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包涵体重组蛋白不同纯化方法的比较 被引量：12
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作者 常恒祯 常江 +5 位作者 战俊澎 杨馨 郭珣 刘益辛 邹德颖 任洪林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期862-867,共6页
目的比较切胶、包涵体复性及Ni-NTA亲和层析3种方法纯化包涵体重组蛋白的效果。方法筛选全长IL-1β与全长IL-1Ra重组质粒(简称IL-1β-1Ra-2重组质粒)及全长IL-1Ra重组质粒的转化感受态菌株[感受态E.coli BL21(DE3)、E.coli BL21(DE3)PL... 目的比较切胶、包涵体复性及Ni-NTA亲和层析3种方法纯化包涵体重组蛋白的效果。方法筛选全长IL-1β与全长IL-1Ra重组质粒(简称IL-1β-1Ra-2重组质粒)及全长IL-1Ra重组质粒的转化感受态菌株[感受态E.coli BL21(DE3)、E.coli BL21(DE3)PLysS及E.coli BL21-Codon Plus(DE3)-RIPL]、IPTG诱导浓度(0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mmol/L)、诱导温度(16和37℃)。最佳表达条件诱导的IL-1β-1Ra-2重组质粒,分别用切胶、包涵体复性及Ni-NTA亲和层析法进行纯化,确定最佳纯化方法。采用最佳表达条件分别诱导表达IL-1β-1Ra-2重组质粒及全长IL-1Ra重组质粒后,通过最佳纯化方法进行纯化,纯化产物进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果IL-1β-1Ra-2重组质粒及全长IL-1Ra重组质粒最佳转化感受态菌株为E.coli BL21-Codon Plus(DE3)-RIPL,最佳IPTG浓度分别为1和0.4 mmol/L,诱导温度为37℃;最佳纯化方法为包涵体复性纯化法。IL-1β-1Ra-2及全长IL-1Ra重组蛋白包涵体复性纯化产物相对分子质量分别约为10560和19770,纯度可达90%以上,可溶性蛋白回收量分别约为46及63 mg,且均可与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合。结论相同条件下,包涵体复性纯化法获得的可溶性蛋白回收量最大,适用于相对分子质量约10000的非高表达包涵体蛋白的纯化。 展开更多
关键词 包涵体 纯化 包涵体复性 Ni-NTA亲和层析 切胶
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