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植物诱导抗病性 被引量：63
1
作者 李冠 欧阳光察 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 1990年第6期1-5,共5页
本文概述植物诱导抗病性的概念、研究概况、特性和机理。
关键词 植物抗病性 植物诱导抗病
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大豆KUNITZ型胰蛋白酶抑制剂的稳定性及抗虫性研究 被引量：14
2
作者 谢可方 董爱武 +4 位作者 忻骅 詹树萱 丁波 顾其敏 曹凯鸣 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期631-634,共4页
大豆kunitz型胰蛋白酶抑制剂(SBTi A2)存在于种子中,2种kunitz型胰蛋白酶抑制剂Tia和Tid得到纯化,并对它们的pH稳定性和温度稳定性进行了比较研究,而且通过人工饲料喂养鳞翅目昆虫棉铃虫来研究SBTi A2的抗虫性.结果显示,棉铃虫的幼虫喂... 大豆kunitz型胰蛋白酶抑制剂(SBTi A2)存在于种子中,2种kunitz型胰蛋白酶抑制剂Tia和Tid得到纯化,并对它们的pH稳定性和温度稳定性进行了比较研究,而且通过人工饲料喂养鳞翅目昆虫棉铃虫来研究SBTi A2的抗虫性.结果显示,棉铃虫的幼虫喂食含有Tia的人工饲料后,表现出生长延缓、体重减轻、羽化率降低、死亡率增加.由此显示了SBTi A2作为生物农药及利用转基因方法使作物提高抗虫性的应用前景. 展开更多
关键词 大豆胰蛋白酶抑制剂 稳定性 抗虫性 生物农药
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天蚕素A—蛙皮肽杂合肽基因的表达及产物抗菌活性测定 被引量：13
3
作者 周霞 诸葛洪祥 江培羽 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 2003年第1期13-15,38,共4页
目的　研究天蚕素A—蛙皮肽杂合肽基因 [CA(1～ 8) -MA(1～ 12 ) ]抗菌肽的抗菌活性。方法　将天蚕素A—蛙皮肽杂合肽基因抗菌肽的人工基因克隆到具有自切割功能的表达载体 pTYB12上 ,并在大肠杆菌 (E .coli)BL2 1(DE3 )中进行表达 ;表... 目的　研究天蚕素A—蛙皮肽杂合肽基因 [CA(1～ 8) -MA(1～ 12 ) ]抗菌肽的抗菌活性。方法　将天蚕素A—蛙皮肽杂合肽基因抗菌肽的人工基因克隆到具有自切割功能的表达载体 pTYB12上 ,并在大肠杆菌 (E .coli)BL2 1(DE3 )中进行表达 ;表达产物用几丁质树脂进行了亲和吸附 ,自切割后洗脱得到抗菌肽 ,进行透析以去除盐类物质 ,最后用大肠杆菌与金黄色葡萄球菌进行活性检测。结果　天蚕素A—蛙皮肽杂合肽 [CA(1～ 8) -MA(1～ 12 ) ]对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌均有一定的抗菌活性。结论　天蚕素A—蛙皮肽杂合肽具有抗菌活性 。 展开更多
关键词 天蚕素-蛙皮肽 重组基因 大肠杆菌 分泌表达 活性测定
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灵芝孢子诱变与菌丝高长速菌株选育 被引量：17
4
作者 王淑珍 白晨 《中国食用菌》 2000年第6期6-9,共4页
长白山野生灵芝通过组织分离获得的灵芝CL988菌株 ,经60 CO -γ射线与紫外线交替累积诱变获得菌丝高长速灵芝菌株CjL990 (已经中国科学院微生物研究所鉴定 )通过 4次传代培养和应用研究证明该菌株性状稳定 ,菌丝生长速度与菌丝积累量同... 长白山野生灵芝通过组织分离获得的灵芝CL988菌株 ,经60 CO -γ射线与紫外线交替累积诱变获得菌丝高长速灵芝菌株CjL990 (已经中国科学院微生物研究所鉴定 )通过 4次传代培养和应用研究证明该菌株性状稳定 ,菌丝生长速度与菌丝积累量同供试株CL988比较均P<0 0 展开更多
关键词 灵芝 孢子 菌丝积累量 菌丝生长速度 菌株选育 深层发酵 诱变育种
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弓形虫昆山分离株速殖子期表达型cDNA文库的构建及鉴定 被引量：12
5
作者 杨秋林 陆惠民 +1 位作者 邬敏辰 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期25-27,共3页
目的　构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库。方法　用CF - 11纤维素柱快速提纯速殖子 ,以盐酸异硫氰酸胍 (AGPC)一步法抽提总RNA ,oligo -dT纤维素分离mRNA后 ,用ClonTech公司的SmartTMPCRcDNA文库构建试剂盒 ,构建了弓形... 目的　构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库。方法　用CF - 11纤维素柱快速提纯速殖子 ,以盐酸异硫氰酸胍 (AGPC)一步法抽提总RNA ,oligo -dT纤维素分离mRNA后 ,用ClonTech公司的SmartTMPCRcDNA文库构建试剂盒 ,构建了弓形虫昆山分离株的表达型文库。结果　获得 5× 10 6个独立克隆 ,重组率为 99% ,插入片段的平均长度为 1kb。 展开更多
关键词 弓形虫 CDNA文库 克隆 速殖子期
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普通野生稻中NBS同源序列的克隆和分析 被引量：8
6
作者 周玮斌 史晰 +2 位作者 詹树萱 孙崇荣 曹凯鸣 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期516-520,共5页
已知的植物抗病基因大多数具有核苷酸结合位点（ＮＢＳ）和富含亮氨酸重复区（ＬＲＲ）．根据　ＮＢＳ的保守区设计引物，应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从普通野生稻基因组中克隆了４个不　同的ＮＢＳ同源序列（ＯＳＮＢＡ１～ＯＳＮ... 已知的植物抗病基因大多数具有核苷酸结合位点（ＮＢＳ）和富含亮氨酸重复区（ＬＲＲ）．根据　ＮＢＳ的保守区设计引物，应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从普通野生稻基因组中克隆了４个不　同的ＮＢＳ同源序列（ＯＳＮＢＡ１～ＯＳＮＢＡ４）．同源性比较显示它们均与非ＴＩＲ类的ＮＢＳ序列　相似．其中，ＯＳＮＢＡ１与双子叶植物拟南芥的ＲＰＳ２基因更接近；ＯＳＮＢＡ２～ＯＳＮＢＡ　４与单子叶植物水稻的ＸＡ１、ＲＰＲ１基因更相似． 展开更多
关键词 抗病基因 核苷酸结合位点 聚合酶链式反应 野生稻 基因克隆 同源序列 抗病能力
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柑橘内生细菌YS45的鉴定、抗菌物质分析及其对油菜菌核病的防治作用 被引量：15
7
作者 张翼 白晨 +3 位作者 冉国华 张志元 陈耀辉 吴刚 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期638-645,共8页
从柑橘枝条中分离到26株对油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)具有拮抗作用的内生细菌,其中YS45菌株的拮抗活性最强。16S rRNA基因序列分析及形态学和生理生化鉴定结果表明YS45菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。高效液相色... 从柑橘枝条中分离到26株对油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)具有拮抗作用的内生细菌,其中YS45菌株的拮抗活性最强。16S rRNA基因序列分析及形态学和生理生化鉴定结果表明YS45菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。高效液相色谱及质谱分析结果显示其主要的抑菌活性物质为一组fengycin同系物,包括fengycins A、fengycins B和一种稀少fengycin类型化合物。油菜离体叶片接种试验中,YS45菌株发酵液对油菜菌核病的防效在70%以上,与五氯硝基苯相当;田间小区接种试验表明,YS45菌株发酵液对油菜菌核病的防效也在50%以上。 展开更多
关键词 内生细菌 柑橘 抑菌物质 油菜菌核病 生物防治
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弓形虫RH株速殖子期表达型cDNA文库的构建及鉴定 被引量：7
8
作者 杨秋林 陆惠民 +1 位作者 邬敏辰 黄伟达 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2001年第2期82-86,共5页
为构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库 ,用CF 11纤维素柱快速提纯速殖子 ,以盐酸异硫氰酸胍 (AGPC)一步法抽提总RNA ,oligo dT纤维素分离mRNA后 ,用ClonTech公司的SmartTMPCRcDNA文库构建试剂盒 ,构建了弓形虫RH株的表达... 为构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库 ,用CF 11纤维素柱快速提纯速殖子 ,以盐酸异硫氰酸胍 (AGPC)一步法抽提总RNA ,oligo dT纤维素分离mRNA后 ,用ClonTech公司的SmartTMPCRcDNA文库构建试剂盒 ,构建了弓形虫RH株的表达型文库。获得 5× 10 6个独立克隆 ,重组率为 99% ,插入片段的平均长度约为 1kb。根据已知序列设计引物 ,从cDNA文库中扩增出编码棒状体蛋白 1(ROP1)的基因 (不含编码信号肽的序列 ) ,本文库可望用于弓形虫疫苗研究的候选基因的筛选。 展开更多
关键词 弓形虫 CDNA文库 克隆 速殖期
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弓形虫昆山分离株P30抗原基因的克隆与表达 被引量：12
9
作者 杨秋林 陆惠民 +1 位作者 闵太善 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第4期27-29,共3页
目的　在大肠杆菌中高效表达P30抗原。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株cDNA文库中扩增得到编码P30抗原的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX - 5x - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,用亲和层析柱纯化表达产物 ... 目的　在大肠杆菌中高效表达P30抗原。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株cDNA文库中扩增得到编码P30抗原的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX - 5x - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,用亲和层析柱纯化表达产物 ,并以SDS -PAGE和Westernblotting进行鉴定。 结果　 1、在我们比较的 783个碱基中 ,弓形虫昆山分离株与RH株之间只有两个碱基不同 ;2、得到一分子量为 5 4kDa的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 38%。结论　 1、弓形虫昆山分离株与RH株的P30基因没有大的差异 ;2、在大肠杆菌中得到了P30融合蛋白的高效表达。 展开更多
关键词 弓形虫 P30 PCR 基因表达 克隆
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藏药迷果芹根中的化学成分 被引量：12
10
作者 邵志宇 张云海 +2 位作者 蒋科技 陈晶晶 蒯本科 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2003年第3期196-198,共3页
从藏药迷果芹 (Sphallerocarpusgracilis)的根中首次分离到 6个化合物 ,经MS ,NMR等光谱技术鉴定 ,结合化学反应 ,确定了其结构分别为xanthalin(1) ,3 O angeoylhamaudol(2 ) ,isoimperatorin(3) ,aviprin(4) ,4′ O β D glucopyranosy... 从藏药迷果芹 (Sphallerocarpusgracilis)的根中首次分离到 6个化合物 ,经MS ,NMR等光谱技术鉴定 ,结合化学反应 ,确定了其结构分别为xanthalin(1) ,3 O angeoylhamaudol(2 ) ,isoimperatorin(3) ,aviprin(4) ,4′ O β D glucopyranosyl 5 O methylvisamminol(5 )和daucosterol(6 )。 展开更多
关键词 藏药 迷果芹 化学成分 伞形科
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外源乳酸脱氢酶基因在双歧杆菌中的表达 被引量：11
11
作者 李宁军 李琳 +2 位作者 江培 李盛翃 黄伟达 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期660-663,共4页
以大肠杆菌 双叉双歧杆菌的穿梭质粒pHJ为基础,插入从Lactococcuslactis总DNA中用PCR方法扩增得到的报告基因乳酸脱氢酶基因(ldh),构建了双叉双歧杆菌的表达质粒pHJ LDH,并采用电转化法导入双叉双歧杆菌进行了表达研究.对双叉双歧杆菌... 以大肠杆菌 双叉双歧杆菌的穿梭质粒pHJ为基础,插入从Lactococcuslactis总DNA中用PCR方法扩增得到的报告基因乳酸脱氢酶基因(ldh),构建了双叉双歧杆菌的表达质粒pHJ LDH,并采用电转化法导入双叉双歧杆菌进行了表达研究.对双叉双歧杆菌总蛋白的SDS PAGE分析结果表明,ldh报告基因的表达产物形成了明显的条带,Western blotting结果确认了该条带为ldh基因的产物.LDH的酶活性定量测定结果表明,重组双叉双歧杆菌的蛋白粗抽提液中LDH的比活性为5.5U/mg,菌中LDH的表达量约为2mg/L.此工作为今后双叉双歧杆菌的基因工程奠定了基础. 展开更多
关键词 乳酸脱氢酶 双叉双歧杆菌 表达 基因 蛋白
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拟南芥NCED3基因在水稻中的过量表达可以提高水稻的干旱胁迫耐受性 被引量：12
12
作者 贾娟娟 孟秀萍 +2 位作者 刘蕊 夏勉 王喜萍 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期288-294,共7页
9-顺-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)是高等植物脱落酸(ABA)生物合成途径中的关键酶,其催化的裂解反应直接生成ABA的前体物质.本文应用拟南芥rd29A诱导型启动子和35S组成型启动子成功地将At-NCED3基因在水稻中过量表达,通过耐旱性筛选实... 9-顺-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)是高等植物脱落酸(ABA)生物合成途径中的关键酶,其催化的裂解反应直接生成ABA的前体物质.本文应用拟南芥rd29A诱导型启动子和35S组成型启动子成功地将At-NCED3基因在水稻中过量表达,通过耐旱性筛选实验证明转基因水稻对干旱胁迫的耐受性有了显著提高,并且该优良性状在T2代中得到稳定遗传.进一步的分析表明,过量表达AtNCED3可以促进转基因水稻种子的休眠;在含rd29A诱导型启动子的转基因水稻中检测到ABA下游基因OsBZ8的表达;推测AtNCED3在水稻中的过量表达可能会提高水稻中内源ABA的水平,从而提高植株的耐旱性. 展开更多
关键词 AtNCED3 转基因水稻 干旱胁迫耐受性 脱落酸 种子休眠
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乳酸乳球菌表达弓形虫棒状体蛋白1(ROP1) 被引量：9
13
作者 朱翔 杨秋林 +2 位作者 陆惠民 施宓 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第5期54-56,共3页
目的　在乳酸乳球菌中表达ROP1抗原蛋白。方法　从质粒 psk -ROP1中以BamHⅠ和SalⅠ双酶切出ROP1基因 ,置换构建好的大肠杆菌 -乳酸乳球菌穿梭表达质粒L2 -PsP30T中的P30基因 ,电转化感受态乳酸乳球菌 ,以Westernblotting鉴定ROP1在乳... 目的　在乳酸乳球菌中表达ROP1抗原蛋白。方法　从质粒 psk -ROP1中以BamHⅠ和SalⅠ双酶切出ROP1基因 ,置换构建好的大肠杆菌 -乳酸乳球菌穿梭表达质粒L2 -PsP30T中的P30基因 ,电转化感受态乳酸乳球菌 ,以Westernblotting鉴定ROP1在乳酸乳球菌中的表达。结果　表达产物中有一约 4 3kDa的蛋白带能被弓形虫病人血清识别。 展开更多
关键词 棒状体蛋白1 弓形虫 ROP1 乳酸乳球菌 表达 疫苗 弓形虫病
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黄瓜叶片富含羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)的诱导 被引量：7
14
作者 粟波 刘宇刚 欧阳光察 《植物生理学通讯》 CSCD 1993年第5期337-339,360,共4页
用瓜类剌盘孢的培养滤液和菌丝壁获得的诱发物处理黄瓜叶片,都能诱导叶片细胞壁HRGP的积累。其中,滤液醇溶性部分的诱导效果最明显;菌丝壁诱发物次之;滤液醇不溶性部分诱导活性最小。乙烯利对黄瓜叶片细胞壁HRGP也有明显的诱导作用。CoC... 用瓜类剌盘孢的培养滤液和菌丝壁获得的诱发物处理黄瓜叶片,都能诱导叶片细胞壁HRGP的积累。其中,滤液醇溶性部分的诱导效果最明显;菌丝壁诱发物次之;滤液醇不溶性部分诱导活性最小。乙烯利对黄瓜叶片细胞壁HRGP也有明显的诱导作用。CoCl_2能抑制滤液醇溶性诱发物和菌丝壁诱发物对HRGP的诱导。 展开更多
关键词 黄瓜 诱导物 羟脯氨酸 糖蛋白
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用抑制差减杂交技术分离烯丙异噻唑诱导水稻特异表达的基因 被引量：5
15
作者 赵惠芳 丁德荣 +1 位作者 马中华 蒯本科 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期225-229,共5页
烯丙异噻唑 (PBZ)处理水稻根能使其产生对稻瘟病的系统获得性抗性 ,因此在东南亚稻区被广泛用于防治稻瘟病 ,然而关于其作用的分子机理还知之甚少 .运用抑制差减杂交技术 ,试图通过分离鉴定受PBZ诱导调控的关键基因 ,探索其作用的分子机... 烯丙异噻唑 (PBZ)处理水稻根能使其产生对稻瘟病的系统获得性抗性 ,因此在东南亚稻区被广泛用于防治稻瘟病 ,然而关于其作用的分子机理还知之甚少 .运用抑制差减杂交技术 ,试图通过分离鉴定受PBZ诱导调控的关键基因 ,探索其作用的分子机理 .以PBZ处理后的水稻叶片cDNA为目标群体 (tester) ,以未处理水稻叶片cDNA为对照群体 (driver) ,用经过对照cDNA差减的、烯丙异噻唑处理的cDNA群体构建了一个含 2 6 0个重组子的差减文库 .通过差示筛选鉴定出了 2 6个PBZ诱导水稻特异表达和增强表达的候选克隆 .对 2 6个cD NA克隆进行了双向测序和同源性比较 ,发现其中 3个克隆 :rJAB1,rTAB2和蛋白磷酸酯酶 2Aδ调节亚基同型物基因 ,位于抗病相关信号转导途径上 ,它们与哺乳动物和人类免疫途径上的信号因子有明显相似之处 ,因此推断可能与诱导抗性有关 .另外 8个克隆与已知基因同源性为 70 %～ 99% .经Northern杂交分析 ,其中rJAB1(编码c jun激活区结合蛋白 1)受烯丙异噻唑和稻瘟菌诱导表达 ;膜糖蛋白同源基因及肌动蛋白 (actin)α1受烯丙异噻唑诱导表达 ,部分克隆为低丰度转录本 . 展开更多
关键词 水稻 抑制差减杂交 烯丙异噻唑 稻瘟病 系统获得性抗性
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弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠的细胞免疫反应及抗体生成的动态过程 被引量：8
16
作者 李文姝 陆惠民 +2 位作者 张惠琴 夏超明 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期82-84,共3页
目的　观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠产生的细胞免疫效果和抗体IgG的动态发生过程。方法　口服免疫BALB/c小鼠 ,一个月后 ,取鼠脾细胞作ConA刺激淋转试验 (MTT法 )及T细胞亚群的测定 ;不同免疫时间段内 ,收集实验鼠血清 ,ELIS... 目的　观察弓形虫P30乳酸球菌口服疫苗诱导小鼠产生的细胞免疫效果和抗体IgG的动态发生过程。方法　口服免疫BALB/c小鼠 ,一个月后 ,取鼠脾细胞作ConA刺激淋转试验 (MTT法 )及T细胞亚群的测定 ;不同免疫时间段内 ,收集实验鼠血清 ,ELISA法检测抗体水平的变化。结果　P30乳酸球菌口服免疫组脾淋巴细胞ConA刺激后增殖能力比两对照组显著提高 ,CD+ 4 和CD+ 8的百分数均明显升高 ;第 12周 (即最后一次免疫结束一个月 ) ,P30乳酸球菌口服免疫组检测到特异性抗体IgG。结论　P30乳酸球菌口服疫苗有效地激发了小鼠细胞免疫反应 ,特异性抗体IgG在免疫结束一个月后生成明显。 展开更多
关键词 弓形虫 P30乳酸球菌口服疫苗 诱导 小鼠 细胞免疫反应 抗体生成 动态过程
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中药材连翘道地性的分子生物学探讨 被引量：5
17
作者 顾华 盖玲 +4 位作者 周铜水 吴献礼 蒋科技 陈家宽 蒯本科 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期664-668,共5页
运用随机扩增多态DNA(RAPD)方法研究了来自山西黎城、长治、平顺、壶关、屯留及安泽6个地区11个连翘地方栽培品系的亲缘关系,并用HPLC方法测定连翘主要指标成分———连翘甙含量的变异情况.RAPD分析结果表明,连翘栽培的地方品系间存在... 运用随机扩增多态DNA(RAPD)方法研究了来自山西黎城、长治、平顺、壶关、屯留及安泽6个地区11个连翘地方栽培品系的亲缘关系,并用HPLC方法测定连翘主要指标成分———连翘甙含量的变异情况.RAPD分析结果表明,连翘栽培的地方品系间存在明显的DNA水平上的多样性变异,运用Philip3.6软件包以及Wagner算法,可分为A、B、C3个不同分支.连翘甙含量分析结果显示,2个遗传关系相近分支B和C的连翘甙含量差异不显著(t=0.44,p=0.67;平均连翘甙含量分别为0.53mg/g和0.67mg/g),这2个类群与第3个类群遗传差异大,连翘甙含量差异也很大(8.7mg/g).这种DNA分子多样性差异与化学指标成分含量差异的相关性说明连翘的遗传基础可能对化学指标成分的形成和积累有显著的影响.研究结果显示运用RAPD分析手段进行药材道地性研究具有可行性.研究结果不仅对于连翘的道地性研究和中药材GAP(GoodAgriculturalPractice)生产有一定的指导意义,而且对于其他道地中药材的研究也具有一定参考价值. 展开更多
关键词 连翘 连翘甙 随机扩增多态DNA 高效液相色谱
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弓形虫RH株ROP1抗原基因的克隆与表达 被引量：6
18
作者 杨秋林 陆惠民 +1 位作者 施宓 黄伟达 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第5期37-40,共4页
目的　在大肠杆菌中高效表达ROP1抗原。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫RH株cDNA文库中扩增得到编码ROP1的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX - 5x - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,用亲和层析柱纯化表达产物 ,并用SDS ... 目的　在大肠杆菌中高效表达ROP1抗原。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫RH株cDNA文库中扩增得到编码ROP1的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX - 5x - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,用亲和层析柱纯化表达产物 ,并用SDS -PAGE和Westernblotting进行鉴定。 结果　 ( 1)在我们比较的 12 4 9个碱基中 ,我们得到的ROP1基因在Ossorio报道的基因的 4 4 7位与 4 4 8位之间有一 96bp的插入片段 ,另有 14个碱基不同 ,造成 3个氨基酸的改变 ,两基因之间有 91.19%的同源性 ,( 2 )得到一分子量约为 70kDa的融合蛋白。结论　 1,我们获得了一与Ossorio报道的基因有较大差异的rop1基因 (GeneBank登录号 :AF3 5 0 2 61) ( 2 ) ,ROP1基因在大肠杆菌中得到了ROP1融合蛋白的高效表达。 展开更多
关键词 弓形虫 ROP1 PCR 基因表达 基因克隆
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水稻中一个与COI1同源的基因克隆及其表达分析 被引量：4
19
作者 王维平 曹凯鸣 王喜萍 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期206-209,共4页
利用同源序列分析 ,在水稻基因数据库中检索到了几条与拟南芥中的COI1基因具有高度同源性的EST(expressionsequencetag)片段和相应的基因组序列 .根据EST拼接和基因组比较结果设计引物 ,利用RT PCR在水稻中得到与COI1高度同源的cDNA ,... 利用同源序列分析 ,在水稻基因数据库中检索到了几条与拟南芥中的COI1基因具有高度同源性的EST(expressionsequencetag)片段和相应的基因组序列 .根据EST拼接和基因组比较结果设计引物 ,利用RT PCR在水稻中得到与COI1高度同源的cDNA ,并在基因组中推断出相应的基因 ,命名为RCOI1.RCOI1与COI1在氨基酸水平有 74 %的同源性 .与COI1相似 ,RCOI1蛋白也具有典型的F box和LRRs结构域 .半定量RT PCR显示该基因的表达受茉莉酸甲酯 (MeJA)的诱导 ,说明这个基因可能参与水稻茉莉酸应答反应 .该基因的发现对于探索单子叶植物的茉莉酸信号转导途径 ,以及研究该途径在农作物中的抗虫抗病和抵抗恶劣环境等方面的作用都有重要意义 . 展开更多
关键词 水稻 EST RT—PCR 茉莉酸甲酯 半定量RT-PCR
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邻单胞菌邻苯二酚1,2-双加氧酶基因(tfd C)的克隆及其在大肠杆菌中表达 被引量：5
20
作者 马忠华 罗如新 +3 位作者 夏怡丰 王文东 陈文峻 蒯本科 《微生物学报》 CSCD 北大核心 2000年第6期579-585,共7页
根据已报道的邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶基因 (tfdC)序列 ,设计PCR引物 ,从一株邻单胞菌 (Plesiomonas)的 pL1质粒上扩增到tfdC基因片段 ,连接到 pGEM T载体上 ,并转化大肠杆菌JM1 0 9菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全... 根据已报道的邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶基因 (tfdC)序列 ,设计PCR引物 ,从一株邻单胞菌 (Plesiomonas)的 pL1质粒上扩增到tfdC基因片段 ,连接到 pGEM T载体上 ,并转化大肠杆菌JM1 0 9菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全长 80 1bp ,有一个阅读框 ,编码 2 55个氨基酸 ,与增氧产碱菌 (Alcaligeneseutroplus)的tfdC基因相比 ,在 693位相差一个碱基 (C→A) ,导致编码产物在 2 2 8位相差一个氨基酸。将目的片段克隆到 pBluescrip tIIKS质粒载体上 ,筛选到阳性克隆 pBt1 2G ,在大肠杆菌JM1 0 9中可表达邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶 (C1 2 0 )的活性 ;将翻译起始密码子为ATG的目的片段克隆到 pET 30a质粒载体上 ,筛选到阳性克隆 pET30A ,在大肠杆菌BL2 1 (DE3) plysS中可表达目的蛋白。C1 2 0是芳香族化合物降解过程中的关键酶 ,为了进一步在草坪草中表达tfdC基因 ,利用草坪草降解环境中芳香族污染物 ,将该基因翻译起始密码子由GTG突变成ATG ,突变后的基因在大肠杆菌中可正常表达C1 2 0的活性。 展开更多
关键词 邻单胞菌 (tfd C) PCR 克隆 表达
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