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4-DAMP抑制A375黑色素瘤增殖作用及机制研究
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作者 靳浩槟 魏子湘 +5 位作者 于佳岐 高强 杨希蕊 王丽娟 郭悦平 刘艳 《海南医学院学报》 CAS 2020年第4期241-250,共10页
目的:研究毒蕈碱型M3受体拮抗剂(4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide,4-DAMP)对黑色素瘤增殖的抑制作用,从而探讨M3受体拮抗剂在抗肿瘤领域的发展前景及意义。方法:利用MTT [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2... 目的:研究毒蕈碱型M3受体拮抗剂(4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide,4-DAMP)对黑色素瘤增殖的抑制作用,从而探讨M3受体拮抗剂在抗肿瘤领域的发展前景及意义。方法:利用MTT [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide]检测肿瘤细胞活力;EdU荧光染色观察细胞增殖情况。成年雄性BALB/c裸小鼠分为对照组、5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil, 5-Fu)组(20 mg·kg-1·d-1)及4-DAMP组(2 mg·kg-1·d-1),建立荷瘤模型。连续给药21 d后处死小鼠,计算抑制率、脾指数。实时定量PCR (quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测A375细胞系中M3R、MIA(melanoma inhibitory activity)、SP-1 (transcription factor Sp1)、Lnc-SPRY4-IT1(SPRY4 Intronic Transcript 1)的基因表达。Western Blot检测ERK1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2)蛋白含量的表达。结果:MTT及EdU均表明,4-DAMP可明显抑制A375细胞的活力(P<0.01)。动物实验结果表明,5-Fu组与4-DAMP组肿瘤体积及质量均明显减小(P<0.05);H&E染色可见细胞间隙变大,结缔组织纤维增多。qRT-PCR结果表明,4-DAMP或转染si-M3R均可降低细胞内MIA、SP-1以及LncRNA-SPRY4-IT1的表达。Western Blot结果表明,4-DAMP或转染si-M3R后均可降低细胞内ERK1/2的表达。结论:M3受体拮抗剂4-DAMP在细胞及动物实验中均能抑制黑色素瘤增殖发挥抗肿瘤功效,降低肿瘤细胞内MIA、SP-1的mRNA和LncRNA-SPRY4-IT1的表达,同时抑制了ERK1/2的表达。 展开更多
关键词 A375细胞 黑色素瘤 4-DAMP 增殖
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