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CFSE标记结合流式细胞术检测肝星状细胞抑制CD4^+/CD8^(+)T淋巴细胞增殖的研究 被引量：1
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作者 吴玉婧 赵超 +1 位作者 孙淑惠 郭津生 《老年医学与保健》 CAS 2016年第5期277-281,302,共6页
目的研究羟基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺脂(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)标记结合流式细胞术在检测体外共培养体系中T淋巴细胞亚群增殖中的应用,并利用此方法研究小鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)对... 目的研究羟基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺脂(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)标记结合流式细胞术在检测体外共培养体系中T淋巴细胞亚群增殖中的应用,并利用此方法研究小鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)对T淋巴细胞亚群增殖的影响。方法采用磁珠分选雄性C57/B6小鼠脾脏T淋巴细胞,经CFSE标记后与脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)刺激或不刺激的C57/B6来源的小鼠肝星状细胞系JSl共培养3 d,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群的增殖,flowjo软件分析增殖动力模型。结果JSl可以抑制CD4^+和CD8^(+)T淋巴细胞增殖的能力,并且当JSl/T细胞比值增加时,抑制作用更强。LPS的刺激不影响JSl对CD4^+和CD8^(+)T细胞增殖的抑制作用。结论肝星状细胞JS1具有免疫抑制能力,CFSE标记结合流式细胞术是一种可靠的分析淋巴细胞增殖的工具,可以有效检测出共培养体系中细胞亚群的增殖情况,在研究体外淋巴细胞功能中具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 肝星状细胞 羟基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺脂 CD4-阳性T淋巴细胞 CD8-阳性T淋巴细胞
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线粒体ALDH2缺失对小鼠骨髓源性内皮祖细胞功能的影响
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作者 孙晓垒 孙淑惠 +4 位作者 朱洪 董震 马鑫 韩莎莎 孙爱军 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2016年第5期1857-1860,共4页
目的研究线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)缺失对体外培养的小鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)生长状态及功能的影响。方法分别取C57BL/6小鼠(WT)和相同背景来源的A/d/h2基因缺失(Aldh2-/-,KO)小鼠的股骨和胫骨,PBS冲洗获得骨髓细胞组份,密度梯度离心... 目的研究线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)缺失对体外培养的小鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)生长状态及功能的影响。方法分别取C57BL/6小鼠(WT)和相同背景来源的A/d/h2基因缺失(Aldh2-/-,KO)小鼠的股骨和胫骨,PBS冲洗获得骨髓细胞组份,密度梯度离心收集单个核细胞白膜层,并进行细胞计数,同时观察不同基因型来源的细胞在不同的培养体系及不同时间点的生长特点,采用乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)吞噬实验和荆豆凝集素(FITC-UEA-1)结合实验验证EPC的状态和功能。结果 Aldh2-/-小鼠的骨髓单个核(BMNCs)数目与野生型小鼠相比显著降低(p<0.05,n=7),但是成集落能力两组之间无差异。在M199培养基中培养不同基因型来源的BMNCs时,细胞呈链条状结构,而在EGM-2培养基中培养时,细胞呈集落式生长。培养第十天时,WT小鼠来源EPCs的Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1双阳性率达到80.23±3.98%,而A/dh2-/-小鼠EPCs的双阳性率只有52.66±10.54%。培养至第三周时,CD31流式检测表明,Aldh2基因缺失降低EPCs CD31的表达。结论A/dh2基因缺失影响EPCs的增殖效率及功能。这一作用可能会影响其在临床缺血性疾病中的推广应用。 展开更多
关键词 乙醛脱氢酶2 骨髓单个核细胞 内皮祖细胞
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丙型肝炎病毒高水平复制细胞株的构建及其机制初步研究
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作者 宋武慧 易志刚 《微生物与感染》 2020年第5期285-292,共8页
旨在探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)cured细胞株的易感机制。本研究将体外转录的HCV RNA电转入肝癌细胞系Huh 7细胞,建立HCV复制子细胞株,用γ-干扰素(interferon,IFN)处理复制子细胞株,获得HCV cured Huh 7A和Huh 7B细胞株... 旨在探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)cured细胞株的易感机制。本研究将体外转录的HCV RNA电转入肝癌细胞系Huh 7细胞,建立HCV复制子细胞株,用γ-干扰素(interferon,IFN)处理复制子细胞株,获得HCV cured Huh 7A和Huh 7B细胞株。用插入报告基因的HCV毒株Jc1-G感染上述细胞株,分别进行荧光素酶活性测定、蛋白质印迹法和荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测以验证其易感性。收集Huh 7、Huh 7.5、Huh 7A和Huh 7B细胞并利用IFN-α处理,之后用蛋白质印迹法及荧光定量PCR进行检测,验证细胞株中IFN诱生信号通路中关键因子内源性表达及抗病毒活性ISGs的激活水平。结果显示,在Huh 7A和Huh 7B细胞中检测不到病毒RNA,与Huh 7细胞一致。病毒感染实验中,与Huh 7细胞相比,Huh 7A和Huh 7B细胞株中荧光素酶活性增高百倍,病毒蛋白表达和RNA水平亦显著上调,与Huh 7.5细胞株中的表达水平接近。IFN信号通路实验中,与Huh 7细胞相比,Huh 7A和Huh 7B细胞株中RIG-I/MDA5/MAVS内源性蛋白表达和mRNA水平无明显差异;IFN-α处理细胞后IFN刺激基因isg56,mx1,mx2,oax1,oax2,viperin,cxcl10,ifitm1和ifitm3激活水平亦无显著变化。结果提示,本研究制备的Huh 7A和Huh 7B细胞株可支持HCV高水平复制,将为研究病毒复制机制提供有力的支持。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒cured细胞株 Γ-干扰素 干扰素刺激基因
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