自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其对宫颈癌细胞HeLa生长的作用 被引量：3

1

作者 王赞宏 彭芝兰 +1 位作者 段振玲 闫乃红 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期181-185,共5页

目的构建自噬基因Beclin 1小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,探讨Beclin 1抑制后对宫颈癌HeLa细胞生长的作用。方法根据人Beclin 1 mRNA编码序列,设计RNA干扰靶点,构建Beclin 1 shRNA表达质粒,脂质体法转染人宫颈癌HeLa细胞... 目的构建自噬基因Beclin 1小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,探讨Beclin 1抑制后对宫颈癌HeLa细胞生长的作用。方法根据人Beclin 1 mRNA编码序列,设计RNA干扰靶点,构建Beclin 1 shRNA表达质粒,脂质体法转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测其对HeLa细胞自噬基因Beclin 1 mRNA及蛋白表达的影响。MTT法分析其对细胞增殖、流式细胞仪检测其对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果构建的shRNA表达载体可以使HeLa细胞中自噬基因Beclin 1的mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度加快,凋亡率降低。结论成功构建了针对自噬基因Beclin 1的shRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中Beclin 1的表达,并促进细胞生长,抑制凋亡。 展开更多

关键词 RNA干扰 自噬 BECLIN 1表达载体

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视网膜母细胞瘤眼动脉内化疗有效性及安全性的系统评价 被引量：6

2

作者 高静歌 陈大牟 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1031-1037,共7页

背景 视网膜母细胞瘤（RB）是儿童最常见的眼内恶性肿瘤.目前临床上已有多种方法治疗RB.近些年发展起来的眼动脉内化疗（IAC）,在增加视网膜局部药物浓度的同时又可降低全身不良反应,成为近年来眼内进展期RB的一种重要治疗手段. 目的 ... 背景 视网膜母细胞瘤（RB）是儿童最常见的眼内恶性肿瘤.目前临床上已有多种方法治疗RB.近些年发展起来的眼动脉内化疗（IAC）,在增加视网膜局部药物浓度的同时又可降低全身不良反应,成为近年来眼内进展期RB的一种重要治疗手段. 目的 系统评价IAC在用于RB治疗时的疗效及安全性.方法 按照检索策略,计算机检索PubMed、Medline、Embase、EBSCO、Web of Science、万方数据库、中国知网（CNKI）、维普网（VIP）及中国生物医学文献数据库（CBM）,检索时限为建库起至2016年4月.文章筛选、数据提取、质量评级及数据分析参照系统综述和荟萃分析优先报告条目的PRISMA声明进行. 结果 共纳入27个研究,报道了超过1 067例RB患者1 314眼,超过3 818次治疗.总体保眼率为70.3％,一线治疗保眼率为76.2％,进展期RB的保眼率为57.5％,在IAC治疗期间及治疗后未接受其他治疗的患者的保眼率为76.4％.共报道23例转移,21例死亡.恶心呕吐、中性粒细胞减少等轻度全身不良反应和视网膜色素上皮改变、结膜充血、视网膜脱离等局部不良反应较为常见,但严重不良反应鲜有报道. 结论 IAC作为RB的一种治疗手段具有广阔的应用前景,严重不良反应少见,但仍需随访时间长、前瞻性的研究来明确其用于RB治疗的适应证. 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤 动脉内化疗 系统综述 中国生物医学文献数据库 安全性 有效性 眼内恶性肿瘤 全身不良反应

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屈光参差性弱视神经机制的事件相关电位研究 被引量：3

3

作者 伍叶 王守镜 +3 位作者 汪春晖 张文秋 郑重 刘陇黔 《华西医学》 CAS 2019年第11期1279-1284,共6页

目的采用事件相关电位(event-related potential,ERP)技术,从电生理学的角度探讨屈光参差性弱视的神经缺损。方法收集2013年6月-2014年2月,就诊于四川大学华西医院视光与小儿眼科门诊的19例屈光参差性弱视患者和20名正常人群进行ERP检测... 目的采用事件相关电位(event-related potential,ERP)技术,从电生理学的角度探讨屈光参差性弱视的神经缺损。方法收集2013年6月-2014年2月,就诊于四川大学华西医院视光与小儿眼科门诊的19例屈光参差性弱视患者和20名正常人群进行ERP检测,试验刺激任务为辨别Gabor斑的朝向,空间频率分别为1、2、8 cpd。比较屈光参差性弱视患者的弱视眼、对侧眼及正常人眼的P3b波波幅和潜伏时的差异。结果屈光参差性弱视眼、对侧眼和正常人眼3组在不同空间频率下的正确率、反应时间,P3b波的潜伏时和波幅在低空间频率(1、2 cpd),及P3b波波幅在高空间频率(8 cpd)时比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。在高空间频率(8 cpd)时,P3b波潜伏时在屈光参差性弱视患者的弱视眼、对侧眼和正常人眼3组间和组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且屈光参差性弱视患者的弱视眼P3b波潜伏时最长(P<0.05)。屈光参差性弱视患者的弱视眼在各空间频率上(1、2、8 cpd)P3b波时,Brodmann分区17区减弱最为明显,并在高空间频率(8 cpd)激活减弱表现最明显。结论屈光参差性弱视患者在中晚期视觉加工过程中表现出一定程度的功能障碍,应用ERP能客观地反映屈光参差性弱视患者的认知功能障碍。 展开更多

关键词 弱视 事件相关电位 神经机制

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关注RB1基因突变检测在视网膜母细胞瘤诊疗及遗传咨询中的作用 被引量：5

4

作者 陈大年 范依萌 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期742-747,共6页

视网膜母细胞瘤（RB）是人类遗传型肿瘤的原型，是常见的儿童眼内恶性肿瘤，其发生和发展与肿瘤抑制基因RB1基因的突变密切相关。RB1基因突变检测和遗传咨询有助于为患者及其家庭提供理想的诊疗及随访方案。在2017年最新的第8版国际TNM... 视网膜母细胞瘤（RB）是人类遗传型肿瘤的原型，是常见的儿童眼内恶性肿瘤，其发生和发展与肿瘤抑制基因RB1基因的突变密切相关。RB1基因突变检测和遗传咨询有助于为患者及其家庭提供理想的诊疗及随访方案。在2017年最新的第8版国际TNM肿瘤分期标准中，首次把遗传性（H）作为RB的临床分期标准，这是国际上首个TNMH分期标准。但目前由于RB1基因突变的复杂性、现有基因检测方式的局限性、遗传咨询人才的缺乏等原因，RB1基因突变检测在中国的开展水平还比较低。在中国大力发展精准医学的时代，眼科医师应加倍努力，推动RB1基因突变检测在中国的应用。 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤 RBI基因 基因突变 基因检测 遗传咨询

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重视不同糖尿病视网膜病变动物实验模型的差异及应用 被引量：2

5

作者 陈大年 王钰娇 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期404-409,共6页

糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病常见的眼部并发症，严重损害患者视力。由于DR发病机制仍未完全阐明，使得其防治仍然任重而道远。实验动物模型在DR的发病机制和防治研究中必不可少。目前这些动物模型涉及了哺乳类和非哺乳类等多个物种... 糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病常见的眼部并发症，严重损害患者视力。由于DR发病机制仍未完全阐明，使得其防治仍然任重而道远。实验动物模型在DR的发病机制和防治研究中必不可少。目前这些动物模型涉及了哺乳类和非哺乳类等多个物种，造模方法也包含了化学药物注射、高糖饮食喂养、基因编辑技术、体外全视网膜培养等。目前糖尿病鼠类模型应用最为广泛，但它仅适用于DR早期的病变研究，仍缺少可以完美模拟增生性DR（PDR）的动物模型。未来研究的重点应该是阐明早期DR的发病机制，进而找到如何防止早期非增生性DR（NPDR）过渡到PDR的策略。在选取DR动物模型时，应当考虑各自的特点，并结合自己的实验设计和目的选取合适的动物模型。 展开更多

关键词 糖尿病 糖尿病视网膜病变 动物模型

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小鼠视网膜体外电转化及Transwell体外培养的方法 被引量：2

6

作者 肖丽容 郑仕洁 +1 位作者 侯宸 闫乃红 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第7期620-624,共5页

目的介绍小鼠视网膜体外电转化及体外培养的方法 ,并对其关键技术步骤进行探讨。方法将新生小鼠处死后,取出眼球分离视网膜,利用电转化仪将携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)报告基因的质粒转入视网膜细胞,然后在Transw... 目的介绍小鼠视网膜体外电转化及体外培养的方法 ,并对其关键技术步骤进行探讨。方法将新生小鼠处死后,取出眼球分离视网膜,利用电转化仪将携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)报告基因的质粒转入视网膜细胞,然后在Transwell小室中铺片培养,利用免疫荧光方法检测Rhodopsin基因的表达。结果视网膜体外培养10d,Rhodopsin和DAPI染色显示视网膜形态完整。通过电转化方法将GFP质粒导入视网膜细胞,进行体外培养5～10 d后可检测GFP报告基因的表达。结论视网膜体外电转化结合体外培养方法是一种快速、高效研究视网膜相关基因的方法 ,可以应用于视网膜疾病、视网膜发育及相关基因功能等研究,具有独特的优势。 展开更多

关键词 视网膜体外电转化 体外培养 免疫荧光染色

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组蛋白甲基化酶抑制剂对人淋巴瘤Raji细胞生存、凋亡及细胞周期的影响 被引量：1

7

作者 肖丽容 侯宸 +3 位作者 郑仕洁 郭波 陈大年 闫乃红 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期305-310,共6页

目的研究组蛋白甲基化酶Zeste基因增强子同源物2 (enhancer of zeste homolog 2, EZH2)的3种抑制剂(UNC1999、DZNep及GSK343)对人B细胞非霍奇金淋巴瘤Raji细胞的影响。方法 PCR扩增EZH2基因16(Y641)和18(A677)外显子,Sanger测序检测其... 目的研究组蛋白甲基化酶Zeste基因增强子同源物2 (enhancer of zeste homolog 2, EZH2)的3种抑制剂(UNC1999、DZNep及GSK343)对人B细胞非霍奇金淋巴瘤Raji细胞的影响。方法 PCR扩增EZH2基因16(Y641)和18(A677)外显子,Sanger测序检测其突变情况;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测正常成年人淋巴细胞及Raji细胞EZH2的表达;使用不同浓度的UNC1999、DZNep及GSK343处理Raji细胞,CCK-8技术检测Raji细胞的生存情况;流式细胞术检测Raji细胞的凋亡情况和细胞周期变化;Western blot检测药物处理后EZH2及H3K27 me3的表达。结果 Sanger测序显示Raji细胞不携带EZH2基因Y641和A677突变位点。Western blot显示,相比正常成年人淋巴细胞,Raji细胞EZH2蛋白高表达。CCK-8法结果显示UNC1999、DZNep及GSK343对Raji细胞均有抑制生存的作用, DZNep抑制能力最弱。流式细胞术凋亡检测显示UNC1999、DZNep及GSK343促进Raji细胞的凋亡,UNC1999作用强于GSK343与DZNep;3种抑制剂均阻滞Raji细胞于G_1/G_0期,UNC1999组细胞周期阻滞最显著。Western blot显示UNC1999和GSK343抑制EZH2组蛋白甲基化酶的活性,降低H3K27 me3的表达。结论 EZH2抑制剂可通过降低H3K27 me3的表达抑制Raji细胞生存,促进细胞凋亡,改变细胞周期。UNC1999作用效果优于GSK343及DZNep,且EZH2抑制剂对Raji细胞的作用不依赖于EZH2的突变。 展开更多

关键词 淋巴瘤Raji细胞 EZH2抑制剂 细胞凋亡 细胞周期

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糠秕马拉色菌菌丝态和酵母态细胞差异表达片段的筛选 被引量：1

8

作者 闫薇 冉玉平 +3 位作者 梁作辉 夏庆杰 闫乃红 张浩 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2009年第12期778-781,共4页

目的获得糠秕马拉色菌菌丝态细胞表达而酵母态细胞不表达的基因片段。方法体外诱导培养糠秕马拉色菌标准株菌丝态和酵母态细胞并提取二者总RNA;逆转录生成糠秕马拉色菌两相细胞cDNA,运用消减杂交技术获得菌丝态细胞差异表达的cDNA,并建... 目的获得糠秕马拉色菌菌丝态细胞表达而酵母态细胞不表达的基因片段。方法体外诱导培养糠秕马拉色菌标准株菌丝态和酵母态细胞并提取二者总RNA;逆转录生成糠秕马拉色菌两相细胞cDNA,运用消减杂交技术获得菌丝态细胞差异表达的cDNA,并建立差异cDNA文库;对差异cDNA片段进行克隆测序和分析。结果①改良菌丝诱导培养基培养糠秕马拉色菌第1d可见芽生菌丝生长,第2d可见较多菌丝,第6d菌丝更长更粗;②获得可满足多种分子生物学技术要求的RNA;③建立了菌丝态细胞差异表达的cDNA文库,并获得糠秕马拉色菌菌丝态细胞表达而酵母态细胞不表达的基因片段。结论体外诱导糠秕马拉色菌菌丝生成,建立了糠秕马拉色菌菌丝态细胞的差异cDNA文库,并对部分克隆片段进行测序和分析。 展开更多

关键词 糠秕马拉色菌 菌丝 消减杂交 CDNA 差异表达

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人工饲养三种猕猴属实验动物生理指标初步测定 被引量：1

9

作者 曾涛 刘果 +2 位作者 周亮 杨锋 王红星 《四川生理科学杂志》 2011年第1期18-20,共3页

目的:测定并比较人工饲养条件下三种猕猴属实验动物的生理指标,为实验动物研究与应用提供参考数据。方法:分组测量人工繁育的藏酋猴(Macaca thibetana)23(♂21,♀2)只,恒河猴(Macacus Rhesus)10(♂9,♀1)只,食蟹猴(Macacafascicularis)... 目的:测定并比较人工饲养条件下三种猕猴属实验动物的生理指标,为实验动物研究与应用提供参考数据。方法:分组测量人工繁育的藏酋猴(Macaca thibetana)23(♂21,♀2)只,恒河猴(Macacus Rhesus)10(♂9,♀1)只,食蟹猴(Macacafascicularis)10(♂5,♀5)只,各自的体重、身长、腿长、臂长、尾长、胸围、腹围、呼吸频率等生理指标,使用SPSS17.0软件进行统计分析,比较各组间的差异。结果:三种猴随年龄增大,体重、胸围和腹围增大,尾长差异显著(P<0.001),藏酋猴性格平静,呼吸频率低于恒河猴和食蟹猴(P<0.001),其它几项测量无显著差异(P>0.05)。结论:灵长类猕猴属的同属动物生物学特性有极高一致性,也存在差异性。 展开更多

关键词 藏酋猴 恒河猴 食蟹猴 生长发育

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青光眼是一种中枢神经系统疾病吗? 被引量：12

10

作者 刘旭阳 王宁利 陈晓明 《眼科》 CAS 2010年第1期4-7,共4页

长期以来,人们对青光眼的理解均局限在房水循环障碍和视神经损害方面。近年来,随着对青光眼和视觉科学的深入研究及眼科神经科交叉学科的发展,跨学科的新问题被提了出来,即青光眼仅仅是一种视神经疾病吗?它是原发于眼部但累及全视路的... 长期以来,人们对青光眼的理解均局限在房水循环障碍和视神经损害方面。近年来,随着对青光眼和视觉科学的深入研究及眼科神经科交叉学科的发展,跨学科的新问题被提了出来,即青光眼仅仅是一种视神经疾病吗?它是原发于眼部但累及全视路的疾病吗?抑或是某种特殊中枢神经系统疾病在眼部的表现?这些问题迄今尚无定论,但有理由认为,青光眼是整个视路在多方面、多层次、多因素损害基础上形成的综合征群;其机制复杂,涉及跨突触损害、视路供血紊乱、血-脑屏障异常等。将青光眼归为眼部和脑部神经变性性疾病对认识青光眼的发病机制、建立系统全面的治疗策略、挽救患者视力具有十分重大的意义。 展开更多

关键词 青光眼 视路 中枢神经系统损害 跨突触损害 神经变性性疾病

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激素性青光眼房水排出阻力增加的机制探讨 被引量：3

11

作者 谭娟 曹桂群 +6 位作者 郭琳 余曼 崔敏 闫乃红 王宁利 陈晓明 刘旭阳 《华西医学》 CAS 2008年第1期67-69,共3页

目的:本研究通过观察经地塞米松处理前后培养的人小梁细胞的变化,探讨激素性青光眼房水排出阻力增加的机制。方法:将人类小梁细胞培养至接近体内的高分化状态,用地塞米松处理后,观察细胞形态的变化,并检测以下蛋白的分布和表达:(1)myoci... 目的:本研究通过观察经地塞米松处理前后培养的人小梁细胞的变化,探讨激素性青光眼房水排出阻力增加的机制。方法:将人类小梁细胞培养至接近体内的高分化状态,用地塞米松处理后,观察细胞形态的变化,并检测以下蛋白的分布和表达:(1)myocilin/TIGR蛋白;(2)纤连蛋白;(3)肌动蛋白交联网的形成;(4)血清淀粉样物质A蛋白。结果:人小梁细胞经地塞米松处理后(1)胞体变大,排列不规则,边界模糊,呈"融合"状;(2)细胞内外myocilin/TIGR蛋白表达均明显增加,其胞外表达与纤连蛋白位置一致,提示相互作用;(3)纤连蛋白表达增加;(4)CLANs形成,细胞间连接增强;(5)血清淀粉样物质A蛋白表达增加。结论:人类小梁细胞经地塞米松处理后形态发生变化,可能与应力纤维变化及myocilin蛋白在细胞内积聚有关。细胞间边界不清,与细胞外基质蛋白过度表达、沉积有关。小梁细胞外基质沉积以及异常的细胞间连接等改变与房水排出阻力增加的病理过程有关。 展开更多

关键词 青光眼 糖皮质激素 myocilin/TIGR蛋白 纤连蛋白 肌动蛋白交联网 血清淀粉样物质A

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小梁网途径房水外流阻力的成因 被引量：4

12

作者 容芬 刘旭阳 陈晓明 《国际眼科纵览》 2008年第1期45-49,共5页

小梁网途径为房水外流的主要途径，近年来的许多研究工作致力于寻找此途径中引起房水外流阻力改变的各种因素。目前研究结果证明：小梁网结构异常、小梁细胞肌动蛋白细胞骨架交联网的形成、小梁细胞外基质盯合成过多等因素均可引起房水... 小梁网途径为房水外流的主要途径，近年来的许多研究工作致力于寻找此途径中引起房水外流阻力改变的各种因素。目前研究结果证明：小梁网结构异常、小梁细胞肌动蛋白细胞骨架交联网的形成、小梁细胞外基质盯合成过多等因素均可引起房水外流受阻，并且认为这些因素与原发性开角型青光眼的发病机制密切相关。本文就小梁网主要结构和功能及其与房水外流阻力形成的相关机制加以综述。 展开更多

关键词 小梁网 细胞骨架 细胞外基质 房水外流 原发性开角型青光眼

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原发性开角型青光眼分子遗传学研究进展 被引量：3

13

作者 王丽君 孙静静 +1 位作者 刘旭阳 陈晓明 《国际眼科杂志》 CAS 2008年第4期794-796,共3页

青光眼是继白内障之后的首要致盲眼病,其分子遗传学一直备受关注。MYOC(myocilin)、OPTN(opticneuropathy inducing gene)和WDR36(WD40-repeat36)是目前极少数已经确定的原发性开角型青光眼的致病基因。本文重点就上述3种基因的发现、... 青光眼是继白内障之后的首要致盲眼病,其分子遗传学一直备受关注。MYOC(myocilin)、OPTN(opticneuropathy inducing gene)和WDR36(WD40-repeat36)是目前极少数已经确定的原发性开角型青光眼的致病基因。本文重点就上述3种基因的发现、定位、编码产物、突变研究及相关进展等作一综述。 展开更多

关键词 青光眼 分子遗传学 突变研究 治疗方法

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沙利多胺与叶酸偶联物的合成研究 被引量：1

14

作者 王淑燕 李鹰 +5 位作者 徐克磊 何金 周晓敏 邵薇 蔡菁 成丽 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期469-473,共5页

本文报道了沙利多胺与叶酸偶联物的合成方法。以廉价易得的邻苯二甲酸酐和谷氨酰胺为原料通过酰化、环合反应得到沙利多胺,沙利多胺与37%甲醛溶液通过羟甲基化反应得到N-羟甲基沙利多胺,再与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化的叶酸通过偶联反... 本文报道了沙利多胺与叶酸偶联物的合成方法。以廉价易得的邻苯二甲酸酐和谷氨酰胺为原料通过酰化、环合反应得到沙利多胺,沙利多胺与37%甲醛溶液通过羟甲基化反应得到N-羟甲基沙利多胺,再与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化的叶酸通过偶联反应得到目标化合物。合成的关键中间体和目标化合物的物性与文献一致,其结构经核磁共振氢谱确认。 展开更多

关键词 沙利多胺 叶酸 偶联物 合成

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三个先天性无虹膜症家系中PAX6基因的突变分析 被引量：1

15

作者 闫乃红 王云 +3 位作者 向浩天 马用信 刘旭阳 蔡素萍 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期78-81,共4页

背景人类配对盒基因（PAX6）编码一个转录调节子，对眼和大脑形态的形成起关键作用。PAX6突变可导致许多先天性眼部发育异常，如先天性无虹膜症，通常为常染色体显性遗传方式。目的对三个先天性无虹膜症家系成员进行PAX6基因分析，探索... 背景人类配对盒基因（PAX6）编码一个转录调节子，对眼和大脑形态的形成起关键作用。PAX6突变可导致许多先天性眼部发育异常，如先天性无虹膜症，通常为常染色体显性遗传方式。目的对三个先天性无虹膜症家系成员进行PAX6基因分析，探索这些家系发病的遗传基础。方法收集三个先天性无虹膜症家系的5例患病者和正常成员13名的外周血标本提取DNA，根据PAX6基因的序列设计4～13外显子序列，通过聚合酶链反应（PCR）扩增引物并测序，将目标序列与已发表的PAX6基因序列进行对比分析。结果三个家系中共有5例患病者，在家系A中2例患者发现一个杂合突变（c．718C〉T），导致第240位氨基酸由精氨酸突变为终止密码子（P．Arg240X），而其他正常表型者未发现此突变。家系B中的患病者和正常成员均未检测到PAX6基因的突变。家系C中1例患病者发现c．331delG（P．VallllSerfsX13）的缺失突变，此单个碱基的缺失造成了移码突变，使PAX6蛋白羧基端的299个氨基酸缺失，而此家系的其他正常表型成员未发现此突变。结论家系A和家系c先天性无虹膜症的致病与PAX6基因的突变有关。 展开更多

关键词 人类配对盒基因 先天性无虹膜 聚合酶链反应 基因突变

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目标区域捕获技术鉴定-RP家系USH2A基因的新复合杂合突变 被引量：1

16

作者 王瑛 黄辉 +5 位作者 樊宁 吴静 周晓敏 殷燕 王云 刘旭阳 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期244-247,共4页

背景RP为遗传性致盲眼病，其遗传方式和临床表型呈高度异质性，对患者的突变基因进行筛查和诊断对于进一步的基因治疗研究有重要意义。目的利用目标区域捕获技术确定中国一常染色体隐性遗传RP家系成员的临床表型及基因突变方式。方法收... 背景RP为遗传性致盲眼病，其遗传方式和临床表型呈高度异质性，对患者的突变基因进行筛查和诊断对于进一步的基因治疗研究有重要意义。目的利用目标区域捕获技术确定中国一常染色体隐性遗传RP家系成员的临床表型及基因突变方式。方法收集2013年暨南大学附属深圳眼科医院1个汉族RP家系，对该RP家系的4个成员进行眼科检查，抽取家系成员的外周血后，利用华大基因眼科芯片目标区域捕获技术对先证者进行基因突变检测，利用PCR以及Sanger测序法对RP家系中正常表型的成员进行基因突变点验证。结果该家系共3代5名成员，I1、I2、Ⅱ2和Ⅲ1均为表型正常者，Ⅱ1为先证者，自18岁出现夜盲及视力下降，呈管状视野缺损。先证者眼底检查发现视盘呈蜡黄色和视网膜骨细胞样色素沉积，荧光素血管造影可见片状遮蔽荧光和周边视网膜透见荧光。该家系遗传方式符合常染色体隐性遗传。芯片分析发现先证者USH2A基因存在由C．9958G〉T（P．Gly3320Cys）错义突变和C．11156G〉A（P．Arg3719His）错义突变组成的复合杂合突变，而其表型正常的父亲（I1）为C．9958G〉T（P．Gly3320Cys）杂合突变，表型正常的母亲（I2）为c．11156G〉A（P．Arg3719His）杂合突变，表型正常的女儿（Ⅲ1）为c．9958G〉T（P．Gly3320Cys）杂合突变。结论该RP家系可能由USH2A基因的C．9958G〉T和C．11156G〉A复合杂合突变导致。眼科芯片技术可以快速准确地筛查RP常见候选基因。 展开更多

关键词 视网膜色素变性 基因 眼科芯片 常染色体隐性遗传

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4-丁硫基-丁内酯的合成方法研究

17

作者 何金 徐克磊 +3 位作者 汪宏 杨冬华 周晓敏 成丽 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期588-592,共5页

以氢化三丁锡和丁二酰氯为原料通过还原、分子内重排得到4-Cl-丁内酯,然后与正丁硫醇在碱性条件下发生亲核取代反应得到目标化合物4-丁硫基丁内酯,收率62.4%。中间体4-Cl丁内酯和目标化合物4-丁硫基丁内酯通过氢核磁共振、碳核磁共振和... 以氢化三丁锡和丁二酰氯为原料通过还原、分子内重排得到4-Cl-丁内酯,然后与正丁硫醇在碱性条件下发生亲核取代反应得到目标化合物4-丁硫基丁内酯,收率62.4%。中间体4-Cl丁内酯和目标化合物4-丁硫基丁内酯通过氢核磁共振、碳核磁共振和质谱进行确证。 展开更多

关键词 4-丁硫基丁内酯 亲核取代反应 合成

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活体电转化技术在新生小鼠视网膜中的应用 被引量：1

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作者 肖丽容 陈大年 闫乃红 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1173-1178,共6页

活体电转化技术是在高电压的脉冲作用下,瞬态增加细胞膜的渗透性从而将外源基因高效导入细胞的方法。与病毒载体等其他方法相比,活体电转化技术具有安全、高效、快速、稳定及应用范围广等优点,近年来在很多组织和器官中得到广泛使用,包... 活体电转化技术是在高电压的脉冲作用下,瞬态增加细胞膜的渗透性从而将外源基因高效导入细胞的方法。与病毒载体等其他方法相比,活体电转化技术具有安全、高效、快速、稳定及应用范围广等优点,近年来在很多组织和器官中得到广泛使用,包括在眼科研究领域。文章介绍了活体电转化技术在新生小鼠视网膜中的应用,通过新生小鼠视网膜下注射的方法,经几次高电压的脉冲,将高浓度的绿色荧光蛋白表达质粒导入新生小鼠视网膜细胞内。通过冰冻切片观察绿色荧光蛋白在视网膜中的表达。结果表明绿色荧光蛋白在视网膜外核层高表达,证实了活体电转化技术可以将外源基因高效、快捷的导入视网膜,从而为研究视网膜发育及功能提供一种有效的手段。 展开更多

关键词 活体电转化 新生小鼠 视网膜 冰冻切片

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