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大鼠β防御素2基因慢病毒载体的构建及功能检测 被引量：1
1
作者 雷撼 方路 何翔 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期232-234,共3页
目的 构建大鼠β防御素2（rBD2）基因慢病毒表达载体,并转染培养细胞检测其表达,为rBD2研究及大鼠体内实验奠定基础.方法 提取大鼠上皮细胞总RNA,PCR扩增获得rBD2基因,双酶切PCR产物和慢病毒载体Lentivirus[含H1启动子和绿色荧光蛋白（... 目的 构建大鼠β防御素2（rBD2）基因慢病毒表达载体,并转染培养细胞检测其表达,为rBD2研究及大鼠体内实验奠定基础.方法 提取大鼠上皮细胞总RNA,PCR扩增获得rBD2基因,双酶切PCR产物和慢病毒载体Lentivirus[含H1启动子和绿色荧光蛋白（GFP）],连接构成rBD2基因慢病毒表达载体LV-rBD2,行测序鉴定.用慢病毒包装系统对LV-rBD2进行慢病毒颗粒包装并梯度稀释法测定病毒滴度,病毒液感染培养细胞,RT-PCR和Western Blot检测rBD2表达.结果 凝胶电泳和测序结果表明rBD2基因克隆到慢病毒载体中,序列正确.完成慢病毒颗粒包装,调整病毒滴度至1×105ifu/μl.RT-PCR和Western-Blot显示rBD2基因获得表达.结论 rBD2基因慢病毒表达载体LV-rBD2被成功构建,能转染细胞并获得有效表达. 展开更多
关键词 基因转染技术 表达的序列标记 逆转录聚合酶链反应 印迹法 蛋白质 防御素类
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大鼠β防御素2基因RNAi慢病毒载体的构建及效应测定 被引量：1
2
作者 雷撼 方路 +1 位作者 汪蜀 何翔 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2010年第5期453-456,共4页
目的 构建大鼠β防御素2（rBD2）基因RNAi慢病毒重组载体,转染培养细胞,检测其沉默效应,筛选出最佳的RNAi慢病毒载体.方法 序列软件设计3条针对rBD2基因CDS区的siRNA序列,合成单链后退火形成双链DNA,分别与酶切处理的慢病毒载体lentivi... 目的 构建大鼠β防御素2（rBD2）基因RNAi慢病毒重组载体,转染培养细胞,检测其沉默效应,筛选出最佳的RNAi慢病毒载体.方法 序列软件设计3条针对rBD2基因CDS区的siRNA序列,合成单链后退火形成双链DNA,分别与酶切处理的慢病毒载体lentivirus连接构成3个RNAi慢病毒重组载体,再转化细菌,测序鉴定.脂质体法转染细胞,荧光实时定量PCR（RT-PCR）及Western免疫印迹测rBD-2 mRNA及蛋白表达,筛选沉默效果最佳的为LV-shrBD2载体.用慢病毒包装系统对LV-shrBD2进行慢病毒颗粒包装并梯度稀释法测定病毒滴度.结果 凝胶电泳显示3个RNAi慢病毒重组载体的PCR产物为316 bp,测序结果表明序列正确.转染细胞后RT-PCR及Western免疫印迹检测,siRNA序列1构建的重组载体mRNA抑制率达82%,干扰效率最高,为所需的rBD2基因RNAi慢病毒载体LV-shrBD2.包装慢病毒颗粒并调整病毒滴度至1×105ifu/μl.结论 成功构建并筛选出沉默效应最佳的rBD2基因RNAi慢病毒表达载体LV-sh1rBD2,为进一步开展rBD2研究提供了依据. 展开更多
关键词 β防御素2 转染 慢病毒属 RNA干扰 沉默效应
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罗红霉素氨溴索治疗下呼吸道细菌性感染疗效和安全性 被引量：2
3
作者 佘君 白春学 +11 位作者 焦深山 刘锦 郭忠良 刘冬明 高俊珍 卢慧宇 杨青茹 李静丽 毛毅敏 杨红忠 聂秀红 黄天霞 《国际呼吸杂志》 2021年第20期1566-1572,共7页
目的评价罗红霉素氨溴索片治疗急性支气管炎和慢性支气管炎急性发作的疗效和安全性。方法本研究是来自在中国20家医院的一项多中心前瞻性研究。临床试验从2017年10月30日至2019年共招募591例支气管炎患者,根据症状分为急性支气管炎组550... 目的评价罗红霉素氨溴索片治疗急性支气管炎和慢性支气管炎急性发作的疗效和安全性。方法本研究是来自在中国20家医院的一项多中心前瞻性研究。临床试验从2017年10月30日至2019年共招募591例支气管炎患者,根据症状分为急性支气管炎组550例,慢性支气管炎急性发作组41例,所有患者均口服罗红霉素溴索150 mg,疗程为5~10 d。疗效终点是药物的抗菌疗效、细菌学清除率、祛痰疗效。安全性终点为研究期间与研究药物相关的不良事件。结果急性支气管炎组无论是抗菌疗效(90.2%比75.6%),还是祛痰疗效(93.8%比63.4%)都优于慢性支气管炎急性发作组(P<0.05)。9.0%(53/591)的患者发生与研究药物相关的不良事件。结论罗红霉素氨溴索片治疗急性支气管炎的综合疗效优于慢性支气管炎急性发作,且安全性良好。 展开更多
关键词 支气管炎 罗红霉素 氨溴索 治疗结果
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