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口蹄疫病毒WFL株2C-P3-3′NCR片段的克隆及适于设计siRNA的序列分析
1
作者 任林柱 孙大辉 +3 位作者 王兴龙 刘锴 王学理 张辉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第7期489-492,共4页
目的筛选出口蹄疫病毒(FMDV)基因组上适于设计siRNA的基因片段。方法以FMDV WFL株RNA为模板,用3′RACE法扩增出2C-P3-3′NCR序列,将PCR扩增片段克隆到pMD18-T载体上,转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,进行序列测定,并与参考毒株序列比... 目的筛选出口蹄疫病毒(FMDV)基因组上适于设计siRNA的基因片段。方法以FMDV WFL株RNA为模板,用3′RACE法扩增出2C-P3-3′NCR序列,将PCR扩增片段克隆到pMD18-T载体上,转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,进行序列测定,并与参考毒株序列比较。结果扩增的基因片段大小为4033bp,其2C、P3和3′NCR序列的核苷酸序列与参考毒株的同源性分别为87·11%～94·23%、84·91%～96·66%和66·98%～82·35%,2C和P3与参考毒株的氨基酸同源性分别为94·97%～99·39%和91·84%～98·55%,WFL株P3基因的第1150～1270、1680～1840和2080～2490bp以及2C基因的第354～470bp范围内与参考毒株具有高度保守的特性。因此,可以依据siRNA设计原则,在这4个区域内筛选抑制效果好的siRNA。结论成功克隆了FMDV WFL株2C-P3-3′NCR基因的序列,并筛选出4个适于设计siRNA的基因区段。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 基因组 小干扰RNA 克隆 序列分析
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小鼠釉基质丝氨酸蛋白酶基因打靶载体的构建及鉴定
2
作者 姜秋 聂代邦 +2 位作者 欧阳红生 谢艳林 孙宏晨 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期977-980,共4页
目的:对牙釉质丝氨酸蛋白酶(EMSP1)基因进行体外扩增,构建基因打靶载体,利用基因打靶技术建立转基因动物模型,研究EMSP1生理功能和病理学意义。方法:根据EMSP1的DNA序列,采用Oligo6.0软件设计两对引物,以129品系小鼠基因组DNA为模板,分... 目的:对牙釉质丝氨酸蛋白酶(EMSP1)基因进行体外扩增,构建基因打靶载体,利用基因打靶技术建立转基因动物模型,研究EMSP1生理功能和病理学意义。方法:根据EMSP1的DNA序列,采用Oligo6.0软件设计两对引物,以129品系小鼠基因组DNA为模板,分别扩增长为5 000 bp和1 700 bp片段作为同源长短臂。将其分别插入通用型基因敲除载体pSSC-9的正向筛选基因neo两侧,用PCR方法、限制性酶切和DNA序列分析进行鉴定。结果:采用双酶切鉴定,阳性重组克隆分别切出5000 bp和1700 bp片段,表明长短臂已克隆于载体中。DNA序列分析表明,成功构建EMSP1基因打靶载体pSSC-9-EMSP1。结论:成功构建小鼠EMSP1基因打靶载体。 展开更多
关键词 釉质丝氨酸蛋白酶 小鼠 基因敲除 打靶载体
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人血管内皮生长因子和端粒酶催化亚基复合调控序列的构建及转录活性的研究 被引量：5
3
作者 胡薇 郝军元 +2 位作者 艾永兴 张英波 张玉静 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期164-167,172,共5页
以人肝癌细胞基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增VEGF增强子和hTERT核心启动子序列,该序列与NCBI数据库参考序列相比,同源性达到99%以上。将VEGF增强子和hTERT核心启动子定向克隆到pBluescriptⅡSK载体中,构建VEGF增强子和hTERT核心启动... 以人肝癌细胞基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增VEGF增强子和hTERT核心启动子序列,该序列与NCBI数据库参考序列相比,同源性达到99%以上。将VEGF增强子和hTERT核心启动子定向克隆到pBluescriptⅡSK载体中,构建VEGF增强子和hTERT核心启动子复合调控序列。酶切去除表达载体pECFP-C1的启动子CMV,并将所制备的复合调控序列连接到CMV位置,构建含该复合调控序列并可表达绿色荧光蛋白报告基因的重组质粒,转染人肺癌细胞和正常人肝细胞。结果显示,在人肺癌细胞中观察到绿色荧光,而在人肝细胞中没有检测到。由此说明,具有肿瘤特异性的VEGF增强子和hTERT核心启动子复合转录调控序列可以驱动绿色荧光蛋白基因在人肺癌细胞中表达,但不能驱动该蛋白在正常人肝细胞中表达。 展开更多
关键词 VEGF增强子 hTERT核心启动子 绿色荧光蛋白 表达
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