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猪肾脏异种移植的研究进展 被引量：7
1
作者 于佳庆 方一晽 +2 位作者 方铭慧 安培培 胡正 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期788-795,共8页
猪肾脏异种移植是解决临床供体器官短缺的潜在可行方法,但是猪肾脏异种移植的临床应用面临诸多挑战,包括异种移植免疫排斥、凝血/补体调节功能异常、肾脏生理兼容性与生长速度差异和跨种属病毒感染风险等。近年来,基因编辑技术的进步提... 猪肾脏异种移植是解决临床供体器官短缺的潜在可行方法,但是猪肾脏异种移植的临床应用面临诸多挑战,包括异种移植免疫排斥、凝血/补体调节功能异常、肾脏生理兼容性与生长速度差异和跨种属病毒感染风险等。近年来,基因编辑技术的进步提高了制备多基因编辑猪的效率,促进了异种移植的发展。敲除α-gal的基因和导入人凝血/补体调节蛋白等基因可使猪肾到非人灵长类动物体内异种移植存活时间明显延长。包括CD154和CD40信号阻断的免疫抑制方案的应用对异种肾脏移植效果十分关键;而SMPDL3b与抗CD20利妥昔单抗的应用有助于缓解猪肾到狒狒移植的蛋白尿症状。抗生素、供体筛选和基因敲除技术相结合亦有望规避异种肾脏移植中的感染风险。在基因编辑猪的构建方面仍然有未知靶点,异种肾脏生理功能变化的机制仍需探讨。现对近年来猪肾脏异种移植相关研究进展进行归纳,展望异种肾脏移植的发展趋势,为异种肾脏移植的深入研究提供参考。 展开更多
关键词 异种移植 肾移植 免疫排斥 凝血调节 基因编辑 猪
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Fah^(-/-)Rag2^(-/-)IL2Rg^(-/-)小鼠肝脏原位异种重建模型的建立及其评价
2
作者 张蒙 周琪 胡正 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1358-1365,共8页
目的:构建猪-小鼠肝细胞嵌合模型,探讨猪肝细胞在无T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)介导排斥条件下的移植及再生的相关条件,评估猪肝细胞在异种受体中的定居、增殖和功能因子分泌情况,为提高猪源化小鼠模型中猪肝细胞的重... 目的:构建猪-小鼠肝细胞嵌合模型,探讨猪肝细胞在无T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)介导排斥条件下的移植及再生的相关条件,评估猪肝细胞在异种受体中的定居、增殖和功能因子分泌情况,为提高猪源化小鼠模型中猪肝细胞的重建效率提供依据。方法:采用脾脏内注射法将猪肝细胞移植至Fah^(-/-)Rag2^(-/-)IL2Rg^(-/-)(FRG)小鼠体内,构建移植模型。将16只FRG小鼠随机分为对照组、空白对照组、实验组和绿色荧光蛋白(GFP)基因实验组,每组4只。空白对照组小鼠停止给予2-(2-硝基-4-三氟甲基苯甲酰基)-1,4-环己二酮(NTBC),监测体质量;对照组4只小鼠注射猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d;实验组小鼠注射猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d;GFP基因实验组小鼠注射携带GFP基因猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d。观察各组小鼠体质量、生存情况。检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,流式细胞术检测各组小鼠外周血中CD19+、CD3+和NK1.1+细胞表达情况,ELISA法检测各组小鼠血清中猪白蛋白表达水平,免疫组织化学法检测各组小鼠猪肝细胞再生效率。结果:与剪碎后再以胶原酶消化的方式比较,两步灌注法消化过程更温和、对细胞损伤更小,细胞活性可以达到92%。停止给予NTBC后,对照组小鼠体质量进行性降低,生命活力逐渐降低。连续停药第28天小鼠开始出现死亡现象。小鼠肝组织中出现肝细胞肿大、细胞浆疏松透亮和细胞核溶解等不可逆细胞损伤。空白对照组小鼠停药后血清中ALT水平逐渐升高。对照组停药小鼠重新给予NTBC后,体质量逐渐恢复至正常水平。流式细胞术,停止给予NTBC后,小鼠外周血中CD19+、CD3+和NK1.1 展开更多
关键词 肝细胞异种移植 Fah 肝细胞 猪-小鼠肝细胞嵌合模型 免疫缺陷小鼠
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基于CRISPR/Cas9技术构建LDLR基因敲除的免疫缺陷小鼠模型及其表型分析
3
作者 王兆卫 吕亚楠 +1 位作者 胡正 杨永广 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期271-276,共6页
目的:基于CRISPR/Cas9技术构建低密度脂蛋白受体(LDLR)基因敲除的免疫缺陷小鼠模型,并对血液胆固醇水平进行分析评价,为构建具有高脂血症的免疫系统人源化小鼠模型提供新方法。方法:基于CRISPR/Cas9技术,将有效识别LDLR基因外显子2和18... 目的:基于CRISPR/Cas9技术构建低密度脂蛋白受体(LDLR)基因敲除的免疫缺陷小鼠模型,并对血液胆固醇水平进行分析评价,为构建具有高脂血症的免疫系统人源化小鼠模型提供新方法。方法:基于CRISPR/Cas9技术,将有效识别LDLR基因外显子2和18的sgRNA/Cas9 mRNA注射到NOD SCID小鼠的受精卵中,通过对新生小鼠基因型鉴定筛选得到基因敲除的F0代阳性(LDLR^(+/-),Aa)小鼠,再将此小鼠与NOD SCID(LDLR^(+/+),AA)小鼠繁育,鉴定得到能稳定遗传基因型的F1代(Aa)小鼠。将F1代阳性杂合小鼠与NOD SCID小鼠繁育,获得大量基因序列完全相同的F2代(Aa)小鼠,在F2代间进行大规模繁育,获得的F3代小鼠依据基因型和性别进行分组,分别为雄性AA、雄性Aa、雌性AA和雌性Aa,对体质量进行监测,同时采集外周血进行血液胆固醇水平检测。结果:通过上述构建方法获得了NOD SCID LDLR^(+/-)(Aa)小鼠,经过8周的体质量检测,Aa杂合子基因型在生长发育过程中并不影响小鼠体质量,雌性Aa的胆固醇水平为(100.80±4.42)mg·dL^(-1),雄性Aa的胆固醇水平为(120.56±11.16)mg·dL^(-1),与阴性对照(基因型为AA的小鼠)比较,胆固醇水平明显升高(P<0.05);雌性AA的胆固醇水平为(60.78±2.11)mg·dL^(-1),雄性AA的胆固醇水平为(75.43±10.06)mg·dL^(-1),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在不影响小鼠体质量的前提下,通过CRISPR/Cas9技术在NOD SCID背景下成功构建出了胆固醇水平自发升高的小鼠模型。 展开更多
关键词 高脂血症 免疫系统人源化小鼠 低密度脂蛋白受体 胆固醇 CRISPR/Cas9技术
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一种优化的提高质粒产量的提取方法
4
作者 王宗宇 张晓瑛 +2 位作者 张小玲 杨永广 代相鹏 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第11期42-47,共6页
研究旨在优化质粒提取方法,提高质粒产量。对商品化质粒提取试剂盒的提取条件进行了优化,增加了提前小管摇菌和异丙醇-20℃过夜沉淀两个步骤。利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、双酶切和免疫印迹等方法,对获得质粒的生化特性和生物... 研究旨在优化质粒提取方法,提高质粒产量。对商品化质粒提取试剂盒的提取条件进行了优化,增加了提前小管摇菌和异丙醇-20℃过夜沉淀两个步骤。利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、双酶切和免疫印迹等方法,对获得质粒的生化特性和生物学功能进行了测定。结果表明,优化的质粒提取方法可提高30%的质粒产量,质粒的生化指标和生物学功能试验结果显示优化方法获得的质粒质量没有下降。 展开更多
关键词 质粒提取 方法优化 异丙醇
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