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miR-21-3p调节结核分枝杆菌在宿主巨噬细胞内存活机制的研究 被引量：4
1
作者 吴托雅 石金 +4 位作者 郭继东 刘原园 逄宇 鲁洁 高飞 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2021年第5期475-481,共7页
目的研究miR-21-3p在结核分枝杆菌(MTB)感染巨噬细胞免疫应答中的调控作用,并进一步探讨其发挥作用的机制。方法收集6例临床确诊肺结核患者及6名健康人的外周血,分离出外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。将miR... 目的研究miR-21-3p在结核分枝杆菌(MTB)感染巨噬细胞免疫应答中的调控作用,并进一步探讨其发挥作用的机制。方法收集6例临床确诊肺结核患者及6名健康人的外周血,分离出外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。将miR-21-3p模拟物(mimic)、miR-21-3p抑制剂(inhibitor)及阴性对照(NC-mimic及NC-inhibitor)转染细胞后,在不同时间点收集细胞。用MTB标准株H37Rv分别感染细胞系THP-1和U937。采用实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测miR-21-3p及促炎因子的表达水平。通过生物信息学工具筛选与miR-21-3p相互作用的靶基因,并采用qRT-PCR验证调控关系。结果临床标本的检测结果表明,结核病组PBMC的miR-21-3p相对表达量为7.286(6.964,10.483),明显高于健康对照组的1.030(0.997,1.169),差异有统计学意义(U<0.001,P=0.002)。细胞实验结果显示,在感染MTB 24h后,细胞系THP-1及U937中的miR-21-3p相对表达量分别为16.311(15.543,17.030)和72.850(65.343,97.343),与感染前[1.038(0.959,1.165)与1.029(0.979,1.200)]相比,均明显升高,差异均有统计学意义(U值均<0.001,P值均为0.002)。以MTB标准株H37Rv感染miRNA转染的实验组细胞后的菌落形成单位(colony-forming unit,CFU)结果显示,在感染后24h miR-21-3p模拟物组的胞内菌量为7.5×10^(4)(6.0×10^(4),8.8×10^(4)),明显少于NC-mimic组的13.5×10^(4)(12.0×10^(4),14.0×10^(4)),差异有统计学意义(U<0.001,P=0.002)。与NC-mimic组相比,miR-21-3p模拟物组巨噬细胞对于MTB感染导致的炎症应答明显增强,IL-6及TNF-α的mRNA相对表达水平分别由1.803(1.729,1.892)及0.960(0.858,1.020)升高至4.520(4.234,5.205)及1.455(1.372,1.523),差异均有统计学意义(U值均<0.001,P值均为0.002);而抑制剂组的白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)相对表达水平分别为0.927(0.901,1.050)及0.781(0.705,0.805),较NC-inhibitor组的1.819(1.007,1.953)及1.101(0.994,1.202)明显降低,差异均有统计学意义(U=2.000,P=0. 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 微小RNA 巨噬细胞 免疫调节
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儿童肺外结核病473例临床特征分析
2
作者 马涛 鲁洁 +2 位作者 徐慧 赵顺英 李惠民 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期491-496,共6页
目的了解儿童肺外结核病的临床特点,诊治方法以及预后相关因素,以提高对该病的诊治水平。方法回顾性分析2011年1月至2020年12月北京儿童医院收治住院的确诊和临床诊断肺外结核病患儿的临床资料。结果共收治住院肺外结核病473例,占结核... 目的了解儿童肺外结核病的临床特点,诊治方法以及预后相关因素,以提高对该病的诊治水平。方法回顾性分析2011年1月至2020年12月北京儿童医院收治住院的确诊和临床诊断肺外结核病患儿的临床资料。结果共收治住院肺外结核病473例,占结核病患儿36.3%(473/1303),男269例(56.9%),农村378例(79.9%)。发病中位年龄为4.1(1.2~9.9)岁,≤5岁250例(52.9%)。经病原学或病理学检查确诊110例(23.3%),临床诊断363例(76.7%),其中结核性脑膜炎占比居首位(202例,42.7%)。307例患儿肺外标本中,抗酸染色涂片、Xpert MTB/RIF、结核杆菌培养、病理学检查4种检验方法的阳性率差异有统计学意义(P<0.01),病理学检查和Xpert MTB/RIF阳性率较高。313例胸部影像提示存在活动或陈旧性结核病。截至2022年6月18日,共随访336例,预后好211例,预后差125例(其中死亡23例)。多因素logistic回归分析发现,年龄≤5岁是影响预后的独立危险因素(P<0.05),腹腔结核病、骨及关节结核病(以结核性脑膜炎为参考)是影响预后的独立保护因素(P<0.05)。结论住院结核病患儿中约三分之一为肺外结核病,最常见为结核性脑膜炎,大多为临床诊断,分子诊断技术Xpert MTB/RIF在肺外结核标本中敏感度较高。≤5岁患儿和结核性脑膜炎相对预后较差。 展开更多
关键词 肺外结核病 流行病学 诊断 治疗 儿童
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应用二代测序方法检测痰标本中结核分枝杆菌耐药性的探索性研究 被引量：5
3
作者 刘原园 石金 +5 位作者 初平 吴托雅 李璐 逄宇 鲁洁 郭永丽 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期552-559,共8页
目的比较二代测序(NGS)检测方法在痰标本和结核分枝杆菌菌株中耐药性的诊断效能,从而探讨NGS方法检测痰标本耐药性的可行性。方法本研究属于回顾性研究,收集了北京胸科医院2017年1—12月收治50例肺结核患者的痰标本和相应的临床分离菌... 目的比较二代测序(NGS)检测方法在痰标本和结核分枝杆菌菌株中耐药性的诊断效能,从而探讨NGS方法检测痰标本耐药性的可行性。方法本研究属于回顾性研究,收集了北京胸科医院2017年1—12月收治50例肺结核患者的痰标本和相应的临床分离菌株。用NGS方法分别检测痰标本和相应的临床分离菌株katG、inhA、rpoB、embA、embB、rpsL、rrs、gyrA、gyrB、tlyA的基因突变。采用比例法对菌株进行表型药敏试验(drug susceptibility test,DST)。以DST结果为参考,分别计算临床菌株NGS方法、痰标本NGS方法敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,以及与表型DST的一致性统计量(Kappa)。对于NGS检测在痰标本和菌株样本中的准确性比较用χ^(2)检验。结果在各种突变基因中,rpoB(63.83%,30/47)与rrs(57.45%,27/47)最常见,其次是katG(46.81%,22/47)、rpsL(29.79%,14/47)、gyrA(27.66%,13/47)、embB(21.28%,10/47)、tlyA(12.77%,6/47)、gyrB(8.51%,4/47),以及inhA启动子区(19.15%,9/47)、embA启动子区(12.77%,6/47)突变。NGS方法与异烟肼、利福平、乙胺丁醇、二线注射类药物(链霉素、卷曲霉素、卡那霉素、阿米卡星)、左氧氟沙星的耐药表型相比,在痰样本中,敏感度分别为85.71%、91.67%、77.78%、81.82%、100.00%、87.50%、100.00%、69.23%,特异度分别为100.00%、94.12%、87.50%、89.47%、97.06%、96.97%、94.29%、89.29%。在菌株样本中,敏感度分别为92.86%、100.00%、81.82%、86.96%、88.89%、80.00%、100.00%、85.71%,特异度分别为100.00%、92.86%、87.10%、94.74%、100.00%、100.00%、97.14%、92.86%。与表型药敏结果相比,在痰标本中,NGS方法对异烟肼、利福平、卷曲霉素、卡那霉素、阿米卡星具有较好的检测效能(Kappa值≥0.75);在菌株中,NGS方法对异烟肼、利福平、链霉素、卷曲霉素、卡那霉素,阿米卡星及左氧氟沙星具有较好的检测效能(Kappa值≥0.75)。以NGS方法检测菌株的准确度为参照,检测 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耐药 二代测序 痰标本
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结核分枝杆菌Mce4蛋白家族研究进展 被引量：1
4
作者 刘原园 李璐 +1 位作者 吴托雅 鲁洁 《结核与肺部疾病杂志》 2022年第5期416-420,共5页
由结核分枝杆菌引起的结核病自2007年以来一直位居单一传染性疾病死因之首。结核病流行的主要原因是由于结核分枝杆菌能在宿主细胞内长期休眠,对宿主防御和药物治疗具有很强的抵抗力。结核分枝杆菌的哺乳动物细胞入侵(mammalian cell en... 由结核分枝杆菌引起的结核病自2007年以来一直位居单一传染性疾病死因之首。结核病流行的主要原因是由于结核分枝杆菌能在宿主细胞内长期休眠,对宿主防御和药物治疗具有很强的抵抗力。结核分枝杆菌的哺乳动物细胞入侵(mammalian cell entry,Mce)蛋白家族在其侵袭和细胞内存活中起着重要作用,Mce蛋白家族有4个mce操纵子(mce1-4)编码。其中,mce4操纵子及其编码的Mce4蛋白家族在诱导病原菌入侵、调控宿主免疫、摄取利用胆固醇的过程中至关重要。笔者综述了mce4操纵子及Mce4蛋白家族的研究进展,以便对Mce4蛋白在结核分枝杆菌发病机制中的作用有更深入的认识。同时,也能为结核病的治疗提供潜在的新靶点。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 免疫蛋白质类 操纵子 综述文献(主题)
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结核分枝杆菌蛋白Rv0309通过蛋白STUB1抑制巨噬细胞自噬对耻垢分枝杆菌胞内存活的影响
5
作者 李璐 刘原园 +4 位作者 袁金锋 彭逍 逄宇 鲁洁 唐神结 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期396-403,共8页
目的探讨结核分枝杆菌(MTB)蛋白Rv0309促进耻垢分枝杆菌(Ms)在巨噬细胞胞内存活的分子调节机制。方法以Ms为研究结核分枝杆菌的模型,构建带有对照组pMV261-3*flag空载质粒和实验组pMV261-Rv0309-3*flag质粒的重组Ms并感染RAW264.7细胞... 目的探讨结核分枝杆菌(MTB)蛋白Rv0309促进耻垢分枝杆菌(Ms)在巨噬细胞胞内存活的分子调节机制。方法以Ms为研究结核分枝杆菌的模型,构建带有对照组pMV261-3*flag空载质粒和实验组pMV261-Rv0309-3*flag质粒的重组Ms并感染RAW264.7细胞。通过计数菌落形成单位(CFU),探索蛋白Rv0309对Ms胞内存活的影响。通过质谱法筛选蛋白Rv0309与宿主相互作用的蛋白,采用免疫共沉淀法(Co-IP)验证宿主蛋白STUB1可与蛋白Rv0309相互作用。敲减RAW264.7细胞STUB1基因后感染Ms,计数CFU,探索STUB1基因敲减后,蛋白Rv0309对Ms胞内存活的影响。敲减RAW264.7细胞STUB1基因后感染Ms,收样后进行Western blot实验,探索STUB1基因敲减后,蛋白Rv0309对巨噬细胞自噬功能的影响。使用GraphPad Prism 8软件进行统计分析,本实验选择t检验进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果Western blot显示蛋白Rv0309表达于耻垢分枝杆菌体内并分泌到胞外。感染THP-1巨噬细胞实验在24 h时实验组Ms-Rv0309的CFU高于对照组Ms-pMV261,差异有统计学意义(P<0.05)。感染RAW264.7巨噬细胞实验结果趋势与感染THP-1巨噬细胞相同。免疫共沉淀(Co-IP)结果显示免疫沉淀(IP):Flag和IP:HA结果中出现对应的Flag和HA条带。敲减STUB1的实验组(siRNA-STUB1组)CFU水平显著高于未敲减STUB1对照组(NC组)CFU;与对照组Ms-pMV261相比,Ms-Rv0309组CFU均显著高于Ms-pMV261组。实验组Ms-Rv0309的LC3Ⅱ条带在对应时间灰度均浅于对照组Ms-pMV261,8 h时结果最显著(LC3Ⅱ/β-actin:0.76±0.05 vs 0.47±0.07),差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-STUB1组LC3Ⅱ条带在对应时间灰度均浅于NC组;对比Ms-pMV261和Ms-Rv0309菌株感染的CFU结果发现,与Ms-pMV261组相比,在对应时间LC3Ⅱ条带灰度Ms-Rv0309组更浅。结论MTB蛋白Rv0309能够成功表达于耻垢分枝杆菌并分泌到胞外,可抑制巨噬细胞的自噬过程。蛋白Rv0309与宿主蛋白STUB1相互作用,抑制巨噬细胞 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 分枝杆菌 耻垢 自噬 蛋白Rv0309 蛋白STUB1
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