17例病毒性肺炎老年患者的临床特点及甲型H1N1流感病毒分子特征 被引量：23

1

作者 葛以跃 谭焰 +6 位作者 陈晨 吴涛 朱小娟 赵康辰 王丽 谷伟 崔仑标 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第6期576-581,共6页

目的对17例老年甲型H1N1流感病毒性肺炎患者的临床和病原学检测结果进行分析,了解老年甲型H1N1流感病毒性肺炎的临床特点及病毒分子特征。方法收集2018年1~3月期间在南京市第一医院呼吸科住院的老年肺炎患者作为研究对象,通过呼吸道病... 目的对17例老年甲型H1N1流感病毒性肺炎患者的临床和病原学检测结果进行分析,了解老年甲型H1N1流感病毒性肺炎的临床特点及病毒分子特征。方法收集2018年1~3月期间在南京市第一医院呼吸科住院的老年肺炎患者作为研究对象,通过呼吸道病毒核酸检查进行病例确诊。采集并分析病例的临床资料。扩增流感病毒全基因组后进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学分析,研究病毒的抗原性、致病性和耐药性等生物学特征。结果入选的17例患者平均年龄为(73.8±10.8)岁,所有患者至少合并1种基础性疾病,7例存在合并感染。呼吸系统症状和发热是最为突出的临床表现,94.1%的患者伴有乳酸脱氢酶的增高,76.5%的患者影像学检查存在双肺病变,危重症患者双肺病变的比例高于重症患者。二代测序结果表明,病毒与疫苗株高度同源,HA基因同属于6B.1亚组,有3个抗原位点发生了变异(H138Y、S74R和S164T),1株病毒发生了NA的H275Y耐药变异。结论老年甲型H1N1流感病毒性肺炎患者多合并基础疾病,容易产生合并感染;应密切关注病毒的分子特征及关键氨基酸位点变异,为疫情防控和临床抗病毒治疗提供依据。 展开更多

关键词 老年 甲型H1N1流感 肺炎 临床特点 分子特征

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江苏省2010年宋内志贺菌耐药相关整合子分析及分子分型研究 被引量：1

2

作者 钱慧敏 顾兵 +7 位作者 庄菱 艾静 董晨 周璐 鲍倡俊 汤奋扬 崔志刚 朱叶飞 《江苏预防医学》 CAS 2015年第3期30-34,共5页

目的分析江苏省2010年宋内志贺菌的整合子分布及分子分型特征。方法对江苏省2010年分离的33株宋内志贺菌采用K-B纸片法检测抗菌药物敏感性,联合PCR和限制性片段多态性(RFLP)进行整合子分类和可变区检测,利用测序技术判断整合子可变区耐... 目的分析江苏省2010年宋内志贺菌的整合子分布及分子分型特征。方法对江苏省2010年分离的33株宋内志贺菌采用K-B纸片法检测抗菌药物敏感性,联合PCR和限制性片段多态性(RFLP)进行整合子分类和可变区检测,利用测序技术判断整合子可变区耐药基因,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子同源性分析。结果宋内志贺菌多重耐药率为63.64%,对复方新诺明、四环素、萘啶酸和氨苄西林耐药率较高,分别为84.85%、75.76%、66.67%和63.64%。33株宋内志贺菌中51.52%的菌株检出I类整合子,其中4株可变区阳性,携带dfrA17-aadA5基因盒;81.82%的菌株检出II类整合子,携带dfrA1-sat1-aadA1基因盒;两类整合子同时存在时耐药性更为显著。PFGE图谱分为13个不同带型,同一带型菌株大多分散于江苏各地。结论整合子在宋内志贺菌中广泛存在,参与其多重耐药机制。多重耐药性在不同地区、不同克隆的菌株间扩散传播。 展开更多

关键词 宋内志贺菌 多重耐药 整合子 脉冲场凝胶电泳(PFGE)

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流感及H5N1亚型禽流感病毒液相检测芯片的制备 被引量：6

3

作者 郭喜玲 葛以跃 +4 位作者 崔仑标 史智扬 曾晓燕 祁贤 戚宇华 《热带医学杂志》 CAS 2010年第10期1156-1159,共4页

目的 建立利用液相芯片技术检测甲、乙型流感和H5N1亚型高致病性禽流感病毒的方法,并对该方法进行评价。方法 对GenBank中甲型流感病毒的NP、乙型流感病毒的HA以及高致病性禽流感病毒(H5N1)的H5、N1基因片段序列进行同源性比对,根据... 目的 建立利用液相芯片技术检测甲、乙型流感和H5N1亚型高致病性禽流感病毒的方法,并对该方法进行评价。方法 对GenBank中甲型流感病毒的NP、乙型流感病毒的HA以及高致病性禽流感病毒(H5N1)的H5、N1基因片段序列进行同源性比对,根据保守序列,设计针对各基因的简并引物和寡核苷酸探针,制备探针偶联微球,将样本核酸多重PCR扩增产物与微球进行杂交,以Bio-Plex液相芯片检测系统进行芯片检测。结果 该方法可以对甲型流感病毒的NP基因、乙型流感病毒的HA基因以及高致病性禽流感病毒(H5N1)的H5、N1基因同时进行检测,病毒核酸的最低检出量为1pg,检测特异性高。结论 成功构建了甲、乙型流感病毒和H5N1亚型高致病性禽流感病毒液相芯片检测系统,为流感、禽流感的快速检测、诊断奠定了基础。 展开更多

关键词 液相芯片 流感病毒 禽流感病毒 H5N1 快速诊断

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抗人生长转化因子15单克隆抗体制备及鉴定 被引量：5

4

作者 詹峰 曾晓燕 +4 位作者 张晓 周顺 徐言 张建平 焦永军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期539-541,544,共4页

目的:制备抗人生长转化因子15(GDF15)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:构建GDF15原核表达载体pGEX-4T-2-gdf15,诱导表达并纯化GST-GDF15融合蛋白。以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与同系小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依... 目的:制备抗人生长转化因子15(GDF15)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:构建GDF15原核表达载体pGEX-4T-2-gdf15,诱导表达并纯化GST-GDF15融合蛋白。以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与同系小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行阳性杂交瘤细胞株的筛选及亚克隆,最终获得稳定分泌抗GDF15 mAb杂交瘤细胞株。以间接ELISA法检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测在肝癌患者血清中GDF15表达水平。结果:获得1株稳定分泌抗人GDF15 mAb杂交瘤细胞株,命名为9G3;抗体免疫球蛋白亚类为IgG1,轻链为κ型;免疫共沉淀及质谱分析证实抗GDF15 mAb9G3能与肝癌患者血清中GDF15蛋白特异性结合并且GDF15水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高。结论:成功制备了抗人GDF15mAb,为后期肝癌早期诊断试剂盒的开发奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 GDF15 单克隆抗体 HCC

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江苏省2015年小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因及染色体16S rRNA基因多态性分析 被引量：3

5

作者 周璐 董晨 +8 位作者 郭惠 吴银华 张永杰 艾静 顾玲 鲍倡俊 周明浩 朱凤才 谈忠鸣 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 2018年第1期34-37,共4页

目的了解江苏地区不同来源小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因携带情况及染色体16S rRNA基因的多态性。方法收集2015年1月至12月江苏地区不同来源小肠结肠炎耶尔森菌，运用PCR方法检测菌株5种毒力基因（ail、virF、yadA、ystA和ystB）携带情况... 目的了解江苏地区不同来源小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因携带情况及染色体16S rRNA基因的多态性。方法收集2015年1月至12月江苏地区不同来源小肠结肠炎耶尔森菌，运用PCR方法检测菌株5种毒力基因（ail、virF、yadA、ystA和ystB）携带情况并对染色体16S rRNA基因进行扩增，产物测序并分析。结果2015年共收集到江苏地区小肠结肠炎耶尔森菌73株，56株菌（76.7%）携带毒力基因，ail－virF－yadA－ystA－ystB＋型为江苏地区优势型，也是腹泻患者分离株的主要型。染色体16S rRNA基因多态性分析显示全部菌株被聚类为4个大组。结论江苏地区携带ystB＋基因的非致病性小肠结肠炎耶尔森菌为优势菌，同时存在致病性菌株。染色体16S rRNA基因聚类结果与毒力基因携带情况高度一致。 展开更多

关键词 耶尔森菌 小肠结肠炎 扩增片段长度多态性分析 毒力基因 染色体16S rRNA基因

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多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色技术检测病毒性脑炎脑膜炎病原体 被引量：4

6

作者 樊欢 戚宇华 +5 位作者 朱政 崔仑标 葛以跃 赵康程 吴涛 史智扬 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期991-995,1001,共6页

目的建立一种病毒性脑炎脑膜炎病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测方法。方法针对几种重要的脑炎脑膜炎病毒(东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、流行性乙型脑炎病毒、西尼罗病毒和尼帕病毒)保守区基因设计引物,进行多重PC... 目的建立一种病毒性脑炎脑膜炎病原体多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测方法。方法针对几种重要的脑炎脑膜炎病毒(东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、流行性乙型脑炎病毒、西尼罗病毒和尼帕病毒)保守区基因设计引物,进行多重PCR反应、核酸侵入反应及纳米金显色反应,对多种脑炎脑膜炎病毒同时进行检测,以森林脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、基孔肯雅病毒和登革病毒4种病原核酸评价其检测特异性,以体外转录的病毒RNA或扩增的PCR片段评价其检测敏感性,并对流行性乙型脑炎患者临床标本进行检测。结果成功建立了一种脑炎脑膜炎病毒多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色的检测技术。建立的检测方法可特异的检测目的病原体,且与森林脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、基孔肯雅病毒和登革病毒无交叉反应。该方法对不同靶标的检测灵敏度均为103拷贝/μL,临床标本检测结果均为阳性。结论建立的脑炎脑膜炎病毒多重PCR结合核酸侵入反应及纳米金显色技术的检测方法,具有较高的检测特异性及灵敏度,检测通量高,肉眼即可观察结果,在传染病病原体检测方面具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 病毒性脑炎脑膜炎 多重PCR 核酸侵入反应 纳米金显色

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产志贺毒素大肠杆菌志贺毒素Ⅰ型双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：3

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作者 宋路 曾晓燕 +4 位作者 史凤娟 黄明明 宋小凯 李祥瑞 焦永军 《畜牧与兽医》 北大核心 2016年第8期18-21,共4页

为建立双抗体夹心ELISA法检测产志贺毒素大肠杆菌(STEC)Ⅰ型志贺毒素(Stx1),利用重组Ⅰ型志贺毒素A亚单位(Stx1A)免疫小鼠,制备单克隆抗体,从中筛选出非竞争性的2株单抗,构建双抗体夹心法ELISA检测方法,并对试验样品中的志贺毒素进行检... 为建立双抗体夹心ELISA法检测产志贺毒素大肠杆菌(STEC)Ⅰ型志贺毒素(Stx1),利用重组Ⅰ型志贺毒素A亚单位(Stx1A)免疫小鼠,制备单克隆抗体,从中筛选出非竞争性的2株单抗,构建双抗体夹心法ELISA检测方法,并对试验样品中的志贺毒素进行检测。结果显示:共获得4株针对Stx1A的单克隆抗体,分别为1H2-G7、2H1-C12、8E7-E6和2F6-F8。当8E7-E6作为包被抗体,而2F6-F8作为检测抗体时,其检测毒素的OD值最高。对样品中的Stx进行检测,表明该方法只有效识别Stx1,对Stx2不识别。结论:成功建立了用于检测Stx1的双抗体夹心ELISA法,为临床上快速诊断STEC感染奠定了基础。 展开更多

关键词 产志贺毒素大肠杆菌 Ⅰ型志贺毒素 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA

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甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体的构建与表达 被引量：2

8

作者 张文帅 卞倩 +3 位作者 温恬 迟莹 李燕 焦永军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期287-289,共3页

目的:构建甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体并表达其编码蛋白(转染293T细胞)。方法:从江苏首例甲型H1N1流感病毒毒株(A/Nan jing/1/2009(H1N1))提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Vector中构建pMD... 目的:构建甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体并表达其编码蛋白(转染293T细胞)。方法:从江苏首例甲型H1N1流感病毒毒株(A/Nan jing/1/2009(H1N1))提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Vector中构建pMD18-T-NS1质粒,双酶切pMD18-T-NS1与PXJ40-HA后,构建真核表达载体PXJ40-HA-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定NS1蛋白的表达。结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功。West-ern blot法可见NS1基因编码蛋白的成功表达。结论:成功克隆NS1全长基因,并构建了其真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1蛋白的细胞模型和NS1蛋白功能研究提供了材料。 展开更多

关键词 甲型H1N1流感病毒 NS1 真核表达 免疫印迹

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H5N1高致病性禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达 被引量：1

9

作者 金秋 刘哲 +6 位作者 陆敏华 戴望舒 徐言 张晓 曾晓燕 冯振卿 焦永军 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1583-1586,共4页

目的:扩增高致病性禽流感H5N1亚型病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因,并进行真核表达。方法:抽提毒株A/Jiangsu/08-6基因组RNA,反转录为cDNA,用特异性引物扩增HA基因。HA经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆到pFastBac-GP67B载体上,筛选出阳性... 目的:扩增高致病性禽流感H5N1亚型病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因,并进行真核表达。方法:抽提毒株A/Jiangsu/08-6基因组RNA,反转录为cDNA,用特异性引物扩增HA基因。HA经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切后克隆到pFastBac-GP67B载体上,筛选出阳性重组转座质粒pFastBac-GP67B-HA,并将其进一步转化DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定后,获得重组穿梭载体(rBacmid-HA),再通过CellfectinⅡ试剂转染rBacmid-HA至对数生长期的sf9昆虫细胞,进行目的蛋白的真核表达。分别用SDS-PAGE、Western blot、血凝试验以及质谱分析对其进行鉴定。结果:HA基因在sf9细胞表达的蛋白分子量约70 000。血凝试验表明重组HA蛋白可使鸡红细胞发生凝集。质谱分析鉴定该重组蛋白为HA蛋白。结论:重组HA蛋白具有天然HA蛋白的活性,为亚单位疫苗的研制及中和抗体的筛选奠定了基础。 展开更多

关键词 H5N1型禽流感病毒 血凝素 杆状病毒昆虫细胞表达系统 血凝试验

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1例上呼吸道感染病例的高通量测序病原鉴定

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作者 郭喜玲 葛以跃 +7 位作者 赵康辰 朱小娟 祁贤 陈银 史智扬 朱凤才 周明浩 崔仑标 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2016年第5期421-424,共4页

目的以高通量测序技术对1例上呼吸道感染病例的可能病原进行鉴定并对样品前处理方法进行优化。方法以核酸酶和/或核糖体RNA探针杂交预处理患者咽拭子样本，非序列依赖单引物扩增（sequence-independent single primer amplification，SI... 目的以高通量测序技术对1例上呼吸道感染病例的可能病原进行鉴定并对样品前处理方法进行优化。方法以核酸酶和/或核糖体RNA探针杂交预处理患者咽拭子样本，非序列依赖单引物扩增（sequence-independent single primer amplification，SISPA）后制备测序文库，利用MiSeq高通量测序，对测序结果进行生物信息分析及Real time RT-PCR验证。结果测序reads经拼接后与病毒数据库比对发现存在乙型流感病毒序列，进化分析该毒株属于Yamagat系一株新的变种，核酸酶结合核糖体RNA探针杂交处理样本可提高高通量测序目标序列数及覆盖率。结论应用核酸酶和/或核糖体RNA探针杂交处理样本结合高通量测序技术可用于快速高效地鉴定不明原因感染的病原。 展开更多

关键词 流感病毒 乙型 高通量测序 SISPA 核酸酶 核糖体RNA

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禽流感病毒H5N1亚型NS1蛋白的真核表达及其在细胞中的分布

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作者 卞倩 张文帅 +2 位作者 迟莹 李燕 焦永军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期671-674,共4页

为构建禽流感病毒(AIV)H5N1亚型非结构蛋白NS1的真核表达载体,并鉴定其在哺乳动物细胞中的表达与分布,本研究采用RT-PCR技术,从甲型流感病毒的总RNA中扩增NS1全长基因,并将其克隆于pXJ40中,构建真核表达载体pXJ40-HA-NS1。将该重组质粒... 为构建禽流感病毒(AIV)H5N1亚型非结构蛋白NS1的真核表达载体,并鉴定其在哺乳动物细胞中的表达与分布,本研究采用RT-PCR技术,从甲型流感病毒的总RNA中扩增NS1全长基因,并将其克隆于pXJ40中,构建真核表达载体pXJ40-HA-NS1。将该重组质粒转染293T细胞,通过western blot方法鉴定表达的NS1蛋白;并以免疫荧光技术观察NS1在H1299细胞中的分布与定位。Western blot结果显示NS1基因编码蛋白获得表达,免疫荧光检测显示NS1蛋白主要存在于细胞核中。本研究为NS1蛋白功能和H5N1亚型AIV致病机制的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 H5N1亚型禽流感病毒 NS1 真核表达

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江苏省近期急性胃肠炎暴发中诺如病毒分子特征分析 被引量：23

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作者 付建光 艾静 +8 位作者 靳淼 刘成 沙丹 姚萍 吴斌 祁贤 鲍昌俊 朱叶飞 汤奋扬 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期808-811,共4页

目的了解江苏省胃肠炎暴发疫情中诺如病毒（NOV）感染状况，并对其病原分子流行病学特征进行初步研究。方法收集江苏省2012年10月至2013年3月7起胃肠炎暴发疫情患者肛拭子标本共67份，采用实时荧光RT-PCR定性检测，NoV阳性标本用RT-PCR... 目的了解江苏省胃肠炎暴发疫情中诺如病毒（NOV）感染状况，并对其病原分子流行病学特征进行初步研究。方法收集江苏省2012年10月至2013年3月7起胃肠炎暴发疫情患者肛拭子标本共67份，采用实时荧光RT-PCR定性检测，NoV阳性标本用RT-PCR扩增其聚合酶区及VPl区基因片段进一步测序分型。结果7起疫情均为NoV感染引起的暴发，检测阳性率为67．2％（45／67）。全部45株阳性毒株序列分析表明7起疫情中除一起是由GII．3型感染引起外，其余6起均由新GⅡ．4感染引起，其中38株毒株与2012年澳大利亚参考株GII．4／Sydney株同源性均在99％以上。进一步对6株新型Sydney变异株的衣壳蛋白VPl区扩增测序，并与9株近年流行株的VPI区氨基酸序列比对，发现该6株毒株的VPl区部分氨基酸已出现突变，而氨基酸位点的突变是与病毒抗原性密切相关。结论江苏省7起疫情暴发聚集且感染毒株型别单一，说明已出现新NoV变异株，其原型株GlI．4／Sydney已在国外多地引起暴发和流行，提示该毒株将是今后防控监’钡ll的重点。 展开更多

关键词 诺如病毒 暴发 基因型 GⅡ 4 Sydney变异株

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禽流感病毒(H5N1)血凝素蛋白真核表达载体的构建与表达 被引量：2

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作者 张文帅 温恬 +2 位作者 迟莹 李燕 焦永军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期91-93,共3页

目的:构建禽流感病毒(H5N1)血凝素蛋白HA真核表达载体并表达其编码蛋白(转染293T细胞)。方法:从江苏H5N1流感病毒毒株(A/Jiangsu/07-4(H5N1))提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增HA全长基因,将其克隆至pMD18-T Vector中构建pMD18-T-HA质粒,... 目的:构建禽流感病毒(H5N1)血凝素蛋白HA真核表达载体并表达其编码蛋白(转染293T细胞)。方法:从江苏H5N1流感病毒毒株(A/Jiangsu/07-4(H5N1))提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增HA全长基因,将其克隆至pMD18-T Vector中构建pMD18-T-HA质粒,双酶切pMD18-T-HA与PXJ40-MYC后,构建真核表达载体PXJ40-MYC-HA,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过West-ern blot鉴定HA蛋白的表达。结果:经双酶切、测序鉴定证实HA基因的真核表达载体构建成功。Western blot法可见HA基因编码蛋白的成功表达。结论:成功构建了H5N1血凝素真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达HA蛋白的细胞模型和HA蛋白功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H5N1 HA 真核表达 免疫印迹

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