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利用毛细管电泳测定牛乳和山羊乳混合乳的蛋白质 被引量:14
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作者 石燕 姜金斗 刘宁 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期119-124,共6页
采用毛细管区带电泳方法,选择聚丙烯酰胺涂层毛细管对混合乳中的蛋白进行图谱的研究,确定混合乳的定性定量检测方法。该方法对牛乳和山羊乳混合乳中的蛋白进行了很好的分离,确定了牛乳αs1-CN、αs0-CN、κ-CN、β-casein A1和山羊乳的... 采用毛细管区带电泳方法,选择聚丙烯酰胺涂层毛细管对混合乳中的蛋白进行图谱的研究,确定混合乳的定性定量检测方法。该方法对牛乳和山羊乳混合乳中的蛋白进行了很好的分离,确定了牛乳αs1-CN、αs0-CN、κ-CN、β-casein A1和山羊乳的β-CN、β1-casein作为定性检测的酪蛋白,测得了混合乳中不同酪蛋白峰面积的比值与混合比例呈很好的线性关系,相关系数均大于0.997,可以作为定量检测混合乳的指标。本法简便、快速、准确,为乳及乳制品质量的监控提供了一种新的手段,可用于乳的质量监控。 展开更多
关键词 毛细管区带电泳 混合乳 酪蛋白
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pH对中国人乳β-酪蛋白二级结构的圆二色和拉曼特征影响 被引量:8
2
作者 任皓威 张婉舒 +1 位作者 李相怡 刘宁 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第2期384-389,共6页
人乳中β-酪蛋白为婴儿的快速生长提供了最适宜的氨基酸、钙磷等。以往的研究均是对牛乳的β-酪蛋白二级结构进行分析,而牛乳β-酪蛋白对婴儿配方乳的指导意义不如人乳β-酪蛋白,且人乳β-酪蛋白难以获得合适的蛋白晶体,其三级结构不清... 人乳中β-酪蛋白为婴儿的快速生长提供了最适宜的氨基酸、钙磷等。以往的研究均是对牛乳的β-酪蛋白二级结构进行分析,而牛乳β-酪蛋白对婴儿配方乳的指导意义不如人乳β-酪蛋白,且人乳β-酪蛋白难以获得合适的蛋白晶体,其三级结构不清楚。为了获得中国人乳β-酪蛋白二级结构的相关基础信息,采用圆二色光谱(CD)法和拉曼光谱(Raman)法分析在不同pH条件下其二级结构的变化,结果表明:pH值的改变能够诱导中国人乳β-酪蛋白二级结构的改变,CD分析表明β-酪蛋白各部分的二级结构分别是:0.5%~2%α-螺旋,16%~18%β-折叠,30%~34%β-转角,49%~51%无规则卷曲;随着pH的增加,部分结构发生了变化,α-螺旋在pH 8处含量增加,而在pH 10处含量减小。拉曼光谱分析表明:β-酪蛋白在酰胺I的特征峰在1 662cm-1处,分析出β-酪蛋白的无规则卷曲含量较高。同时,根据I850/I830的比值计算出β-酪蛋白的酪氨酸残基趋向于"暴露式"。圆二色光谱和拉曼光谱都证明了人乳β-酪蛋白二级结构中无规则卷曲的含量最高,而β-折叠和β-转角含量保持相对的稳定。并且,在pH 8条件下,α-螺旋含量高于在其他pH条件下的含量。 展开更多
关键词 圆二色光谱 拉曼光谱 人乳β-酪蛋白 二级结构 pH值
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离子交换色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱分离鉴定中国人乳中的β-酪蛋白 被引量:6
3
作者 黄宇 任皓威 +3 位作者 刘彪 刘宁 李萌 王东茂 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期429-434,共6页
以新鲜中国人乳为研究对象,在酸性条件下加氯化钙分离酪蛋白,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定分离效果。从pH值、离心力和CaCl2浓度等3个方面对分离效果进行评价。结果表明:当pH=4.3,离心力为10 400 g,CaCl2溶液... 以新鲜中国人乳为研究对象,在酸性条件下加氯化钙分离酪蛋白,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定分离效果。从pH值、离心力和CaCl2浓度等3个方面对分离效果进行评价。结果表明:当pH=4.3,离心力为10 400 g,CaCl2溶液浓度为60 mmol/L时,分离得到的酪蛋白组分纯度最高。对所得酪蛋白沉淀进行DEAE阴离子交换色谱分离,得到3个洗脱液。对其中第3个峰进行Western-Blot法及基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱法(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定,证明该峰能与人β-酪蛋白抗体特异性结合,确认其为人乳β-酪蛋白;将质谱结果在Mascot数据库中进行数据检索,序列覆盖率为50%,进一步确定其为人乳β-酪蛋白。综上所述,我们建立了能够得到符合蛋白质组学研究要求的人乳β-酪蛋白的方法。 展开更多
关键词 阴离子交换色谱 质谱 Β-酪蛋白 纯化 中国人乳
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人乳β-酪蛋白单体二级结构及胶束微观结构的研究 被引量:6
4
作者 刘微 王辰元 +2 位作者 张婉舒 李萌 刘宁 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2014年第10期4-6,20,共4页
以人乳β-酪蛋白为研究对象,使用圆二色光谱研究单体的二级结构后,借助透射电镜,扫描电镜,和共聚焦电子显微镜技术对β-酪蛋白胶束的微观结构进行观察。圆二色光谱结果表明,单体内部含有α螺旋1.33%,β-折叠17.3%,β-转角31.07%,无规则... 以人乳β-酪蛋白为研究对象,使用圆二色光谱研究单体的二级结构后,借助透射电镜,扫描电镜,和共聚焦电子显微镜技术对β-酪蛋白胶束的微观结构进行观察。圆二色光谱结果表明,单体内部含有α螺旋1.33%,β-折叠17.3%,β-转角31.07%,无规则卷曲50.23%,二级结构相对较少,单体的内部构象疏松开放。共聚焦电子显微镜和扫描电镜结果表明胶束与胶束之间容易进一步缔合,形成直径大小不均的胶束团,透射电镜结果表明,人乳β-酪蛋白胶束最小直径约为20 nm,胶束内部呈现出疏松有孔的柔性结构,这种结构与β-酪蛋白胶束具有释放和保留某些免疫活性物质的功能相关。 展开更多
关键词 人乳β-酪蛋白 单体 二级结构 胶束 微观结构
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基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱法分析人乳β-酪蛋白新生儿体外消化模型多肽组 被引量:2
5
作者 李相怡 方曦 +4 位作者 任皓威 程琳 张拓 付国红 刘宁 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第5期631-636,共6页
通过体外模拟新生儿消化道条件,用基质辅助激光解吸离子化飞行时间串联质谱法(MALDI-TOF/TOF)探究人乳β-酪蛋白消化后的多肽组。在离子源加速电压为20 k V,激光波长337 nm,激光频率200 Hz,离子延迟提取时间330 ns,质谱信号单次扫描累... 通过体外模拟新生儿消化道条件,用基质辅助激光解吸离子化飞行时间串联质谱法(MALDI-TOF/TOF)探究人乳β-酪蛋白消化后的多肽组。在离子源加速电压为20 k V,激光波长337 nm,激光频率200 Hz,离子延迟提取时间330 ns,质谱信号单次扫描累加2000次条件下,扫描质量范围m/z 500~5000的肽段。结果表明,消化后得到26个肽段,分子量集中在1000~4000 Da。与已知功能的肽段序列进行对比,人乳β-酪蛋白在新生儿体外模型消化后未产生与已知功能的活性肽序列匹配的肽段,但发现9个肽前体,其中含4个血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽前体,2个酪蛋白磷酸肽(CPP)前体,2个抗氧化肽前体,1个免疫活性肽前体,由酶切位点推测分析,肽前体可以继续在蛋白酶作用下转化为生物活性肽。 展开更多
关键词 Β-酪蛋白 新生儿 体外消化 多肽组 基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱
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中国人乳β-酪蛋白基因克隆表达及生物信息学分析 被引量:1
6
作者 任皓威 李春 +1 位作者 刘宁 顾鑫 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第8期231-237,共7页
文献显示:牛β-酪蛋白(CSN2)目前有12种遗传变种,提示人类中也可能存在这种现象。为探究中国人乳β-酪蛋白是否与NCBI数据库中该种蛋白的1级结构具有差异性,验证作者先前对中国人乳β-酪蛋白氨基酸序列的分析,采集正常中国女性乳腺组织... 文献显示:牛β-酪蛋白(CSN2)目前有12种遗传变种,提示人类中也可能存在这种现象。为探究中国人乳β-酪蛋白是否与NCBI数据库中该种蛋白的1级结构具有差异性,验证作者先前对中国人乳β-酪蛋白氨基酸序列的分析,采集正常中国女性乳腺组织,提取总RNA,并以其为模板,通过RT-PCR方法扩增人乳β-酪蛋白的编码区(CDS)基因,连接T载体测序,然后提交至Gen Bank(登录号:KF 751868)。与NCBI上人β-酪蛋白的核苷酸序列比较,所得人乳β-酪蛋白CDS序列同源性达到100%,说明该基因在不同人种间具有高度保守性。由其核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果:理论等电点(p I)5.52,该蛋白质不存在跨膜结构,具有较强的疏水区域。连接重组质粒和PET-30a-GST载体后,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达菌株,37℃诱导4 h,目标重组蛋白以包涵体形式表达,通过Ni2+-NTA柱纯化重组蛋白,经SDS-PAGE验证,成功构建原核表达载体PET-30a-GST-CSN2,并获得重组人乳β-酪蛋白。这为进一步研究中国人乳β-酪蛋白奠定良好的基础。 展开更多
关键词 Β-酪蛋白 基因 克隆 序列分析
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小角X-射线散射与结构预测法研究中国人乳β-酪蛋白的3级结构 被引量:1
7
作者 王辰元 李萌 刘宁 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第10期223-229,共7页
通过小角X-射线散射与结构预测的方法研究人乳β-酪蛋白的3级结构,并分析其生理功能。通过使用DEAE Sepharose FAST Flow琼脂糖凝胶获得纯度大于90%的β-酪蛋白纯品,并对其溶液进行小角X-射线散射(0.2 mol磷酸盐缓冲溶液,10 mmol DTT,p ... 通过小角X-射线散射与结构预测的方法研究人乳β-酪蛋白的3级结构,并分析其生理功能。通过使用DEAE Sepharose FAST Flow琼脂糖凝胶获得纯度大于90%的β-酪蛋白纯品,并对其溶液进行小角X-射线散射(0.2 mol磷酸盐缓冲溶液,10 mmol DTT,p H 6.7),将获得的人乳β-酪蛋白的结构信息与通过折叠识别及从头预测构建的预测模型进行比较,筛选出在试验条件下与试验结果最相符的人乳β-酪蛋白3级结构模型,该模型结构松散,含有较少的α-螺旋和β-折叠。同时结合模型对人乳β-酪蛋白磷酸化、糖基化及脂质化等蛋白质功能位点进行了分析,认为人乳β-酪蛋白含有12个可以与乳糖或葡萄糖结合的糖基化位点,7个脂质化位点,其磷酸化位点与已知的5个磷酸化位点相符。 展开更多
关键词 人乳β-酪蛋白 3级结构 小角X-射线散射 结构预测
原文传递
婴幼儿配方乳粉中微量碘测定方法的比较 被引量:5
8
作者 单艺 马微 +5 位作者 刘晓玲 王象欣 夏行昊 于力涛 魏雪冬 姜毓君 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期281-285,共5页
本文采用气相色谱法(GC)、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、离子色谱法(IC)分别测定了婴幼儿配方乳粉中碘的含量。通过多方面因素对比:前处理的方式、碘的测定种类、方法线性范围、回收率、检出限、精密度等,得出电感耦合等离... 本文采用气相色谱法(GC)、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、离子色谱法(IC)分别测定了婴幼儿配方乳粉中碘的含量。通过多方面因素对比:前处理的方式、碘的测定种类、方法线性范围、回收率、检出限、精密度等,得出电感耦合等离子体质谱法前处理操作简便,受奶粉复杂基质干扰最小,在1~50μg/L线性范围内,相关系数可达到0.999以上。回收率在95.9%~103.7%之间,RSD为0.6%~2.2%,检出限为0.6μg/100g,最适合用于婴幼儿配方乳粉中微量碘的实验室常规分析。 展开更多
关键词 气相色谱法 电感耦合等离子体质谱法 离子色谱法 婴幼儿配方乳粉
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克罗诺杆菌分子鉴定方法的比较 被引量:3
9
作者 迟涛 方景泉 +1 位作者 满朝新 许慧 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期10-12,共3页
克罗诺杆菌(原名阪崎肠杆菌)是能够感染婴儿和成人的机会性致病菌,尤其是能够通过污染婴儿配方乳粉感染新生儿,严重威胁婴幼儿的健康。选取11株分离自婴儿配方乳粉中的克罗诺杆菌为研究对象,利用16S r RNA和看家基因fus A对克罗诺杆菌... 克罗诺杆菌(原名阪崎肠杆菌)是能够感染婴儿和成人的机会性致病菌,尤其是能够通过污染婴儿配方乳粉感染新生儿,严重威胁婴幼儿的健康。选取11株分离自婴儿配方乳粉中的克罗诺杆菌为研究对象,利用16S r RNA和看家基因fus A对克罗诺杆菌进行分子层面的鉴定,并得到了两者清晰的系统发育关系,结果表明两种分子鉴定的方法都能对克罗诺杆菌进行鉴定,且基于看家基因fus A的鉴定方法具有更高的辨识度,能将克罗诺杆菌的鉴定精确到种。因此利用看家基因fus A对克罗诺杆菌进行分子鉴定具有优越性,本研究结果有助于克罗诺杆菌的分子鉴定,为克罗诺杆菌的进一步研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 克罗诺杆菌 分子鉴定 16S RRNA fusA
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1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的合成研究 被引量:4
10
作者 赵晨 王敏 +2 位作者 刘宁 李春 刘丽波 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2014年第5期13-16,共4页
概述了在婴儿配方乳粉中添加1,3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(OPO)的重要性以及反应温度、反应时间、反应底物比等反应条件对OPO等母乳脂肪替代品的合成影响及其简单反应过程。比较了不同方法合成的OPO的产率与纯度。
关键词 1 3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯 人乳脂肪替代品 合成工艺
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人乳β-酪蛋白酶解产物体外对小鼠淋巴细胞的刺激作用
11
作者 顾鑫 任皓威 +1 位作者 李萌 刘宁 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2014年第4期8-10,41,共4页
采用离子交换色谱法从人乳中分离、纯化得到人乳β-酪蛋白,利用胰蛋白酶对其进行酶解,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同孵育时间下,不同质量浓度的酶解产物对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠脾T淋巴细胞增殖情况的影响;ELISA法测定Th1型细胞因... 采用离子交换色谱法从人乳中分离、纯化得到人乳β-酪蛋白,利用胰蛋白酶对其进行酶解,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同孵育时间下,不同质量浓度的酶解产物对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠脾T淋巴细胞增殖情况的影响;ELISA法测定Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-6)分泌量。结果表明,人乳β-酪蛋白酶解产物对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖具有显著的促进作用,且48 h效果最佳;对Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)的分泌具有显著的促进作用、对Th2型细胞因子(IL-6)分泌有显著下调作用;显著增加IFN-γ/IL-4的比值。 展开更多
关键词 人乳β--酪蛋白酶解产物 淋巴细胞增殖 细胞因子 TH1 Th2细胞平衡
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