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用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA制备方法的比较 被引量：76
1
作者 剧海 梁东春 +1 位作者 郭刚 张镜宇 《天津医药》 CAS 北大核心 2003年第5期270-272,共3页
目的 :比较4种用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA的制备方法 ,以寻求一种稳定、简便的DNA模板制备方法 ,用于毕赤酵母重组子的分析。方法 :分别用玻璃珠法、煮沸法、煮 -冻 -煮法以及直接法制备毕赤酵母基因组DNA模板 ,在相同条件下进行PC... 目的 :比较4种用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA的制备方法 ,以寻求一种稳定、简便的DNA模板制备方法 ,用于毕赤酵母重组子的分析。方法 :分别用玻璃珠法、煮沸法、煮 -冻 -煮法以及直接法制备毕赤酵母基因组DNA模板 ,在相同条件下进行PCR扩增并比较其差异。结果 :煮 -冻 -煮法与玻璃珠法制备的模板进行PCR均可取得理想的实验结果。以煮沸法制备模板作PCR时结果受所用模板浓度的影响很大 ,稳定性较差。直接法(即直接用未经处理的菌体作模板)的PCR结果随机性较大 ,实验结果最不理想。结论 :煮 -冻 -煮法所需时间少、费用低、操作简便而且结果稳定 。 展开更多
关键词 毕赤酵母 基因组 DNA 制备方法 聚合酶链反应
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人骨形态发生蛋白-2基因的真核表达载体构建 被引量：1
2
作者 沈伟 郭善一 +2 位作者 鲍秋野 梁东春 张镜宇 《天津医药》 CAS 北大核心 2001年第2期88-90,共3页
目的:利用杆状病毒载体,构建可直接转染昆虫细胞Sf9的含人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因的重组穿梭载体(bacmid DNA),最终获得重组蛋白。方法:将编码包含hBMP-2 N-端信号肽,中间前肽以及C-端成熟肽共1188bp的cDNA片断,插入真核表达载体p... 目的:利用杆状病毒载体,构建可直接转染昆虫细胞Sf9的含人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因的重组穿梭载体(bacmid DNA),最终获得重组蛋白。方法:将编码包含hBMP-2 N-端信号肽,中间前肽以及C-端成熟肽共1188bp的cDNA片断,插入真核表达载体pFastBacl的多克隆位点,受控于pPolh启动子,构建成pFastBael/hBMP-2重组转移载体。重组子转化大肠杆菌DH10Bac。转座后,挑选阳性菌落,提取bacmid DNA,经PCR鉴定后,以重组bacmid DNA转染Sf9细胞。收集重组病毒,扩大转染Sf9,表达产物行SDS-PAGE初步鉴定。结果:获得了含hBMP-2全长cDNA片段的重组bacmid DNA和重组病毒,经SDS-PAGE证实在昆虫细胞中表达了分泌型hBMP-2蛋白,经激光密度扫描仪扫描显示分泌性蛋白表达量占细胞蛋白总量的35.6%。结论:利用杆状病毒载体成功构建了可用于直接转染昆虫细胞而无需同源重组的重组bacmid DNA,并在昆虫细胞中表达了分泌型hBMP-2蛋白。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白质 杆状病毒 基因表达 载体构建
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用于核受体研究的骨组织细胞核制备方法
3
作者 朱志峰 杨宇红 +1 位作者 郭刚 张镜宇 《天津医科大学学报》 2005年第3期457-458,共2页
关键词 骨 T3受体 细胞核
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低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因nkx2．1表达的影响 被引量：1
4
作者 赵秀娟 张瑞 +2 位作者 戈海泽 舒剑波 郭刚 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期401-404,共4页
目的研究低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因nkx2．1表达的影响。方法雌性Wistar大鼠40只，按体质量随机分为低碘组和对照组，均饲以含碘量为13．66ug／kg的低碘饲料，分别饮用去离子水和200ug／L碘酸钾溶液，3个月后用化学发光免疫分析方... 目的研究低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因nkx2．1表达的影响。方法雌性Wistar大鼠40只，按体质量随机分为低碘组和对照组，均饲以含碘量为13．66ug／kg的低碘饲料，分别饮用去离子水和200ug／L碘酸钾溶液，3个月后用化学发光免疫分析方法测定大鼠血清甲状腺激素（TT3、TT4、FT3、FT4），再将两组大鼠与健康雄鼠进行交配，在孕16d、新生及20日龄时，取胎鼠或仔鼠脑组织，用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测脑组织nkx2．1 mRNA表达。结果大鼠血清TT3、TT4、FT3、FT4水平，低碘组[（0．89±0．20）、（0．32±0．16）nmol／L、（3．33±0．61）、（3．28±0．80）pmol／L]明显低于对照组[（1．04±0．06）、（39．42±14．68）nmol／L、（4．83±0.33）、（26．99±4．48）pmol／L；t值分别为2．71、6．52、5．70、12．89，P〈0．05或〈0．01]。对照组孕16d、新生及20日龄大鼠脑组织nkx2．1 mRNA表达分别为（5．60±0．30）×10^-3、（1．20±0．29）×10^-3、（0．18±0．06）×10^-3，低碘组同日龄大鼠nkx2．1 mRNA表达分别为（3．00±0．55）×10^-3、（1．90±0．21）×10^-3、（0．69±0．15）×10^-3。对照组、低碘组各日龄胎、仔鼠之间nkx2．1 mRNA表达水平比较，差异有统计学意义（F值分别为2102．07、162．40，P均〈0．01），对照组、低碘组新生仔鼠nkx2．1 mRNA的表达比孕16d胎鼠低（P均〈0．01），20日龄仔鼠nkx2．1 mRNA表达比孕16d和新生降低（P均〈0．01）；低碘组与同日龄对照组比较，对照组孕16d胎鼠nkx2．1 mRNA表达明显高于低碘组胎鼠（t=16．073，P〈0．01），而新生及20日低碘组明显高于对照组（t值分别为7．537、12．227．P均〈0．01）。结论低碘导致的脑发育迟滞与nkx2．1在脑组织中的差异表达密切相关。 展开更多
关键词 碘 缺乏症 基因 同源盒 基因表达 脑
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