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navitoclax联合阿糖胞苷在HEL细胞凋亡中的作用 被引量：3
1
作者 段永娟 刘超 +4 位作者 陈晓燕 吴文齐 郑佳睿 张英驰 竺晓凡 《中华实用诊断与治疗杂志》 2019年第7期641-645,共5页
目的探讨navitoclax(NTX)联合阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)对HEL细胞凋亡的影响及可能机制.方法取对数生长期HEL细胞,随机分为NTX组、Ara-C组和联合组,分别应用不同浓度NTX、Ara-C、NTX+ Ara-C处理72 h,采用CCK-8法测定细胞活率,计算50%... 目的探讨navitoclax(NTX)联合阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)对HEL细胞凋亡的影响及可能机制.方法取对数生长期HEL细胞,随机分为NTX组、Ara-C组和联合组,分别应用不同浓度NTX、Ara-C、NTX+ Ara-C处理72 h,采用CCK-8法测定细胞活率,计算50%细胞抑制时的药物浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),依据IC50进行后续试验.分别取NTX组、Ara-C组和联合组处理24、48 h时细胞,采用流式细胞术检测早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率;采用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)mRNA、Bcl-2同源拮抗剂(Bcl-2 homologous antagonist/killer,BAK) mRNA、Bcl-2细胞凋亡相互作用介质(Bcl-2 interacting mediator of cell death,BIM) mRNA相对表达量,并进行比较.结果联合组应用NTX 10 nmol/L+Ara-C 20 nmol/L、NTX 100 nmol/L+ Ara-C 200 nmol/L处理72 h细胞活率[(35.27±4.04)%、(13.58±1.33)%]低于NTX组应用NTX 10 nmol/L、100 nmol/L[(103.44±9.26)%、(65.56±3.37)%]、Ara-C组应用Ara-C 20 nmol/L、200 nmol/L处理72 h[(53.46±5.42)%、(20.92±1.74)%](P<0.05);联合组应用NTX 1 000 nmol/L+ Ara-C 2 000 nmol/L、NTX 10 000 nmol/L+Ara-C 20 000 nmol/L处理72 h细胞活率[(11.92±0.94)%、(8.86±1.26)%]低于Ara-C组应用Ara-C 2 000 nmol/L、20 000 nmol/L处理72 h[(19.43±0.43)%、(13.46±0.70)%](P<0.05);处理24 h,联合组、NTX组、Ara-C组细胞早期凋亡率[(39.40±0.80)%、(19.50±1.13)%、(7.23±0.73)%]、总凋亡率[(50.01±0.65)%、(28.01±0.56)%、(10.20±0.71)%]依次降低(P<0.05),联合组、NTX组晚期凋亡率[(10.61±1.45)%、(8.51±0.85)%]高于Ara-C组[(2.97±0.09)%](P<0.05),联合组与NTX组比较差异无统计学意义(P>0.05);处理48 h,联合组、NTX组、Ara-C组细胞早期凋亡率[(67.13±9.11)%、(15.03±0.87)%、(4.50±0.07)%]、晚期凋亡率[(15.70±1.33)%、(3.66±0.49)%、(2.22±0.31)%]、总凋亡率[(82.83±10.31)%、(18.70±1.28)%、(6.72±0.37)%]依次降低(P<0.05);联合组处理24 h BAK mRNA相对表达量(1.27±0.45)高� 展开更多
关键词 红白血病 HEL细胞 navitoclax 阿糖胞苷 凋亡
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HES4抑制急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat对阿糖胞苷的敏感性 被引量：1
2
作者 段永娟 兰洋 +9 位作者 易美慧 毕杨 陈晓燕 刘立鹏 张傲利 张陆阳 宗苏玉 郑佳睿 张英驰 竺晓凡 《现代生物医学进展》 CAS 2021年第11期2001-2006,共6页
目的:研究hes家族bHLH转录因子4(HES4)与急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞系Jurkat对化疗药物阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性作用。方法:构建Lenti-pCDH-HES4-puro质粒,包装慢病毒感染Jurkat细胞,感染空载体Lenti-pCDH-puro为对照组,puromycin... 目的:研究hes家族bHLH转录因子4(HES4)与急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞系Jurkat对化疗药物阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性作用。方法:构建Lenti-pCDH-HES4-puro质粒,包装慢病毒感染Jurkat细胞,感染空载体Lenti-pCDH-puro为对照组,puromycin筛选阳性细胞,Realtime-PCR检测转录水平HES4过表达情况,CCK8法检测Jurkat对Ara-C敏感性,Ara-C终浓度为0.1、1、10、100、1000、10000 nmol·L^(-1);设计3对针对于HES4的特异sgRNA序列,构建LentiGuide-sgRNA1-puro、LentiGuide-sgRNA2-Puro、LentiGuide-sgRNA3-puro质粒,LentiGuide-puro空载体为对照组,包装慢病毒感染Jurkat细胞,puromycin筛选,提取基因组DNA,PCR扩增sgRNA的靶序列,一代测序检测HES4的敲除效率,CCK8法检测敲除HES4后Jurkat对Ara-C敏感性,Ara-C终浓度为0.1、1、10、100、1000、10000 nmol·L^(-1)。结果:与对照组相比,HES4在Jurkat中过表达(2.37±0.09)倍(P<0.001),在Ara-C为1 nmol·L^(-1)、100 nmol·L^(-1)浓度下,过表达HES4使Jurkat对Ara-C的药物敏感性降低(P值分别小于0.01、0.05);sgRNA1、sgRNA 2、sgRNA 3敲除分值分别为83、71、63,其中sgRNA1的敲除效果最佳,在Ara-C为1000 nmol·L^(-1)浓度下,敲除HES4促进Jurkat对Ara-C的敏感性(P<0.05),3条sgRNAs之间无明显区别(P>0.05)。结论:HES4抑制T-ALL细胞系Jurkat对Ara-C的敏感性,为T-ALL化疗耐受的机制研究提供指导。 展开更多
关键词 HES4 过表达 敲除 JURKAT细胞 ARA-C
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