目的探讨BMP-2基因修饰的复层乳牙牙髓干细胞膜片的体外构建方法及基本生物学特性。方法分离培养脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHEDs),并通过转染BMP-2基因进一步提高SHEDs的成骨能力,随后以SH...目的探讨BMP-2基因修饰的复层乳牙牙髓干细胞膜片的体外构建方法及基本生物学特性。方法分离培养脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHEDs),并通过转染BMP-2基因进一步提高SHEDs的成骨能力,随后以SHEDs为种子细胞构建复层细胞膜片。利用倒置显微镜对细胞转染效率及成骨能力进行观察;通过HE染色和Masson染色对细胞膜片的结构和胶原分布进行检测;以免疫组织化学染色检测BMP-2蛋白的表达情况。结果体外分离培养了SHEDs,并证实其具有多向分化潜能。采用富含维生素C的培养基连续培养10 d左右即可获得白色膜样结构,该细胞膜片具有较好的弹性,叠加两层单层膜片继续培养24 h可构建具有良好韧性和机械性能的复层膜片。HE染色及Masson染色观察发现SHEDs膜片由多层细胞及丰富的细胞外基质组成。免疫组织化学染色示SHEDs膜片可表达BMP-2蛋白。结论BMP-2基因修饰的SHEDs体外采用富含维生素C的培养基连续培养可构建具有良好机械性能的复层细胞膜片并持续表达BMP-2蛋白,该膜片将为牙周骨缺损修复提供一种新思路。展开更多
文摘目的探讨BMP-2基因修饰的复层乳牙牙髓干细胞膜片的体外构建方法及基本生物学特性。方法分离培养脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHEDs),并通过转染BMP-2基因进一步提高SHEDs的成骨能力,随后以SHEDs为种子细胞构建复层细胞膜片。利用倒置显微镜对细胞转染效率及成骨能力进行观察;通过HE染色和Masson染色对细胞膜片的结构和胶原分布进行检测;以免疫组织化学染色检测BMP-2蛋白的表达情况。结果体外分离培养了SHEDs,并证实其具有多向分化潜能。采用富含维生素C的培养基连续培养10 d左右即可获得白色膜样结构,该细胞膜片具有较好的弹性,叠加两层单层膜片继续培养24 h可构建具有良好韧性和机械性能的复层膜片。HE染色及Masson染色观察发现SHEDs膜片由多层细胞及丰富的细胞外基质组成。免疫组织化学染色示SHEDs膜片可表达BMP-2蛋白。结论BMP-2基因修饰的SHEDs体外采用富含维生素C的培养基连续培养可构建具有良好机械性能的复层细胞膜片并持续表达BMP-2蛋白,该膜片将为牙周骨缺损修复提供一种新思路。