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IDH1基因在肝内胆管癌细胞HuCCT1增殖与迁移中的作用及其初步机制
1
作者 林美佳 雷宇清 +3 位作者 叶洲杰 朱丽萍 王心睿 黄雄飞 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期194-203,共10页
目的探讨异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在肝内胆管癌(iCCA)细胞HuCCT1增殖与迁移中的作用及其可能的分子机制。方法采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建IDH1基因敲除的HuCCT1细胞(HuCCT1^(IDH1-/-));CCK-8法和克隆形成实验检测IDH1野生型HuCCT1(Hu... 目的探讨异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在肝内胆管癌(iCCA)细胞HuCCT1增殖与迁移中的作用及其可能的分子机制。方法采用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建IDH1基因敲除的HuCCT1细胞(HuCCT1^(IDH1-/-));CCK-8法和克隆形成实验检测IDH1野生型HuCCT1(HuCCT1^(WT))细胞和HuCCT1^(IDH1-/-)细胞的增殖能力;细胞划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting检测细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平。生物信息学方法分析上述两种HuCCT1细胞的转录组测序结果,Western blotting验证转录组信息通路相关蛋白的表达。结果与HuCCT1细胞比较,HuCCT1^(IDH1-/-)细胞增殖和克隆形成数目明显减少(P<0.05),阻滞在G_(2)/M期细胞的比例明显增加(P<0.01),划痕愈合率明显降低(P<0.01),迁移细胞数目(P<0.001)和侵袭细胞数目(P<0.05)明显减少;q RT-PCR检测结果显示,HuCCT1^(IDH1-/-)细胞IDH1、Vimentin、MMP-9和调控G_(2)/M期增殖相关基因Cyclin A2、Cyclin B1及CDK1 mRNA表达水平降低(P<0.05),编码E-cadherin的CDH1 mRNA表达水平升高(P<0.01);Western blotting检测结果显示,HuCCT1^(IDH1-/-)细胞中E-cadherin表达水平升高(P<0.05),N-cadherin、Vimentin及MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05)。转录组测序结果显示,HuCCT1^(WT)与HuCCT1^(IDH1-/-)存在1476个差异表达基因(DEGs);基因本体论(GO)分析显示上述DEGs显著富集在炎症反应、细胞信号转导和细胞代谢等生物学过程;KEGG通路分析显示上述DEGs显著富集在Wnt、MAPK、Rap1、Hippo、TNF等与肿瘤细胞增殖和侵袭转移密切相关的信号通路。Western blotting验证结果显示,与HuCCT1^(WT)比较,HuCCT1^(IDH1-/-)细胞Wnt信号通路的Wnt3a和β-catenin蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论IDH1基因参与调控iCCA细胞HuCCT1的迁移、侵袭及EMT过程,其机制可能与激活Wnt/� 展开更多
关键词 肝内胆管癌 异柠檬酸脱氢酶1 细胞迁移 细胞侵袭 转录组
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组蛋白去甲基化酶KDM3B结构、功能及其相关疾病研究进展
2
作者 彭小燕 叶洲杰 王心睿 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2023年第3期364-373,共10页
表观遗传学是研究在DNA序列不变的前提下,其他机制异常引起基因表达改变并可遗传的学科。组蛋白甲基化/去甲基化修饰是表观遗传学的重要调控机制之一,是甲基化酶和去甲基化酶动态相互作用的结果,其中H3K9的甲基化和去甲基化是近年来研... 表观遗传学是研究在DNA序列不变的前提下,其他机制异常引起基因表达改变并可遗传的学科。组蛋白甲基化/去甲基化修饰是表观遗传学的重要调控机制之一,是甲基化酶和去甲基化酶动态相互作用的结果,其中H3K9的甲基化和去甲基化是近年来研究最深入的组蛋白修饰之一。组蛋白去甲基化酶KDM3B包含一个JmjC结构域,并具有固有的H3K9去甲基化活性,能够特异性去除H3K9me1/2甲基化修饰,调控基因转录、DNA损伤修复,参与细胞增殖、细胞凋亡、干细胞干性维持、肿瘤和遗传病发生发展等。该文就组蛋白去甲基化酶KDM3B的结构、作用机制、生物学功能及其成为一个临床研究和治疗的潜在药理学靶点的可能性作一综述。 展开更多
关键词 表观遗传 组蛋白去甲基化酶KDM3B 肿瘤 遗传病 生殖系统
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CRISPR/Cas9介导的KIFC1基因敲除对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响
3
作者 范晓静 魏雅岚 +2 位作者 叶洲杰 朱丽萍 王心睿 《肿瘤防治研究》 CAS 2023年第11期1051-1058,共8页
目的探讨KIFC1基因在宫颈癌细胞中的功能及对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法设计靶向KIFC1基因的sgRNAs并基于pSpCas9(BB)-2A-GFP载体构建重组质粒,共转染至He La细胞。通过流式细胞分选、有限稀释和测序验证筛选单克隆敲除细胞株。采... 目的探讨KIFC1基因在宫颈癌细胞中的功能及对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法设计靶向KIFC1基因的sgRNAs并基于pSpCas9(BB)-2A-GFP载体构建重组质粒,共转染至He La细胞。通过流式细胞分选、有限稀释和测序验证筛选单克隆敲除细胞株。采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法检测敲除细胞的KIFC1转录及蛋白表达水平,利用相差显微成像、荧光共聚焦显微成像观察细胞核、微管骨架等细胞表型。通过生长曲线绘制、EdU标记、吖啶橙染色分析细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡情况。结果KIFC1基因缺失导致He La细胞形态结构发生显著变化,多核、微核及异常微管骨架的细胞明显增加,细胞周期紊乱,细胞晚期凋亡数量显著升高,细胞增殖能力下降(均P<0.05)。结论KIFC1基因缺失影响He La细胞微管骨架的组装并形成异常延伸和细胞分裂,进而导致细胞核形态异常、染色质丢失、细胞周期停滞、凋亡增加。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 KIFC1 宫颈癌 He La细胞 细胞凋亡 细胞分裂
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阳离子聚合物在乳腺癌基因治疗中的研究进展
4
作者 林爱珠 王心睿 《江苏医药》 CAS 2022年第7期739-742,共4页
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,难以治愈且对标准治疗产生抗药性的乳腺癌常与基因的改变有关,快速发展的基因治疗为乳腺癌治疗提供了新思路。目前,基因载体分为病毒载体和非病毒载体两大类,相对于病毒载体,非病毒载体中的阳离子聚合... 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,难以治愈且对标准治疗产生抗药性的乳腺癌常与基因的改变有关,快速发展的基因治疗为乳腺癌治疗提供了新思路。目前,基因载体分为病毒载体和非病毒载体两大类,相对于病毒载体,非病毒载体中的阳离子聚合物,由于其低免疫原性、安全性高、结构可修饰和制备简单等特点,是一类极具应用前景的基因载体。本文就阳离子聚合物作为基因载体在乳腺癌治疗中的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 阳离子聚合物 乳腺癌 基因治疗
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