[Objective] The research aimed to design primers that are suitable for detecting H5 and H7 subtypes of avian influenza virus （AIV） ; [Method] DNAStar was used to analyze the homology of the sequences of H5 and H7 su...[Objective] The research aimed to design primers that are suitable for detecting H5 and H7 subtypes of avian influenza virus （AIV） ; [Method] DNAStar was used to analyze the homology of the sequences of H5 and H7 subtypes of AIV accessed in GenBank, and design primers（ by Primer Premier 5.0） on high homologous region of these sequences, and then amplified by RT-PCR. [Result] The multiplex RT-PCR amplification, agarose gel electrophoresis and sequencing results showed that the self-designed primers are successful for detecting AIV. [Conclusion] It is feasible to rapidly diagnose AIV through this method.展开更多
[目的]设计能用于多重RT-PCR扩增禽流感病毒H5、H7亚型基因的引物。[方法]在GenBank中搜索H5、H7亚型禽流感病毒的基因序列,并利用DNAStar分析其同源性,采用Primer Premier 5.0软件设计引物。[结果]多重RT-PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳及测...[目的]设计能用于多重RT-PCR扩增禽流感病毒H5、H7亚型基因的引物。[方法]在GenBank中搜索H5、H7亚型禽流感病毒的基因序列,并利用DNAStar分析其同源性,采用Primer Premier 5.0软件设计引物。[结果]多重RT-PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳及测序结果显示引物设计成功。[结论]该方法用于禽流感病毒的快速诊断是可行的。展开更多
将 I型牛疱疹病毒 (BHV- 1 ) LA株DNA H ind III A片段中的 Sal I- Sal I亚片段(含 TK基因 )克隆到载体质粒 p BluescriptSK中 ,再用 Bgl II和 Sac I切去 347bp,获得含 TK基因部分缺失的重组质粒 p Sd TK,然后用 H ind III和 Xba I切去...将 I型牛疱疹病毒 (BHV- 1 ) LA株DNA H ind III A片段中的 Sal I- Sal I亚片段(含 TK基因 )克隆到载体质粒 p BluescriptSK中 ,再用 Bgl II和 Sac I切去 347bp,获得含 TK基因部分缺失的重组质粒 p Sd TK,然后用 H ind III和 Xba I切去其中的多克隆位点 ;将来源于 p CR3- Uni的 CMV启动子、多克隆位点和 BGH poly A信号插入 p Sd TK的Xho I位点上 ,构建了 BHV- 1通用转移载体p Sd TK- CMB,此载体可用来表达牛其它病毒的抗原基因 。展开更多
利用 PCR方法 ,从阴离子交换蛋白 1(AE1)全长 c DNA中扩增出约 35 0 bp c末端 c DNA片段。测序后将其克隆至 p GADT7载体上。用醋酸锂法将构建好的 p GADT7- AE1- c-末端转染酵母菌 AH10 9,观察其在选择性培养基上的表达情况。结果表明 ...利用 PCR方法 ,从阴离子交换蛋白 1(AE1)全长 c DNA中扩增出约 35 0 bp c末端 c DNA片段。测序后将其克隆至 p GADT7载体上。用醋酸锂法将构建好的 p GADT7- AE1- c-末端转染酵母菌 AH10 9,观察其在选择性培养基上的表达情况。结果表明 ,获得了 35 0 bp AE1c-末端 c DNA,p GADT7- AE1- c-末端对酵母无毒性 ,不能激活检测基因 。展开更多
基金Supported by Important Project of Jinlin Provincial Science and Technology Department(20065020)~~
文摘[Objective] The research aimed to design primers that are suitable for detecting H5 and H7 subtypes of avian influenza virus （AIV） ; [Method] DNAStar was used to analyze the homology of the sequences of H5 and H7 subtypes of AIV accessed in GenBank, and design primers（ by Primer Premier 5.0） on high homologous region of these sequences, and then amplified by RT-PCR. [Result] The multiplex RT-PCR amplification, agarose gel electrophoresis and sequencing results showed that the self-designed primers are successful for detecting AIV. [Conclusion] It is feasible to rapidly diagnose AIV through this method.
文摘[目的]设计能用于多重RT-PCR扩增禽流感病毒H5、H7亚型基因的引物。[方法]在GenBank中搜索H5、H7亚型禽流感病毒的基因序列,并利用DNAStar分析其同源性,采用Primer Premier 5.0软件设计引物。[结果]多重RT-PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳及测序结果显示引物设计成功。[结论]该方法用于禽流感病毒的快速诊断是可行的。
文摘将 I型牛疱疹病毒 (BHV- 1 ) LA株DNA H ind III A片段中的 Sal I- Sal I亚片段(含 TK基因 )克隆到载体质粒 p BluescriptSK中 ,再用 Bgl II和 Sac I切去 347bp,获得含 TK基因部分缺失的重组质粒 p Sd TK,然后用 H ind III和 Xba I切去其中的多克隆位点 ;将来源于 p CR3- Uni的 CMV启动子、多克隆位点和 BGH poly A信号插入 p Sd TK的Xho I位点上 ,构建了 BHV- 1通用转移载体p Sd TK- CMB,此载体可用来表达牛其它病毒的抗原基因 。
文摘利用 PCR方法 ,从阴离子交换蛋白 1(AE1)全长 c DNA中扩增出约 35 0 bp c末端 c DNA片段。测序后将其克隆至 p GADT7载体上。用醋酸锂法将构建好的 p GADT7- AE1- c-末端转染酵母菌 AH10 9,观察其在选择性培养基上的表达情况。结果表明 ,获得了 35 0 bp AE1c-末端 c DNA,p GADT7- AE1- c-末端对酵母无毒性 ,不能激活检测基因 。
