miRNA在恶性肿瘤诊断与治疗中的进展 被引量：10

1

作者 康春生 尤永平 浦佩玉 《中国神经肿瘤杂志》 2007年第2期138-141,共4页

微小RNA(microRNA或miRNA)是指长度约21～25nt的某些特殊的小型非编码RNA组成的家族,miRNA在转录后水平通过促进靶mRNA的降解和/或抑制翻译过程而发挥负调控基因表达的过程,并与个体发育、干细胞分化和疾病发生密切相关,在包括胶质瘤在... 微小RNA(microRNA或miRNA)是指长度约21～25nt的某些特殊的小型非编码RNA组成的家族,miRNA在转录后水平通过促进靶mRNA的降解和/或抑制翻译过程而发挥负调控基因表达的过程,并与个体发育、干细胞分化和疾病发生密切相关,在包括胶质瘤在内的所有恶性肿瘤的发病机制、早期诊断以及寻找新的治疗策略的研究中意义重大。 展开更多

关键词 微小RNA 肿瘤 诊断 治疗

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反义及显性负调节AKT2抑制胶质瘤侵袭和迁移的实验研究 被引量：6

2

作者 康春生 浦佩玉 +1 位作者 王广秀 李捷 《中国神经肿瘤杂志》 2004年第4期253-259,共7页

近来的研究显示AKT激酶家族成员在调节细胞生长、增殖、存活和代谢等方面的信号传导系统中起着极为重要的作用。本文以AKT2为对象,研究反义AKT2 cDNA(antisense AKT2,AS-AKT2)和显性负调节AKT2(dominant negative AKT2,DN-AKT2)cDNA构... 近来的研究显示AKT激酶家族成员在调节细胞生长、增殖、存活和代谢等方面的信号传导系统中起着极为重要的作用。本文以AKT2为对象,研究反义AKT2 cDNA(antisense AKT2,AS-AKT2)和显性负调节AKT2(dominant negative AKT2,DN-AKT2)cDNA构建体调控恶性胶质瘤侵袭性生长的作用及其机制。方法:利用反义AKT2 cDNA和显性负调节AKT2cDNA构建体转染鼠脑胶质瘤细胞系C6,分别在RNA水平和蛋白水平阻断AKT2通路,将野生型和转染pLXSN空载体的C6细胞作为对照。原位杂交和蛋白印迹鉴定后,Transwell和球体培养法分析侵袭能力,球体培养和划痕实验研究细胞迁移能力,明胶酶谱分析转染前后MMP2/9酶活性变化。结果:原位杂交和蛋白印迹结果表明,C6胶质瘤细胞系在mRNA和蛋白水平均高表达AKT2;转染AS-AKT2后AKT2表达被显著抑制,但转染DN-AKT2后AKT2表达无明显变化。C6细胞转染AKT2构建体后应用体外侵袭和迁移的实验量化分析这种效应后发现:利用Matrigel夹心法和Transwell方法研究发现,C6细胞转染AKT2构建体后侵袭能力下降46%～57%,细胞迁移能力下降23%～42%。明胶酶谱分析发现MMP2/9和pro-MMP9的活性被明显抑制。结论:AKT2可以通过调节MMP2/9活性调控恶性胶质瘤侵袭性生长,因此AKT2可能成为抑制胶质瘤侵袭性生长的新靶标。 展开更多

关键词 胶质瘤 AKT2 基因转染 侵袭 迁移

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miR-451对胶质瘤细胞株A172生物学特征的影响 被引量：6

3

作者 南阳 韩磊 +3 位作者 张安玲 浦佩玉 钟跃 康春生 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2010年第9期847-850,共4页

目的 研究miR-451对胶质瘤细胞株A172生物学特征的影响.方法 合成寡核苷酸miR-451拟似物（miR-451 mimics）转染胶质瘤细胞以上调miR-451的表达,real-time PCR检测转染后miR-451的表达,Western印迹法检测目标蛋白表达,应用流式细胞术、... 目的 研究miR-451对胶质瘤细胞株A172生物学特征的影响.方法 合成寡核苷酸miR-451拟似物（miR-451 mimics）转染胶质瘤细胞以上调miR-451的表达,real-time PCR检测转染后miR-451的表达,Western印迹法检测目标蛋白表达,应用流式细胞术、MTT法评价细胞生长和增殖的生物学特征变化.结果 转染miR-451 mimics后,real-time PCR检测提示miR-451表达升高,Western blot结果显示癌基因C-myc表达下降＞63.6%,细胞周期正向调节因子CDK2、CDK4、Cyclin D1和Cyclin E表达下降;细胞周期分析表明miR-451 mimics组进入G0/G1期的细胞数较对照组增多达17.4%,出现G0/G1期阻滞;MTT法分析显示miR-451 mimics组细胞生长受抑.结论 miR-451可以抑制人脑胶质瘤细胞生长和增殖能力,具有抑瘤作用. 展开更多

关键词 MicroRNA-451 神经胶质瘤 细胞增殖 细胞周期

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反义抑制miR-106b表达对人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响 被引量：3

4

作者 叶敏华 张安玲 +5 位作者 吴雷 王坤 王广秀 贾志凡 黄强 祝新根 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2015年第1期60-65,共6页

目的 探讨抑制miR-106b过表达对人脑胶质瘤细胞株增殖和侵袭的影响.方法 培养人脑U251、LN229及TJ905胶质瘤细胞,并将其分为细胞对照组,转染阴性对照组（简称阴性对照组）,转染miR-106b inhibitors组（简称106b inh组）.将反义miR-106b... 目的 探讨抑制miR-106b过表达对人脑胶质瘤细胞株增殖和侵袭的影响.方法 培养人脑U251、LN229及TJ905胶质瘤细胞,并将其分为细胞对照组,转染阴性对照组（简称阴性对照组）,转染miR-106b inhibitors组（简称106b inh组）.将反义miR-106b用脂质体转染于人脑胶质瘤细胞中,抑制miR-106b的表达.采用实时定量PCR法检测转染后胶质瘤细胞miR-106b的表达,流式细胞术检测细胞周期的变化、噻唑兰比色分析法检测细胞增殖能力、软琼脂克隆形成实验评价细胞非锚定依赖性生长能力及Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 与细胞对照组,阴性对照组比较,（1） 106b inh组3种胶质瘤细胞中miR-106b的表达均被明显抑制;细胞周期进展被抑制,S期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例增加,其中U251、TJ905细胞的周期时相分布差异有统计学意义（P值均＜0.05）,LN229细胞的周期时相分布差异无统计学意义;（2） 106b inh组转染抑制后48 h,3种胶质瘤细胞的增殖能力均明显减弱,P＜ 0.05;（3）细胞的克隆形成能力也被明显抑制[克隆形成率分别为,U251：（10.6±0.9）％、（10.5±1.2）％对比（3.3±0.4）％;LN229：（12.5±1.7）％、（11.0±2.4）％对比（4.1±0.3）％;TJ905：（9.9±1.2）％、（10.2±0.6）％对比（3.5±0.4）％.P值均＜0.01];（4）穿过Transwell小室的细胞数明显降低[U251：（90.6±5.7）、（85.2±6.1）个对比（27.6±4.0）个;LN229：（22.6±3.7）、（21.2±3.7）个对比（2.4±1.5）个;TJ905：（79.4±4.4）、（76.8±5.9）个对比（11.8±3.2）个.P值均＜0.0l].结论 下调miR-106b的表达可抑制胶质瘤细胞的增殖、生长和侵袭能力. 展开更多

关键词 微RNAS RNA 反义 神经胶质瘤 细胞增殖 肿瘤侵润 体外研究

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miR-181a和miR-181b抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭 被引量：2

5

作者 石磊 钱进 +7 位作者 程子昊 王栋 张军霞 李瑞 康春生 浦佩玉 尤永平 傅震 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2010年第4期365-368,共4页

目的探讨miR-181a和miR-181b对胶质瘤细胞增殖和侵袭等影响。方法通过实时荧光定量PCR检测miR-181a和miR-181b在胶质瘤组织和细胞株中的表达情况。我们合成miR-181a和miR-181b寡聚核苷酸及构建pre—miR-181a和pre—miR-181b表达载体，... 目的探讨miR-181a和miR-181b对胶质瘤细胞增殖和侵袭等影响。方法通过实时荧光定量PCR检测miR-181a和miR-181b在胶质瘤组织和细胞株中的表达情况。我们合成miR-181a和miR-181b寡聚核苷酸及构建pre—miR-181a和pre—miR-181b表达载体，转染胶质瘤细胞，通过MTF、Transwell实验、流式检测和软琼脂实验，观察上调miR-181a和miR-181b表达后对胶质瘤细胞增殖、侵袭、转化能力和细胞凋亡的影响。结果miR-181a和miR-181b在胶质瘤组织和细胞株较正常脑组织均呈过低表达；miR-181a表达水平与胶质瘤等级呈负相关。上调miR-181a和miR-181b表达能有效抑制胶质瘤细胞生长，降低其转化和侵袭能力，诱导凋亡。结论胶质瘤中异常低表达的miR-181a和miR-181b可能发挥着肿瘤抑制因子作用。 展开更多

关键词 miR-181a miR-181b 增殖 侵袭 神经胶质瘤

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不同AKT1与AKT2表达状态的胶质瘤的生存分析 被引量：1

6

作者 史振东 周旋 +4 位作者 韩磊 张安玲 兰凤鸣 浦佩玉 康春生 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2012年第1期93-96,共4页

目的 探讨AKT1与AKT2在脑胶质瘤中的表达及与患者生存期的相关性.方法 免疫荧光法检测手术切除的50例胶质瘤组织标本中AKT1及AKT2的表达水平,确定两者表达的相关性并与生存期进行相关性分析.结果 Log - rank单因素检验,年龄≥50岁、KPS... 目的 探讨AKT1与AKT2在脑胶质瘤中的表达及与患者生存期的相关性.方法 免疫荧光法检测手术切除的50例胶质瘤组织标本中AKT1及AKT2的表达水平,确定两者表达的相关性并与生存期进行相关性分析.结果 Log - rank单因素检验,年龄≥50岁、KPS评分＜ 80分和WHO Ⅲ～Ⅳ级患者的生存期显著缩短.胶质瘤组织中AKT1及AKT2在WHOⅢ～Ⅳ级的表达率显著高于WHO Ⅰ～Ⅱ级,两者表达存在正相关,且与患者的生存期呈负相关.结论 AKT1与AKT2的表达状态对预测患者的生存期具有一定的临床价值. 展开更多

关键词 神经胶质瘤 总生存期 AKT1 AKT2

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敲低亮氨酰-tRNA合成酶抑制人胶质瘤细胞U251增殖和迁移的体外研究 被引量：1

7

作者 谭富强 张安玲 +6 位作者 南阳 王乐 叶敏华 王广秀 贾志凡 康春生 钟跃 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2014年第4期409-413,共5页

目的探究敲低亮氨酰-tRNA合成酶（LARS）表达对U251细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用脂质体转染LARS小干扰RNA（LARSsiRNA）于U251。PCR、Westernblot检测LARS表达；MTr法、平板克隆检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期及Trans... 目的探究敲低亮氨酰-tRNA合成酶（LARS）表达对U251细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用脂质体转染LARS小干扰RNA（LARSsiRNA）于U251。PCR、Westernblot检测LARS表达；MTr法、平板克隆检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期及Transwell法检测细胞迁移能力。结果较对照组和无义序列组，转染LARSsiRNA后LARSmRNA和蛋白水平明显降低，自转染48h后细胞增殖率明显下降（P〈0．05），且克隆形成率分别较对照组和无义序列组降低了51．69％和50．45％，G0／G1期比例分别增高了38．34％和31．93％，穿膜细胞数分别减少了81．78％和81．45％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论敲低LARS表达可明显抑制U251生长增殖和迁移能力。LARS基因有望成为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点。 展开更多

关键词 亮氨酰-TRNA合成酶 神经胶质瘤 细胞增殖 细胞迁移 小干扰RNA

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microRNA-451对人脑胶质瘤细胞株A172增殖和凋亡的影响 被引量：12

8

作者 南阳 钟跃 +3 位作者 康春生 韩磊 张安玲 浦佩玉 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1375-1377,共3页

目的 观察microRNA-451（miR-451）对胶质瘤细胞株A172增殖和凋亡的影响.方法 合成寡核苷酸miR-451拟似物（miR-451 mimics）转染A172细胞,实时聚合酶链反应（Real-time PCR）检测转染后miR-451的表达,Western blot法检测蛋白表达,应用... 目的 观察microRNA-451（miR-451）对胶质瘤细胞株A172增殖和凋亡的影响.方法 合成寡核苷酸miR-451拟似物（miR-451 mimics）转染A172细胞,实时聚合酶链反应（Real-time PCR）检测转染后miR-451的表达,Western blot法检测蛋白表达,应用流式细胞术、噻唑蓝（MTT）比色法和Annexin Ⅴ法评价miR-451对A172细胞生长、增殖和凋亡的影响.结果 与对照组比较,miR-451 mimics转染组细胞miR-451表达升高＞6倍 Western blot法显示癌基因AKT1表达下降到（43.81±5.20）%、Cyclin D1（56.09±3.40）%和bcl-2（63.49±3.70）%,抑癌基因p27表达升高到（145.51±6.70）% 细胞周期G0/G1期细胞增多达17.4%,出现G0/G1期阻滞 MTT法分析显示细胞生长受抑＞35% Annexin Ⅴ法检测显示细胞凋亡明显升高＞15%.结论 miR-451可抑制人脑胶质瘤细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡,具有抑瘤作用. 展开更多

关键词 microRNA-451 胶质瘤 增殖

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胶质瘤中EGFR扩增、过表达及其与肿瘤增殖关系的研究 被引量：8

9

作者 董伦 浦佩玉 +2 位作者 王虎 康春生 王广秀 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2005年第12期1204-1207,1212,共5页

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)在胶质瘤中扩增、过表达及其在肿瘤增殖中的作用机制。方法应用SP免疫组化法、RT-PCR、Southern印迹法检测6例正常脑组织、50例不同级别胶质瘤及2个体外胶质瘤细胞系中在EGFR蛋白水平、mRNA水平、DNA水... 目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)在胶质瘤中扩增、过表达及其在肿瘤增殖中的作用机制。方法应用SP免疫组化法、RT-PCR、Southern印迹法检测6例正常脑组织、50例不同级别胶质瘤及2个体外胶质瘤细胞系中在EGFR蛋白水平、mRNA水平、DNA水平的表达及扩增情况,以及与肿瘤增殖活性的相关性。结果不同级别的胶质瘤中,表达与扩增程度不同,Ⅱ级与Ⅲ、Ⅳ级肿瘤之间比较具有显著性差异;EGFR过表达与Ki-67在胶质瘤中的表达呈正相关,而EGFR过表达与扩增并不一致。结论EGFR过表达与胶质瘤的增殖活性增高有密切相关性,推测EGFR过表达是肿瘤进展中的早期事件而非进展期事件。 展开更多

关键词 神经胶质瘤 表皮生长因子受体 扩增 免疫组化

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RNA干扰联合抑制PI3KP85和AKT1表达对U251胶质瘤细胞侵袭的影响 被引量：7

10

作者 韩磊 张安玲 +5 位作者 岳晓 杨旸 王广秀 贾志凡 浦佩玉 康春生 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期566-570,共5页

目的 探讨应用RNA干涉（RNAi）技术抑制U251恶性胶质瘤细胞丝/苏氨酸蛋向激酶1（AKT1）和3-羧基磷脂酰肌醇激酶的85000催化亚基（P13KP85）表达后对U251胶质瘤细胞侵袭的抑制作用.方法 实验设正常对照组（未做任何处理）;阴性对照组（rA... 目的 探讨应用RNA干涉（RNAi）技术抑制U251恶性胶质瘤细胞丝/苏氨酸蛋向激酶1（AKT1）和3-羧基磷脂酰肌醇激酶的85000催化亚基（P13KP85）表达后对U251胶质瘤细胞侵袭的抑制作用.方法 实验设正常对照组（未做任何处理）;阴性对照组（rAd-HK组）：用无义序列重组腺病毒感染U251胶质瘤细胞;基凶治疗组（rAd-A＋P组）：用靶向AKT1和P13KP85的重组腺病毒感染U251胶质瘤细胞.应用实时PCR检测AKT1和P13KP85 mRNA水平的变化;应用Western blot方法 检测AKT1和P13KP85蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析;应用酶联免疫分析法（ELISA）检测细胞外基质金属蛋白酶2（MMP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9）浓度的变化;应用划痕和Transwell实验评价肿瘤细胞侵袭能力的变化.结果tAd-A＋P 可显著抑制U251胶质瘤细胞AKT1和P13KP85的表达.与正常对照组和rAd-HK组比较.rAd-A＋P组MMP2、MMP9表达下降,而基质金属蛋白酶抑制因子（TMP2）表达上调,差异有统计学意义（P〈0.05）.划痕和Transwell实验显示rAd-A＋P组细胞体外侵袭能力明显减弱.结论 靶向AKT1和P13KP85的RNAi技术可以显著抑制U251胶质瘤细胞AKT1和PDKP85表达,对U251胶质瘤细胞的侵袭能力产生明显抑制作用. 展开更多

关键词 神经胶质瘤 肿瘤浸润 RNA干扰 丝/苏氨酸蛋白激酶1 3-羧基磷脂酰肌醇激酶

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胶质瘤干细胞增强血管形成及与微血管的关系 被引量：6

11

作者 于圣平 杨学军 +6 位作者 张斌 明浩朗 刘彬 刘志峰 任炳成 陈聪 高伟 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期452-456,共5页

目的持续动态观察胶质瘤干细胞肿瘤生成和参与血管形成过程，研究不同生长阶段皮下移植瘤中干细胞分布与血管的关系。方法干细胞培养基和免疫磁珠分选法获得c6细胞来源的CD133^＋细胞。建立CD133^＋细胞SD大鼠耳朵模型观察胶质瘤干细胞... 目的持续动态观察胶质瘤干细胞肿瘤生成和参与血管形成过程，研究不同生长阶段皮下移植瘤中干细胞分布与血管的关系。方法干细胞培养基和免疫磁珠分选法获得c6细胞来源的CD133^＋细胞。建立CD133^＋细胞SD大鼠耳朵模型观察胶质瘤干细胞生成肿瘤及促进肿瘤血管形成情况。免疫组化染色研究不同生长阶段移植瘤中干细胞的分布与血管的关系及缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）与这种分布的相关性。Westernblot法检测各生长阶段肿瘤中CD133蛋白的表达情况。结果成功分离和鉴定了C6细胞来源的CD133^＋细胞，并建立了SD大鼠耳朵模型可以实时动态的观察干细胞参与血管形成和肿瘤生成情况。SD大鼠皮下C6胶质瘤模型显示：在肿瘤形成的初期，CD133^＋细胞在肿瘤内散在分布，随着肿瘤的生长，CD133^＋细胞开始趋向于微血管，肿瘤生长的后期CD133^＋细胞在血管周成簇分布；同时随着肿瘤的生长，CD133蛋白的表达也随之增强，Westernblot检测接种后6、9、12、15、20d肿瘤中CD133表达量的吸光度值分别为0．208±0．004、0．282±0．003、0．360±0．004、0．564±0．135、0．756±0．007，各区域间的差异有统计学意义（F=2601．681，P〈0．01）。免疫组化染色显示接种6、9、12、15d皮下移植瘤中CD133的表达分值为0．8±0．4、2．4±0．5、4．0±0．7、6．0±0．7，HIF-1α的分别为0．8±0．4、2．84±0．8、5．0±O．7、6．84±0．4；两者的表达量呈正相关（r=0．921，P〈0．01）。结论胶质瘤干细胞比非干细胞更易形成肿瘤及参与肿瘤血管的形成，HIF-lα及其下游基因产物可能介导了胶质瘤干细胞围绕血管周分布。 展开更多

关键词 神经胶质瘤 肿瘤干细胞 新生血管化 病理性 疾病模型 动物

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PI3K抑制剂联合Ad-PTEN对裸鼠移植胶质瘤的治疗作用 被引量：6

12

作者 宋云朋 刘哲 +7 位作者 钟跃 康春生 许鹏 韩磊 张安玲 王广秀 贾志凡 浦佩玉 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期104-107,共4页

目的本研究旨在观察磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002联合含PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)对人脑胶质瘤裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用,初步探讨其可能的作用机制。方法将实验动物24只随机分为4组,即胶质瘤模型给予DMSO对照组、空载对照... 目的本研究旨在观察磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002联合含PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)对人脑胶质瘤裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用,初步探讨其可能的作用机制。方法将实验动物24只随机分为4组,即胶质瘤模型给予DMSO对照组、空载对照组、LY294002治疗组及LY294002与Ad-PTEN联合治疗组。皮下接种LN229人脑胶质瘤细胞建立胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型,定期测量动物体质量及肿瘤直径;应用免疫组化法检测肿瘤细胞的PTEN、p-Akt、PCNA、CyclinD1、Caspase-3、MMP-2、p-FAK的表达水平。结果联合治疗组对人脑胶质瘤裸鼠移植瘤抑制作用较对照组及LY294002治疗组均明显增强(均P<0.01);与对照组及LY294002治疗组比较联合治疗组Caspase-3、PTEN表达显著升高(均P<0.05),p-Akt、CyclinD1、MMP2、p-FAK的表达均显著下降(均P<0.05)。结论LY294002与Ad-PTEN联合治疗可以提高对裸鼠移植人脑胶质瘤的抑制作用。 展开更多

关键词 胶质瘤 PI3K抑制剂 PTEN

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胶质母细胞瘤微环境中CXCL12／CXC趋化因子受体4的表达分布及其在肿瘤侵袭迁移中的作用 被引量：5

13

作者 陈聪 刘志峰 +3 位作者 任炳成 刘彬 于圣平 杨学军 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1271-1274,F0003,共5页

目的检测趋化因子CXCL12及其受体CXC趋化因子受体4（CXCR4）在胶质母细胞瘤微环境中的表达，探讨其在肿瘤侵袭、迁移中的作用。方法收集45例人胶质母细胞瘤组织标本，每例标本取瘤中心、肿瘤与周围脑组织交界区及瘤周水肿区组织，采用... 目的检测趋化因子CXCL12及其受体CXC趋化因子受体4（CXCR4）在胶质母细胞瘤微环境中的表达，探讨其在肿瘤侵袭、迁移中的作用。方法收集45例人胶质母细胞瘤组织标本，每例标本取瘤中心、肿瘤与周围脑组织交界区及瘤周水肿区组织，采用免疫组织化学方法检测上述组织中CXCL12、CXCR4及基质金属蛋白酶-9（MMPO）的表达。趋化因子CXCL12和CXCR4抑制剂AMD3100处理人脑胶质瘤U251细胞，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Westernblot方法检测不同处理组U251细胞MMP-9的表达。结果在瘤中心、肿瘤与周围脑组织交界区及瘤周水肿区组织，免疫组织化学CXCL12表达分值依次为4．2±1．3、2．8±0．8、1．6±0．5，CXCR4表达分值依次为4．6±0．9、3．0±0．7、1．8±0．8，MMP．9表达分值依次为5．2±0．8、3．8±0．8、2．6±0．5，CXCL12、CXCR4及MMP-9在各区域间的表达差异均有统计学意义（P〈0．05）；不同区域组织中CXCL12／CXCR4和MMPO的表达呈正相关（CXCL12与MMPO比较，r=0．769、P〈0．01，CXCR4与MMPO比较，r=0．948、P〈0．01）。CXCL12处理组、AMD3100处理组及对照组U251细胞，在MMPOmRNA水平上表达值依次为0．968±0．065、0．187±0．028、0．294±0．042，在MMPO蛋白水平表达值依次为0．605±0．011、0．358±0．009、0．449±0．026，各处理组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CXCL12／CXCR4可以促进肿瘤细胞分泌MMPO从而增强肿瘤细胞向外的侵袭、迁移，以CXCR4作为治疗期点可以抑制膝后瘤细晌的停袭与讦移。 展开更多

关键词 趋化因子 胶质母细胞瘤 微环境 侵袭 迁移

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Notch信号通路异常和肿瘤的生成 被引量：2

14

作者 裘明哲 浦佩玉 《透析与人工器官》 2008年第2期32-36,共5页

近年研究表明,Notch信号通路与肿瘤发生有关,但Notch对肿瘤的发生、发展可以起着截然相反的作用。在某些组织中Notch单个或多个成员具有显性癌基因作用,而在另一些组织量则发挥着抑癌基因的功能。本文就Notch在肿瘤研究中的研究进展作... 近年研究表明,Notch信号通路与肿瘤发生有关,但Notch对肿瘤的发生、发展可以起着截然相反的作用。在某些组织中Notch单个或多个成员具有显性癌基因作用,而在另一些组织量则发挥着抑癌基因的功能。本文就Notch在肿瘤研究中的研究进展作以综述。 展开更多

关键词 信号通路 肿瘤

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白藜芦醇抑制胶质瘤细胞增殖的体内外实验研究 被引量：4

15

作者 王广秀 浦佩玉 +4 位作者 康春生 贾志凡 张志勇 李彦和 裘明哲 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2006年第10期793-796,共4页

目的探讨白藜芦醇(Res)对C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用及其机制。方法将不同浓度Res作用于C6大鼠胶质瘤细胞系,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,蛋白印迹(Western blot)检测Res处理前后C6细胞表皮生长因子受体(EGFR)... 目的探讨白藜芦醇(Res)对C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用及其机制。方法将不同浓度Res作用于C6大鼠胶质瘤细胞系,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,蛋白印迹(Western blot)检测Res处理前后C6细胞表皮生长因子受体(EGFR)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;免疫组化分析基质金属蛋白酶(MMP)-9、转录核因子-κB(NF-κB)的表达。应用立体定向术建立大鼠动物模型,将20只大鼠分为对照组和治疗组,治疗组8只以8 mg·kg-1·d-1的剂量饲喂,2只以16 mg·kg-1·d-1的剂量饲喂,观察动物一般表现及生存期。MRI动态监测肿瘤大小,脑标本进行病理组织学及相关指标检测。结果在体外Res可明显抑制C6胶质瘤细胞生长,细胞周期被阻滞在S期,诱导肿瘤细胞凋亡,Res可延长荷瘤SD大鼠生存期,免疫组化检测EGFR、MMP-9、NF-κB表达降低,而GFAP表达升高。结论Res可抑制胶质瘤细胞增殖,延长荷瘤动物生存期,具有潜在临床应用价值。 展开更多

关键词 藜芦生物碱类 神经胶质瘤 细胞增殖 细胞凋亡 受体 表皮生长因子

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靶向AKT1和COX-2的RNAi抑制U251胶质瘤细胞侵袭的体外实验 被引量：2

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作者 王轩 韩磊 +7 位作者 杨旸 岳晓 张安玲 王广秀 贾志凡 浦佩玉 申长虹 康春生 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期241-245,共5页

目的应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术敲低恶性胶质瘤细胞系U251中AKT1和COX-2表达后,在体外对细胞侵袭转移的抑制作用,初步探讨其可能的作用机制。方法构建重组腺病毒载体rAd5-A-C同时搭载靶向AKT1和COX-2的shRNA干扰序列,将其... 目的应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术敲低恶性胶质瘤细胞系U251中AKT1和COX-2表达后,在体外对细胞侵袭转移的抑制作用,初步探讨其可能的作用机制。方法构建重组腺病毒载体rAd5-A-C同时搭载靶向AKT1和COX-2的shRNA干扰序列,将其转染至恶性胶质瘤细胞系U251细胞。Realtime PCR检测RNAi后目的基因mRNA的表达水平,Western Blot检测目的基因及MMP-2、MMP-9、TIMP-2的表达情况。酶联免疫吸附试验检测转染前后分泌到细胞外的MMP-2和MMP-9的浓度变化。划痕实验和Transwell实验评价肿瘤细胞转染前后的细胞侵袭能力的变化。结果rAd5-A-C转染组AKT1和COX-2的mRNA和蛋白表达均明显抑制;MMP-2、MMP-9表达下调,TIMP-2表达则上调。ELISA检测胞外MMP-2、MMP-9浓度明显减低;划痕实验显示细胞转移运动能力明显减弱,Transwell体外侵袭实验结果显示穿过细胞数明显减低(P<0.001)。结论重组腺病毒介导的RNAi技术可以序列特异性地抑制U251细胞AKT1和COX-2的表达,在体外对U251细胞侵袭转移产生明显抑制作用,可能成为恶性胶质瘤治疗的新策略。 展开更多

关键词 RNA干扰 恶性胶质瘤 侵袭 基因治疗

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微小RNA-451对LN229胶质瘤细胞系侵袭和迁移的影响 被引量：3

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作者 郭红宝 南阳 +8 位作者 甄英伟 王乐 张亚辉 周西广 周俊虎 韩磊 黄强 俞凯 钟跃 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期548-553,共6页

目的研究微小RNA-451（miRNA-451）下调葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）对人脑LN229胶质瘤细胞系侵袭和迁移的影响。方法体外常规培养LN229细胞，将其分为空白对照组、无义序列组及miRNA-451组，空白对照组不进行任何处理，后2组分别转染无义... 目的研究微小RNA-451（miRNA-451）下调葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）对人脑LN229胶质瘤细胞系侵袭和迁移的影响。方法体外常规培养LN229细胞，将其分为空白对照组、无义序列组及miRNA-451组，空白对照组不进行任何处理，后2组分别转染无义序列和miRNA-451拟似物序列。转染48h后，RT-PCR检测3组细胞miRNA-451的表达；Western blotting检测转染后细胞腺苷酸活化性蛋白激酶（AMPK）、GLUT1蛋白的表达：细胞免疫荧光染色检测转染后细胞膜蛋白GLUT1的表达：划痕实验检测细胞的迁移能力：Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果与空白对照组和无义序列组相比，miRNA-451组细胞miRNA-451mRNA的表达量明显增高，AMPK和GLUT1蛋白的表达明显减低，膜蛋白GLUT1荧光强度明显减弱，划痕修复率和穿膜细胞数（126．23±4．52、120.31±3．61VS48．42±2.31）明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miRNA-451可能通过调控AMPK下调GLUT1抑制人脑胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力。 展开更多

关键词 微小RNA-451 神经胶质瘤 葡萄糖转运蛋白1 迁移 侵袭

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反义miR-30a-5p对人脑胶质瘤细胞U251生长的抑制作用 被引量：3

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作者 王坤 贾志凡 +3 位作者 张安玲 王广秀 郝建伟 浦佩玉 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1152-1154,共3页

目的观察敲低microRNA（miR）-30a-Sp表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学特征的影响。方法用脂质体介导转染寡聚核苷酸抑制物（miR-30a-Spinhibitor）于人脑胶质瘤U251细胞。采用实时聚合酶链反应（real—time PCR）检测转染后U251细胞的mi... 目的观察敲低microRNA（miR）-30a-Sp表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学特征的影响。方法用脂质体介导转染寡聚核苷酸抑制物（miR-30a-Spinhibitor）于人脑胶质瘤U251细胞。采用实时聚合酶链反应（real—time PCR）检测转染后U251细胞的miR-30a-5p表达水平以鉴定抑制效果；噻唑蓝（MTT）比色法评价miR-30a-5p inhibitor抑制U251细胞生长的作用；Transwell实验检测细胞侵袭能力变化；流式细胞术检测细胞周期变化；AnnexinV法检测细胞早期凋亡。结果real-time PCR检测结果显示转染miR-30a-5p inhibitor后，肿瘤细胞miR-30a-5p表达下降，细胞增殖活性降低，细胞侵袭能力明显受到抑制，细胞周期阻滞在G0／G1期及早期凋亡增加。结论miR-30a-5p可能是癌微RNA（oncomiR）之一，有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。 展开更多

关键词 胶质瘤 增殖 侵袭 细胞周期

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U251胶质瘤荷瘤鼠皮下模型的建立及其表皮生长因子受体通路成员异常表达 被引量：3

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作者 刘晓智 康春生 +3 位作者 张志勇 贾志凡 王广秀 浦佩玉 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2007年第1期71-75,共5页

目的建立稳定可靠的荷瘤鼠皮下U251胶质瘤实验动物模型,使其良好地用于胶质瘤分子机制的研究。方法取生长状态良好的U251胶质瘤细胞悬液按1×106个细胞／50μl接种于10只荷瘤鼠腹腔皮下,待其成瘤后将肿瘤组织块接种于20只实验鼠,观... 目的建立稳定可靠的荷瘤鼠皮下U251胶质瘤实验动物模型,使其良好地用于胶质瘤分子机制的研究。方法取生长状态良好的U251胶质瘤细胞悬液按1×106个细胞／50μl接种于10只荷瘤鼠腹腔皮下,待其成瘤后将肿瘤组织块接种于20只实验鼠,观察并记录肿瘤皮下生长情况,于成瘤后第5周处死荷瘤鼠检测是否存在肿瘤远处转移;同时对肿瘤组织行HE和免疫组织化学染色检测胶质瘤的病理学特征,观察表皮生长因子受体、磷酰肌醇3-激酶和丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶-2基因阳性表达率,结果与体外培养的U251胶质瘤细胞系的基因异常表达进行比较。结果细胞悬液接种可成功获得皮下U251胶质瘤模型,但潜伏期延长(2-3周),成功率低(6／10);若将其生成的肿瘤组织块再次接种于荷瘤鼠皮下则可获得高效、稳定的成瘤率(20／20)且潜伏期明显缩短(3d-5d)。荷瘤鼠生长状态良好,无恶病质变化,未发生其他脏器转移。大体标本观察显示,肿瘤体积>750mm3时其内部多见坏死伴囊性变,部分肿瘤尚有脂肪浸润或纤维化;肿瘤有假包膜形成,瘤体部分呈鱼肉状,是胶质瘤生发和再移植取材的部位。免疫组织化学检测显示,荷瘤鼠皮下胶质瘤组织和体外培养的U251胶质瘤细胞对表皮生长因子受体、磷酰肌醇3-激酶以及丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶-2基因通路主要成员的基因表达情况相似。结论将U251胶质瘤细胞悬液接种于荷瘤鼠皮下形成的胶质瘤再移植到荷瘤鼠皮下建立U251移植瘤实验模型的方法简便、潜伏期短、成功率高、稳定性好,可以作为胶质瘤体内实验研究的动物模型。 展开更多

关键词 神经胶质瘤 受体 表皮生长因子-尿抑胃素 疾病模型 动物 基因表达 免疫组织化学

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儿童型与成人型脑干胶质瘤差异性的相关miRNA表达谱初步研究 被引量：2

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作者 王轩 张宏伟 +6 位作者 于春江 张安玲 韩磊 浦佩玉 申长虹 康春生 王坤 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1015-1020,共6页

目的筛选儿童型脑干胶质瘤（BSG）对照于成人型BSG差异表达的miRNA，为探索儿童型BSG发病机制和治疗中的miRNA干预策略提供可供选择的目标miRNA。方法利用miRNA芯片检NJL童型与成人型BSG原位动物模型的miRNA表达谱，分析二者差异性表达... 目的筛选儿童型脑干胶质瘤（BSG）对照于成人型BSG差异表达的miRNA，为探索儿童型BSG发病机制和治疗中的miRNA干预策略提供可供选择的目标miRNA。方法利用miRNA芯片检NJL童型与成人型BSG原位动物模型的miRNA表达谱，分析二者差异性表达的miRNA，并挑选差异表达最明显的miRNA在两种BSG的人体标本中进行qRT-PCR和原位杂交验证。结果两个组别中共检测到216个miRNA表达，以成人型BSG为比照，儿童型BSG中3．5倍以上差异表达上调的miRNA10个、下调的29个。其中差异最明显的为miR-20a和miR-106b，选取二者在两种BSG的人体标本中进行qRT—PCR和原位杂交验证，结果提示芯片结果适用于人类。结论研究两种BSG的差异性表达的miRNA，将会为解释儿童型BSG较之成人型BSG的恶性进展及以此为控制BSG这-严重威胁儿童生命的疾病提供新的思路。 展开更多

关键词 脑干肿瘤 神经胶质瘤 微RNAS 基因表达谱 微阵列分析

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