黑色素及谷胱甘肽通过抑制NF-κB途径的激活可有效抑制H_5N_1禽流感病毒感染 被引量：8

1

作者 张晓玲 杨桥 +3 位作者 代俊 顾潮江 许振辉 焦炳华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期364-372,共9页

我国是H5N1高致病性禽流感频发区.为筛选天然药物用于H5N1禽流感的防治并研究其抗病毒感染的作用机制,本研究选取黑色素及谷胱甘肽(GSH)为候选药物,通过Hoechst33258荧光染色,观察了禽流感病毒(AIV)感染后的细胞形态变化;细胞凋亡流式... 我国是H5N1高致病性禽流感频发区.为筛选天然药物用于H5N1禽流感的防治并研究其抗病毒感染的作用机制,本研究选取黑色素及谷胱甘肽(GSH)为候选药物,通过Hoechst33258荧光染色,观察了禽流感病毒(AIV)感染后的细胞形态变化;细胞凋亡流式细胞术定量分析表明,H5N1AIV感染可诱导宿主狗肾上皮细胞(MDCK)凋亡,而黑色素及GSH对其具有显著抑制作用(P<0.01);当20μg/ml黑色素及10mmol/LGSH共同作用时,抑制率高达89%(P<0.01);采用MTT法检测,黑色素及GSH可增强AIV感染后的宿主细胞存活率;病毒血凝素(Ha)基因的RT-PCR检测结果表明,黑色素及GSH可显著降低AIV在宿主细胞内的增殖(P<0.01);一氧化氮(NO)毛细管电泳(CE)激光诱导荧光检测显示,黑色素及GSH均可显著降低病毒感染诱导宿主细胞内的NO释放量(P<0.05);RT-PCR技术结合ELISA方法,分别分析了病毒感染后宿主细胞的诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、环氧化酶(cyclooxygenase-2,COX-2)及核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在mRNA和蛋白水平表达的差异.结果表明,黑色素及GSH可抑制病毒感染诱导的iNOS与COX-2的基因及蛋白的表达(P<0.05),并进而抑制NF-κB途径的激活(P<0.01),从而可有效抑制HNAIV感染. 展开更多

关键词 H5N1 禽流感病毒 病毒感染 黑色素 谷胱甘肽 NF—κB途径

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VP4基因鉴定非EV71非CoxA16手足口病病原体漏检的研究 被引量：4

2

作者 木朝宇 庄晓亮 +2 位作者 赵俊 陈敬贤 王明丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第9期1198-1202,共5页

目的探讨肠道病毒VP4基因通用引物PCR诊断非肠道病毒71型(EV71)非柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)手足口病(HFMD)病毒方案的准确性。方法通过肠道病毒VP4基因通用引物PCR鉴定阜阳地区非EV71非CoxA16HFMD病毒时,显示两例病毒分离株为Sabin-1(... 目的探讨肠道病毒VP4基因通用引物PCR诊断非肠道病毒71型(EV71)非柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)手足口病(HFMD)病毒方案的准确性。方法通过肠道病毒VP4基因通用引物PCR鉴定阜阳地区非EV71非CoxA16HFMD病毒时,显示两例病毒分离株为Sabin-1(命名为Fy-01和Fy-02株)。分别采用引物EVP4/Q8和VP1特异性引物对Fy-01和Fy-02分离株进行鉴定。结果采用VP4基因PCR扩增产物测序证实,两例病毒分离株为Sabin-1,而采用EVP4/Q8引物PCR扩增Fy-01分离株却存在异常的扩增条带,PCR扩增产物测序结果为柯萨奇病毒A组10型(CoxA10);将VP4基因PCR产物制备成克隆载体挑选多个单克隆测序结果显示,Fy-01分离株既存在Sabin-1 VP4基因,又存在CoxA10 VP4基因,证实为两种毒株混合感染。结论临床诊断为非EV71非CoxA16 HFMD的病例,如病原学诊断仅采用VP4基因PCR产物测序,特别是针对多种肠道病毒混合感染引起的HFMD,其结果并不完全可靠。 展开更多

关键词 手足口病 VP4基因 Sabin-1 CoxA1O

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HCMV体外感染小鼠胚胎成纤维细胞的研究 被引量：1

3

作者 吉阳 任鹏 +1 位作者 陈敬贤 王明丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第3期215-219,共5页

目的观察人巨细胞病毒(HCMV)AD169株体外感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的生物学特征,为探讨HCMVAD169株能跨种属感染MEF提供依据。方法将100TCID50HCMV AD169株病毒悬液接种至MEF和人胚胎成纤维细胞(HF)上,逐日观察HCMV特征性细胞病变效... 目的观察人巨细胞病毒(HCMV)AD169株体外感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的生物学特征,为探讨HCMVAD169株能跨种属感染MEF提供依据。方法将100TCID50HCMV AD169株病毒悬液接种至MEF和人胚胎成纤维细胞(HF)上,逐日观察HCMV特征性细胞病变效应(CPE);分别收集感染后1、3、5 d的MEF和HF培养物,提取细胞DNA,采用实时荧光定量PCR检测HCMV立即早期基因(IE)拷贝数变化;分别采用HCMV立即早期基因(IE-1)、主要衣壳蛋白(MCP)和包膜糖蛋白(gB)单克隆抗体进行间接免疫荧光实验检测感染后的1、3、5 d MEF和HF中相应病毒蛋白的表达。结果观察到HCMV AD169株接种MEF出现病毒所致CPE,与HF出现的CPE相似;实时荧光定量PCR检测HCMV IE基因拷贝数发现,MEF在HCMVAD169感染后的1、3、5 d,病毒基因拷贝数呈增长趋势,但均低于相同时间点的HF中病毒拷贝数;间接免疫荧光检测HCMV感染MEF和HF后1、3、5 d HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达情况时发现,在MEF上HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达随时间延长呈增强趋势。结论 HCMV AD169株可以体外感染MEF,并在其中复制增殖。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 小鼠胚胎成纤维细胞 跨种属感染

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人巨细胞病毒pUL76蛋白非保守C端与蛋白聚集体形成的研究

4

作者 张文昌 陈敬贤 王明丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第4期411-415,共5页

目的通过分别构建人巨细胞病毒(HCMV)UL76基因编码蛋白的全长以及保守N端和非保守C端的真核表达质粒,探讨p UL76引起核内蛋白聚集体形成的决定序列。方法根据Gen Bank中HCMV AD169(FJ527563.1)株基因序列设计分别用于扩增p UL76全长以... 目的通过分别构建人巨细胞病毒(HCMV)UL76基因编码蛋白的全长以及保守N端和非保守C端的真核表达质粒,探讨p UL76引起核内蛋白聚集体形成的决定序列。方法根据Gen Bank中HCMV AD169(FJ527563.1)株基因序列设计分别用于扩增p UL76全长以及保守N端和非保守C端的引物,将3段序列分别构建至增强型绿色荧光蛋白表达载体(p EGFP-N1)中,经双酶切和测序验证重组质粒的正确构建。空载体和3种重组质粒分别瞬时转染人胚肺成纤维细胞(HELF)和人肝癌细胞(Hep G-2),经逆转录(RTPCR)和Western blot法验证各段基因的正确表达,在荧光显微镜下观察转染不同重组质粒后细胞核内蛋白聚集体形成的状态。结果 p EGFP-N1空载体和p UL76保守N端均不能引起核内蛋白聚集体的形成,而p UL76及其非保守C端均能够引起核内蛋白聚集体的形成。结论 p UL76非保守C端是其引起核内蛋白聚集体形成所必须的。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 UL76 蛋白聚集体

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水痘-带状疱疹病毒疫苗的评价与研究进展 被引量：16

5

作者 伊兴旭 甘霖 +1 位作者 陈敬贤 王明丽 《微生物与感染》 2014年第4期256-260,共5页

水痘-带状疱疹病毒(VZV)属疱疹病毒α亚科,即人类疱疹病毒3型,为双链DNA病毒。原发感染可引起具有高度传染性的全球流行性疾病——水痘;潜伏病毒的再激活感染可引发典型的疼痛性皮肤病——带状疱疹及不典型的内脏器官感染。日本和美国... 水痘-带状疱疹病毒(VZV)属疱疹病毒α亚科,即人类疱疹病毒3型,为双链DNA病毒。原发感染可引起具有高度传染性的全球流行性疾病——水痘;潜伏病毒的再激活感染可引发典型的疼痛性皮肤病——带状疱疹及不典型的内脏器官感染。日本和美国分别自1987年和1995年开始实行给全体儿童预防接种水痘减毒活疫苗(vOka)后,两国儿童的水痘发病率和病死率显著降低。但VZV疫苗的不良反应,包括二次传播和突破感染等时有发生,因此有必要研发更为有效、安全的新型疫苗。本文就VZV相关疫苗的有效性、安全性及其新型疫苗的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 水痘-带状疱疹病毒 疫苗 有效性 安全性

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疫苗株病毒引起1例成人水痘的病原分离与鉴定 被引量：4

6

作者 甘霖 王明丽 陈敬贤 《微生物与感染》 2010年第1期40-43,共4页

本文旨在探讨1例由疫苗株病毒引起成人水痘的病例,以提高对水痘疫苗二次传播的认识。从1名23岁女性水痘患者皮肤水疱中采集水疱液,接种至人胚胎成纤维细胞,3d后观察到细胞发生病变效应。用水痘-带状疱疹病毒gE`糖蛋白单克隆抗体间接免... 本文旨在探讨1例由疫苗株病毒引起成人水痘的病例,以提高对水痘疫苗二次传播的认识。从1名23岁女性水痘患者皮肤水疱中采集水疱液,接种至人胚胎成纤维细胞,3d后观察到细胞发生病变效应。用水痘-带状疱疹病毒gE`糖蛋白单克隆抗体间接免疫荧光法鉴定,结果阳性。测序分析显示,分离到的毒株其疫苗相关的单核苷酸多态性位点与Oka疫苗株一致,为疫苗株病毒。回顾性调查显示,患者没有水痘史和疫苗接种史,病毒可能来自1名与患者直接接触的接种疫苗后发生带状疱疹的儿童。 展开更多

关键词 水痘-带状疱疹病毒 水痘 vOka疫苗 传播

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新生儿咽拭子检测在诊断单纯疱疹病毒先天性感染中的意义 被引量：4

7

作者 任鹏 姚娟 +8 位作者 金艳 葛俊 李法锦 汪晓婷 吉阳 赵蕾 江龙凤 陈敬贤 王明丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第7期813-816,共4页

目的以巢式PCR检测新生儿脐带血中单纯疱疹病毒1型(HSV-1)gD基因和HSV-2 gG基因并用测序确认的结果为参比,分析利用新生儿咽拭子检测相应病毒基因在诊断新生儿HSV先天性感染中的意义。方法采集顺产新生儿抗凝脐带血35份,同时采集咽拭子3... 目的以巢式PCR检测新生儿脐带血中单纯疱疹病毒1型(HSV-1)gD基因和HSV-2 gG基因并用测序确认的结果为参比,分析利用新生儿咽拭子检测相应病毒基因在诊断新生儿HSV先天性感染中的意义。方法采集顺产新生儿抗凝脐带血35份,同时采集咽拭子35份。采用检测HSV-1 gD基因和HSV-2 gG基因的PCR法检测新生儿脐带血和咽拭子标本DNA,阳性扩增结果确认后,比较咽拭子检测与脐带血检测结果,以及咽拭子检测特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值4个指标,分析新生儿咽拭子检测能否为诊断HSV先天性感染提供依据。结果 35份脐带血中HSV-1阳性率28.6%(10/35),咽拭子HSV-1阳性率25.7%(9/35),两者差异无统计学意义。脐带血中HSV-2阳性率22.8%(8/35),咽拭子HSV-2阳性率28.6%(10/35),两者差异无统计学意义。HSV-1两种标本检测一致率68.6%;HSV-2两种标本一致率77.1%。咽拭子HSV-1、HSV-2检测灵敏度分别为40.0%和62.5%,特异性分别为80.0%和84.6%,阳性预测值分别为44.4%和50.0%,阴性预测值分别为76.9%和88.0%。结论以新生儿脐带血单核细胞中HSV-1 gD基因和HSV-2 gG基因检测结果为参比,新生儿咽拭子检测与脐带血检测具有较高的一致性,表明咽拭子检测用于新生儿HSV先天性感染诊断具有重要的临床应用价值。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒 脐带血 咽拭子 先天性感染

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应用小瓶离心培养法分离检测2009年1—6月广州市成人流感样病例相关病毒 被引量：3

8

作者 杨子峰 王玉涛 +9 位作者 秦笙 罗翌 关文达 李际强 占扬清 张雪 周荣 莫自耀 陈敬贤 陈荣昌 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期132-137,共6页

目的应用高通量的小瓶离心法快速分离检测广州市成人流感样病例相关病毒，分析广州地区患有ILI的成人呼吸道病毒感染情况，评价其在临床实验室开展快速病毒培养的意义。方法采集2009年1—6月广州市成人流感样病例患者标本652份，应用小... 目的应用高通量的小瓶离心法快速分离检测广州市成人流感样病例相关病毒，分析广州地区患有ILI的成人呼吸道病毒感染情况，评价其在临床实验室开展快速病毒培养的意义。方法采集2009年1—6月广州市成人流感样病例患者标本652份，应用小瓶离心法（包括MDCK、HEp-2、LLC—MK2和MRC-54种细胞），离心接种后，通过观察CPE、血凝（HA）、血吸附（HAD）及直接免疫荧光法（IF）等方法进行病毒分离鉴定。结果652份成人流感样病例标本中共检出阳性161份，5种病毒病原体，病毒培养阳性率为24．69％，其中甲型流感病毒62株（62／161，38．51％），乙型流感病毒88株（88／161，54．65％），副流感病毒8株（8／161，4．96％），腺病毒2株（2／161，1．24％），呼吸道合胞病毒1株（1／161，0．62％k用小瓶离心培养法发出各种病毒培养报告的平均时间分别为：流感病毒2d、腺病毒3d、副流感病毒3d。结论（1）离心培养法具有快速、灵敏、高通量的特点，对临床实验室诊断病毒具有应用推广价值。（2）在分离的ILI病原体中，流感病毒占主导，乙型流感病毒为优势毒株，白2009年1月延续至6月，并呈逐步增多的态势，出现夏季高峰。 展开更多

关键词 正黏病毒科 病毒培养 呼吸道感染

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新生儿人巨细胞病毒先天性感染危险因素筛查 被引量：3

9

作者 汪晓婷 陈灵芝 +1 位作者 陈敬贤 王明丽 《中华疾病控制杂志》 CAS 北大核心 2012年第6期483-485,共3页

目的通过检测新生儿脐带血中人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)IgG抗体和gB基因,了解新生儿HCMV感染情况,并结合临床资料分析产妇年龄、Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV-Ⅰ)IgG抗体阳性、孕周与HCMV先天性感染的相... 目的通过检测新生儿脐带血中人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)IgG抗体和gB基因,了解新生儿HCMV感染情况,并结合临床资料分析产妇年龄、Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV-Ⅰ)IgG抗体阳性、孕周与HCMV先天性感染的相关性。方法收集2010年11月～2011年6月期间,某市妇幼保健院就诊的健康产妇所娩新生儿脐带血,共178例。采用ELISA法检测脐带血血清是否存在HCMV IgG和HSV-ⅠIgG抗体,巢式PCR检测HCMV gB基因。结果产妇HCMV IgG阳性率为99.44%(177/178);产妇HSV-ⅠIgG阳性率为83.71%(149/178);新生儿脐血HCMV gB阳性率为32.02%(57/178);产妇年龄和HSV-ⅠIgG抗体阳性不是发生HCMV先天性传播的危险因素。结论针对早产和过期产儿,应该加强其HCMV先天性感染的早期诊断。 展开更多

关键词 婴儿 新生 巨细胞病毒 危险因素

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脐带血血浆在人巨细胞病毒垂直传播中的作用 被引量：1

10

作者 葛俊 俞海洋 +9 位作者 金艳 沈国泉 任鹏 李法锦 汪晓婷 吉阳 赵蕾 江龙凤 陈敬贤 王明丽 《中华疾病控制杂志》 CAS 北大核心 2012年第6期479-482,共4页

目的了解合肥地区正常顺产新生儿先天性人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染情况,并探讨脐带血血浆在HCMV垂直传播中的意义。方法自合肥市妇幼保健院采集51份新生儿脐带血标本,将处理后得到的脐带血白细胞及血浆分别提取DNA后... 目的了解合肥地区正常顺产新生儿先天性人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染情况,并探讨脐带血血浆在HCMV垂直传播中的意义。方法自合肥市妇幼保健院采集51份新生儿脐带血标本,将处理后得到的脐带血白细胞及血浆分别提取DNA后,进行HCMV UL55基因的巢式PCR检测,并随机抽取其中18份脐带血白细胞进行HCMV pp65抗原血症检测。结果 51份新生儿脐带血白细胞HCMV UL55 DNA阳性数为16份,阳性率为31.4%;同时进行检测的51份脐带血血浆HCMV UL55 DNA阳性数为17份,阳性率为33.3%,新生儿脐带血白细胞与血浆的标本阳性率差异无统计学意义(2=0.00,P=1.000)。以新生儿脐带血白细胞HCMVUL55 DNA巢式PCR结果为标准,利用血浆巢式PCR检测的灵敏度为75.0%(12/16),特异度为85.7%(30/35),阳性预测值为70.6%(12/17),阴性预测值为88.2%(30/34)。随机抽取其中18份新生儿脐带血白细胞进行pp65抗原血症检测,阳性标本数为6份,阳性率为33.3%;与此18份血浆DNA巢式PCR结果相比较,两者差异无统计学意义(2=0.00,P=1.000)。结论脐带血血浆在HCMV垂直传播中起携带并传播病毒的作用。 展开更多

关键词 婴儿 新生 巨细胞病毒 疾病传播 垂直

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老年小鼠先天性潜伏感染人巨细胞病毒致大脑皮质细胞凋亡的研究

11

作者 赵俊 王明丽 陈敬贤 《中华老年医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期209-211,共3页

目的 观察先天性人巨细胞病毒（HCMV）潜伏感染至老年，对小鼠大脑皮质细胞凋亡的影响。方法 选择鼠龄为24个月HCMV先天性感染中枢神经系统模型小鼠。分为3组，每组6只，分别为：HCMV先天性潜伏感染老年鼠组（潜伏感染组）、HCMV先天性... 目的 观察先天性人巨细胞病毒（HCMV）潜伏感染至老年，对小鼠大脑皮质细胞凋亡的影响。方法 选择鼠龄为24个月HCMV先天性感染中枢神经系统模型小鼠。分为3组，每组6只，分别为：HCMV先天性潜伏感染老年鼠组（潜伏感染组）、HCMV先天性潜伏再激活感染老年鼠组（潜伏再激活感染组）和健康对照老年鼠组（健康对照组）。采用透射电镜、TUNEL法和流式细胞仪检测分析各组小鼠大脑皮质细胞凋亡情况。结果 电镜检测发现，同健康对照组比较，潜伏感染组和潜伏再激活感染组部分神经元细胞核染色体固缩、核物质碎片化、凋亡小体形成等特征性凋亡改变。TUNEL法和流式细胞仪检测发现健康对照组凋亡细胞最少，潜伏感染组凋亡细胞比率较健康对照组升高，而潜伏再激活感染组凋亡细胞最多；t检验潜伏感染组、潜伏再激活感染组与健康对照组凋亡率比较，差异均有统计学意义（均为P〈0．01）。结论 先天性感染HCMV后长期潜伏在小鼠的大脑皮质，至老年后可诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 巨细胞病毒 病毒潜伏期 细胞凋亡

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MCMV感染同种异型皮肤移植小鼠结肠炎模型的建立

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作者 张玮 甘霖 +2 位作者 黎锐平 陈敬贤 王明丽 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-10,共10页

利用小鼠巨细胞病毒(Murine cytomegalovirus,MCMV)感染同种异型皮肤移植小鼠,建立MCMV感染结肠炎症模型,从而为研究人类肠道疾病提供可靠的动物模型。采用鼻腔接种的方式感染同种异型皮肤移植的小鼠。①供体:C57BL/6雌鼠,18只;受体:BAL... 利用小鼠巨细胞病毒(Murine cytomegalovirus,MCMV)感染同种异型皮肤移植小鼠,建立MCMV感染结肠炎症模型,从而为研究人类肠道疾病提供可靠的动物模型。采用鼻腔接种的方式感染同种异型皮肤移植的小鼠。①供体:C57BL/6雌鼠,18只;受体:BALB/c雌鼠,72只,鼠龄4～6周,体重14～20g/只;将C57BL/6小鼠的背部皮肤移植到BALB/c小鼠背部的移植床上,术后给BALB/c小鼠腹腔注射环孢素连续2周(12mg/kg.d)。②将移植后小鼠随机分组,每组24只,按接种病毒接种剂量分为104PFU组和105PFU组,同时设立阴性对照组,即鼻腔接种细胞悬液(1×106/mL)。每日观察动物排便情况及体重等总体情况变化;分别于病毒接种后第5、9、14和第21d取得小鼠结肠组织,通过组织病理学检测、原位杂交g、B RT-PCR、pp65免疫组化以及透射电镜的方法,观察检测小鼠结肠组织中MCMV与其组织病理变化之间的关联性。结果:在105PFU组中,小鼠出现厌食、嗜睡、活动能力明显下降,且发现该组小鼠的体重下降。在本研究中我们检验感染后第14d小鼠的结肠组织,发现感染组小鼠的近端结肠组织中粘膜层均变薄,同时其结构也被破坏;感染组小鼠的远端结肠组织中均出现淋巴样滤泡和粘膜层结构异常,其中105PFU组小鼠的结肠粘膜层的破坏得更严重;pp65免疫组化检验结果为MCMV蛋白阳性;原位杂交结果显示结肠组织中MCMV IE1基因阳性,MCMV gB基因RT PCR检测结果为阳性;透射电镜观察可见疱疹样病毒颗粒。而阴性对照组上述检测指标均为阴性。结果表明,在同种异型皮肤移植后小鼠鼻腔接种MC-MV,小鼠结肠发生了类似于人类结肠炎的病理变化。该结肠炎动物模型的建立将为进一步研究HCMV感染结肠的发病机理以及药物干预建立一个极为重要的平台。 展开更多

关键词 小鼠巨细胞病毒 结肠炎症 动物模型

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中东呼吸综合征 被引量：3

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作者 陈敬贤 周妍 吴东 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1043-1044,共2页

2012年9月埃及病毒学家Zaki报告从沙特阿拉伯（沙特）一名60岁急性肺炎并发急性肾功能衰竭的男性患者中分离出一株新型冠状病毒。

关键词 中东呼吸综合征冠状病毒 流行病学

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