGA产量比酵母浸粉略低。出于经济考虑,文中选择玉米浆作有机氮源,并在5 L发酵罐中进行分批发酵放大试验,5KGA的产量为93.80 g/L,最大生成速率为3.48 g/(L·h),平均生成速率为1.56 g/(L·h)。结果表明,葡萄糖和玉米浆分别为Gluconobacter oxydans HGI-1规模化生产5KGA的最适碳源和氮源,可利用葡萄糖几乎全部(85.93%)转化为5KGA。 展开更多
关键词 氧化葡萄糖杆菌HGI-1 5-酮基-葡萄糖酸 碳源 氮源 分批发酵
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粗糙脉孢菌蛋白表达系统构建研究 被引量：1
2
作者 高染染 刘倩 +3 位作者 孙文良 孙志勇 刘浩 田朝光 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期160-169,共10页
旨在将模式丝状真菌粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)构建为蛋白质表达系统。通过真菌杂交技术构建出粗糙脉孢菌六突变缺失菌株LQ-1(Δ3βG∷Δ2cbh∷Δhis3)作为蛋白表达宿主菌株。该宿主菌株可以用纤维二糖作为诱导物诱导纤维素酶启动... 旨在将模式丝状真菌粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)构建为蛋白质表达系统。通过真菌杂交技术构建出粗糙脉孢菌六突变缺失菌株LQ-1(Δ3βG∷Δ2cbh∷Δhis3)作为蛋白表达宿主菌株。该宿主菌株可以用纤维二糖作为诱导物诱导纤维素酶启动子表达,同时又消除了葡萄糖苷酶蛋白的背景条带,有利于目标蛋白表达纯化。构建了分别含有粗糙脉孢菌自身强启动子(Pcbh-1、Pcbh-2和Ptef-1)的3个新的高效表达载体,该载体带有融合标签蛋白tev-6×his-gfp,能高效方便的筛选阳性转化子,有利于后续目标蛋白纯化。以纤维素酶GH3-4和CBH-1为例,通过重组表达菌株纤维二糖诱导发酵液进行酶活测定、SDS-PAGE电泳分析和Western blotting检测显示,重组蛋白GH3-4-GFP和CBH-1-GFP成功进行了表达和分泌,分泌水平分别为2.77和2.83 mg/L。Pcbh-1启动子重组蛋白表达水平最高,说明在纤维二糖诱导体系中启动子Pcbh-1的启动效率最高,初步建立了粗糙脉孢菌纤维二糖诱导的蛋白质表达体系。 展开更多
关键词 丝状真菌 粗糙脉孢菌 蛋白表达系统 纤维二糖 强启动子
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兽疫链球菌ATCC39920可控诱导表达系统的构建及其应用
3
作者 郑小娥 王震 刘浩 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期130-136,共7页
旨在构建一种在兽疫链球菌(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)中可用的基因诱导表达系统,并探究其在两步发酵中的应用。分别构建蔗糖、乳糖、木糖和乳酸链球菌素(nisin)诱导表达载体,以编码透明质酸合成酶的has A基因作为报告基... 旨在构建一种在兽疫链球菌(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)中可用的基因诱导表达系统,并探究其在两步发酵中的应用。分别构建蔗糖、乳糖、木糖和乳酸链球菌素(nisin)诱导表达载体,以编码透明质酸合成酶的has A基因作为报告基因,以has A基因功能缺失导致荚膜缺陷的?has A作为宿主菌,观察诱导后荚膜生成情况验证系统的可行性。结果显示,木糖和nisin系统不能诱导has A表达,乳糖系统诱导表达效率低,蔗糖系统可严谨且高效诱导基因表达。以?has A/p LH201菌株实施两步发酵,葡萄糖为唯一糖源时仅用于菌体生长,添加蔗糖诱导产生透明质酸,终产量达到3.4 g/L。成功构建了一种以蔗糖为诱导物的可控-诱导基因表达系统,可用于兽疫链球菌两步发酵。 展开更多
关键词 兽疫链球菌 可控诱导表达系统 可控两步发酵 透明质酸
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b型流感嗜血杆菌发酵工艺的优化
4
作者 李贵凡 李秀梅 +1 位作者 魏文进 路福平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期763-766,共4页
目的优化b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)的发酵工艺,以提高Hib荚膜多糖的产率。方法通过考察初始pH值和葡萄糖浓度对培养液菌体浓度(A550值)及多糖产率的影响,优化摇瓶培养条件;通过考察溶氧百分比、恒定pH值及补... 目的优化b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)的发酵工艺,以提高Hib荚膜多糖的产率。方法通过考察初始pH值和葡萄糖浓度对培养液菌体浓度(A550值)及多糖产率的影响,优化摇瓶培养条件;通过考察溶氧百分比、恒定pH值及补加葡萄糖对Hib生长和多糖产率的影响,优化20 L发酵罐的培养条件。以优化的发酵工艺连续进行3批Hib发酵,考察优化发酵工艺的稳定性。结果优化的摇瓶培养条件为:初始pH值为7.2,初始葡萄糖浓度为6 g/L。优化的发酵工艺为:溶氧百分比控制在20%,控制pH值恒定为7.2,于接种后5 h开始补加200 g/L葡萄糖,速率为3 ml/min。与优化前相比,Hib对数生长期由8 h延长至10 h左右,菌体终浓度(A550值)由1.5提高至3.4,Hib荚膜多糖产率由63 mg/L提高至96 mg/L。以优化的发酵工艺培养的3批Hib培养物菌体终浓度(A550值)在3.3～3.7之间,多糖产率在92～98 mg/L之间,稳定性较好。结论优化的发酵工艺可延长Hib对数生长期、促进菌体生长、提高荚膜多糖产率。 展开更多
关键词 B型流感嗜血杆菌 发酵 优化
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萜类合成酶定向进化的新思路 被引量：2
5
作者 胡智慧 翁彦如 +2 位作者 谌柄旭 于爱群 肖冬光 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期591-600,共10页
萜类化合物是天然产物中种类最多且主要存在于植物和微生物体内的一类化合物。随着越来越多具有应用价值的萜类化合物被挖掘,其应用前景引起了人们的关注,但由于含量低、提取成本高等缺点,因此制约了萜类化合物的广泛应用。合成生物学... 萜类化合物是天然产物中种类最多且主要存在于植物和微生物体内的一类化合物。随着越来越多具有应用价值的萜类化合物被挖掘,其应用前景引起了人们的关注,但由于含量低、提取成本高等缺点,因此制约了萜类化合物的广泛应用。合成生物学的兴起,为异源合成具有应用价值的萜类化合物提供了新思路,使构建定向、高效的微生物细胞工厂成为现实。萜类合成酶常作为萜类化合物异源合成代谢调控的靶酶,但天然的萜类合成酶存在催化效率低、底物专一性差、立体/区域选择性差、稳定性差等问题,严重影响萜类化合物的产量。萜类合成酶的定向进化可以有效地解决上述问题,为实现微生物细胞工厂异源、高效合成萜类化合物奠定基础。本文综述了近年来酶的定向进化技术的最新进展及应用,并提出了萜类合成酶定向进化的策略。 展开更多
关键词 萜类化合物 萜类合成酶 合成生物学 定向进化
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发酵桔梗活性成分分析及抗氧化能力研究 被引量：1
6
作者 张月 赵崇杰 +6 位作者 韩先磊 孙杨 罗学刚 霍金海 张同存 王伟明 王楠 《中国现代中药》 CAS 2022年第11期2101-2108,共8页
目的:筛选有助于提高桔梗发酵液活性成分的优势菌株,研究微生物发酵前后桔梗抗氧化能力的变化。方法:以分离得到的来源于新鲜桔梗根部土壤的巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium ZY2104、人参芽孢杆菌B.ginsengisoli ZY2103,来源于桔梗泡... 目的:筛选有助于提高桔梗发酵液活性成分的优势菌株,研究微生物发酵前后桔梗抗氧化能力的变化。方法:以分离得到的来源于新鲜桔梗根部土壤的巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium ZY2104、人参芽孢杆菌B.ginsengisoli ZY2103,来源于桔梗泡菜的类肠膜魏斯菌Weissella paramesenteroides ZY2101、绿色魏斯菌W.viridescens ZY2102,以及实验室已有的鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus sw01、枯草芽孢杆菌B.subtilis RZ001、啤酒酵母Saccharomyces pastorianus S5、酿酒酵母S.cerevisiae AY12和S.cerevisiae BY14作为实验菌对桔梗进行发酵,检测发酵前后桔梗中总多酚、总黄酮、总多糖含量的变化;通过测定桔梗皂苷D含量、总抗氧化能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、羟基自由基清除率、还原能力分析微生物发酵对桔梗提取液体外抗氧化能力的影响。结果:在温度37℃、时间72 h、接种量2%的条件下,相较于其他菌株及未发酵组,巨大芽孢杆菌ZY2104发酵的桔梗提取液中总多酚、总黄酮、总多糖的质量浓度显著提高,分别为(5.06±0.05)、(5.83±0.06)、(8.96±0.14)mg·mL^(-1)。抗氧化活性实验结果表明,相对于未发酵组,巨大芽孢杆菌ZY2104发酵组具有较强的总抗氧化能力、DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率及还原能力(P<0.05)。结论:筛选得到巨大芽孢杆菌ZY2104可作为发酵桔梗的优势菌株,可以显著提高桔梗提取液中主要活性成分含量和抗氧化能力。 展开更多
关键词 桔梗 功效物质 发酵 抗氧化
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