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粪肠球菌裂解性噬菌体φEn-ZZ8生物学特性的初步分析 被引量：11
1
作者 张哲 李菁华 +3 位作者 逯茵茵 韩放 李诗恒 孙延波 《微生物与感染》 2015年第4期241-246,共6页
本研究旨在通过分离粪肠球菌裂解性噬菌体并分析其生物学特性，为噬菌体疗法应用于肠球菌感染提供依据。以粪肠球菌为宿主菌，用双层琼脂法从环境污水中分离出1株裂解性噬菌体（命名为（pEn—ZZ8），对其生物学特性进行初步分析。透射... 本研究旨在通过分离粪肠球菌裂解性噬菌体并分析其生物学特性，为噬菌体疗法应用于肠球菌感染提供依据。以粪肠球菌为宿主菌，用双层琼脂法从环境污水中分离出1株裂解性噬菌体（命名为（pEn—ZZ8），对其生物学特性进行初步分析。透射电镜观察发现，φEn-ZZ8头部呈二十面体立体对称，直径约40nm；尾部呈丝状，长约200nm。吸附实验表明，在10min内超过90％的噬菌体可吸附至宿主菌细胞。一步生长曲线显示，yEn．ZZ8的潜伏期为15min，爆发期为40min，爆发量为150pfu／cell。yEn-ZZ8基因组对内切酶HindIU、EcoRV、NdeI、PstI、XbaI和SacⅡ敏感；基因组大小约为42kb。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳至少可见14条蛋白带，相对分子质量为10000130000。φEn—ZZ8对26株粪肠球菌的裂解率达30．8％，其裂解活性在pH5～8和50-70℃条件下仍稳定。结果提示，φEn-ZZ8是一种裂解性强、裂解谱较宽、对温度具有耐受性的裂解性噬菌体，有望成为抗耐药性肠球菌感染的噬菌体生物制剂。 展开更多
关键词 粪肠球菌 耐万古霉素肠球菌 噬菌体 噬菌体疗法
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噬菌体对黏质沙雷菌感染BALB/c小鼠的保护作用 被引量：2
2
作者 徐花 李毅 +4 位作者 逯茵茵 周佳琦 韩放 李诗恒 孙延波 《微生物与感染》 2015年第2期103-107,共5页
本文旨在观察噬菌体对黏质沙雷菌感染小鼠的治疗作用,为噬菌体疗法应用于细菌性感染提供依据。以黏质沙雷菌为宿主菌,采用双层琼脂噬斑法从污水中分离和纯化裂解性噬菌体。将最小致死量的黏质沙雷菌经腹腔感染BALB/c小鼠后,立即腹腔注... 本文旨在观察噬菌体对黏质沙雷菌感染小鼠的治疗作用,为噬菌体疗法应用于细菌性感染提供依据。以黏质沙雷菌为宿主菌,采用双层琼脂噬斑法从污水中分离和纯化裂解性噬菌体。将最小致死量的黏质沙雷菌经腹腔感染BALB/c小鼠后,立即腹腔注射不同剂量的噬菌体,观察动物的生存率并确定噬菌体的保护剂量。在动物感染后的不同时间(0、20、40、60和180min)观察噬菌体疗法对动物存活率的影响。将噬菌体和细菌同时或分别注射动物后,分析噬菌体在动物体内的药代动力学。结果显示,经噬斑法从污水中分离出1株裂解性噬菌体(命名为φSM9-3Y),电镜观察发现该噬菌体属有尾噬菌体目肌尾噬菌体科。动物腹腔感染黏质沙雷菌并立即给予噬菌体后发现,当噬菌体的保护剂量为108 PFU/ml时,动物的存活率为100%。动物感染后40和60min给予噬菌体(1010 PFU/ml)治疗,动物的存活率为60%。药代动力学表明,将噬菌体和细菌同时注入动物体内,在6h内噬菌体的滴度维持在1010 PFU/ml。结果提示,噬菌体对黏质沙雷菌所致动物腹腔内感染的治疗是有效的,提示针对细菌性感染的噬菌体疗法具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 黏质沙雷菌 噬菌体 噬菌体疗法
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噬菌体对鲍曼不动杆菌所致小鼠肠源性脓毒症的治疗效果
3
作者 李菁华 余静丹 +4 位作者 史红艳 王丹 逯茵茵 张哲 孙延波 《中华临床感染病杂志》 CAS 2014年第3期197-201,共5页
目的 观察噬菌体对鲍曼不动杆菌引起的小鼠肠源性脓毒症的治疗效果.方法 采用双层琼脂法从环境中分离鲍曼不动杆菌噬菌体.通过腹腔注射氨苄青霉素和环磷酰胺的方法,同时经口感染耐氨苄青霉素鲍曼不动杆菌,建立小鼠肠源性脓毒症模型.在... 目的 观察噬菌体对鲍曼不动杆菌引起的小鼠肠源性脓毒症的治疗效果.方法 采用双层琼脂法从环境中分离鲍曼不动杆菌噬菌体.通过腹腔注射氨苄青霉素和环磷酰胺的方法,同时经口感染耐氨苄青霉素鲍曼不动杆菌,建立小鼠肠源性脓毒症模型.在细菌感染前1d、感染结束后2d,以及感染结束后6d给予噬菌体治疗,观察小鼠的存活情况.另取未给予噬菌体治疗小鼠作为对照.各组分别设6只小鼠.采用成组设计的两样本均数t检验比较噬菌体治疗组和对照组小鼠外周血和肝脏内炎症因子水平,以及肝脏和脾脏内的细菌数量.结果 鲍曼不动杆菌引起肠源性脓毒症小鼠全部死亡的最小致死量为1×107 CFU/mL.在感染前、结束后2d和6 d给予噬菌体治疗,分别有2,4,3只小鼠存活,对照组全部死亡.噬菌体治疗组小鼠外周血白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏子因子（TNF）-α和IL-6水平分别为（105±6） ng/L,（105±11）ng/L和（104±12） ng/L,明显低于对照组（t=5.04,9.05和9.33,P＜0.01）;噬菌体治疗组小鼠肝脏内的IL-1 β和TNF-α水平分别为（104 ±9） ng/L和（104±11）ng/L,亦低于对照组（t=13.70和12.80,P＜0.01）,但IL-6水平治疗组与对照组比较差异无统计学意义（t=1.06,P＞0.05）;噬菌体治疗组小鼠肝脏和脾脏内细菌数量分别为（2.9±1.3）×103CFU/g和（8.3±7.6）×102 CFU/g,明显低于对照组（=9.16和8.96,P＜0.01）.结论 噬菌体治疗鲍曼不动杆菌引起的肠源性脓毒症确切有效. 展开更多
关键词 细菌噬菌体 鲍氏不动杆菌 脓毒症
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人乳头瘤病毒16型E7密码子优化后的原核表达及免疫原性研究
4
作者 李菁华 史红艳 +4 位作者 韩放 逯茵茵 徐国全 于丽 孙延波 《微生物学免疫学进展》 2014年第2期7-11,共5页
目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因密码子优化后的原核表达系统,通过特异性抗体制备评价E7融合蛋白的免疫原性。方法人工合成优化后的HPV16 E7基因,利用特异引物扩增HPV16 E7基因。将E7基因连接至原核表达载体构建重组表达质粒pMAl... 目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因密码子优化后的原核表达系统,通过特异性抗体制备评价E7融合蛋白的免疫原性。方法人工合成优化后的HPV16 E7基因,利用特异引物扩增HPV16 E7基因。将E7基因连接至原核表达载体构建重组表达质粒pMAl-c2X-E7,转化至感受态细胞DE3后,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表达产物E7融合蛋白。纯化后的E7融合蛋白免疫动物,采用ELISA检测动物血清效价。结果 E7基因PCR产物的测序结果与优化后的目的基因序列比对一致。表达的E7融合蛋白经SDS-PAGE分析表明:在相对分子质量50 000处有特异性表达带,与预期相符。以E7融合蛋白制备的多克隆抗体其血清效价可达1∶64 000。结论成功构建的重组表达质粒pMAl-c2X-E7可有效表达MBP-E7融合蛋白,E7融合蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 原核表达 多克隆抗体
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