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副溶血弧菌胶体金检测试纸条的改进 被引量：9
1
作者 王报贵 王广峰 +4 位作者 武晓丽 董素琴 明星 魏华 徐锋 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期57-61,65,共6页
研制一种快速、灵敏、简便的胶体金免疫试纸条,用于改进副溶血弧菌的检测。通过胶体金与特异性针对于副溶血弧菌的单抗偶联,同时在NC膜上包被兔多抗、驴抗鼠的IgG分别作为检测线和质控线,制备免疫层系试纸条,测定试纸条的灵敏性与特异... 研制一种快速、灵敏、简便的胶体金免疫试纸条,用于改进副溶血弧菌的检测。通过胶体金与特异性针对于副溶血弧菌的单抗偶联,同时在NC膜上包被兔多抗、驴抗鼠的IgG分别作为检测线和质控线,制备免疫层系试纸条,测定试纸条的灵敏性与特异性。结果表明,当加入由胶体金标记的羊抗鼠二抗,能将显色强度提高5倍,明显有利于肉眼的观察。在纯培养物中试纸条的灵敏度为106CFU/mL,且与3株不同的副溶血弧菌均有阳性反应,与26株常见的菌均无交叉反应。同时在添加阪崎肠杆菌、志贺氏菌的鱼肉样本中,检测限为107CFU/mL。改良的副溶血弧菌胶体金免疫层系试纸条的建立,有助于加强食品中该菌的检测,提供了一种快速、灵敏、简便的方法。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 单克隆抗体 多克隆抗体 胶体金 免疫层系试纸条
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副溶血弧菌的磁珠捕获及检测 被引量：6
2
作者 王报贵 武晓丽 +5 位作者 董素琴 陈飞 陈星星 甘敏 明星 徐锋 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期147-152,共6页
建立结合免疫磁珠和PCR快速检测副溶血性弧菌的新方法。本研究选用副溶血弧菌作为抗原免疫日本大耳兔制备了多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价。利用辛酸硫酸铵沉淀结合逆向吸附对多抗血清进行纯化,经SDS-PAGE和斑点杂交检测验证纯化后... 建立结合免疫磁珠和PCR快速检测副溶血性弧菌的新方法。本研究选用副溶血弧菌作为抗原免疫日本大耳兔制备了多克隆抗体,用ELISA法检测抗体效价。利用辛酸硫酸铵沉淀结合逆向吸附对多抗血清进行纯化,经SDS-PAGE和斑点杂交检测验证纯化后抗体的特异性。将纯化后的抗体偶联于羧基化修饰的纳米磁珠表面,用来进行菌体的捕获。结果表明,抗体的效价达到106,纯化获得只与副溶血弧菌发生反应的高纯度抗体。制备的免疫磁珠捕获率在55%～70%之间,且稳定性较好,盐离子浓度(3.5%NaCl、4.5%NaCl)对捕获率的影响不大,在pH5～9之间,磁珠捕获差异也较小。在对纯培养物的检测实验中,本方法最低检测限为102cfu/mL;而在鱼肉糜样本中的检测限为103cfu/mL,且样品中高浓度杂菌的存在不影响检测灵敏度。免疫磁珠结合PCR用于副溶血性弧菌的检测具有很高的灵敏度和特异性,具有广阔的前景。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 多克隆抗体 免疫磁珠 PCR
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豆豉中主要分离细菌对小鼠生化指标及肠道菌群的影响 被引量：6
3
作者 董素琴 武晓丽 +3 位作者 王报贵 李胜杰 王玉莲 徐锋 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期343-347,共5页
采用豆豉样品进行细菌分离培养和细菌16S rDNA基因PCR扩增、测序分析,并将分离所得细菌进行小鼠灌胃实验。结果显示,豆豉中的主要分离细菌为枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、类肠膜魏斯氏菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、发酵乳杆菌、表皮... 采用豆豉样品进行细菌分离培养和细菌16S rDNA基因PCR扩增、测序分析,并将分离所得细菌进行小鼠灌胃实验。结果显示,豆豉中的主要分离细菌为枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、类肠膜魏斯氏菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌、发酵乳杆菌、表皮葡萄球菌。并且,各菌对小鼠丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)各项生化指标基本无影响。然而,其中解淀粉芽孢杆菌DC02能极显著性地降低小鼠血糖(GLU)水平,该菌有望成为治疗糖尿病的潜在菌株。活菌计数结果表明,除表皮葡萄菌以外,豆豉中分离所得其它细菌均能改善肠道菌群结构。可见,豆豉中分离所得主要细菌对正常机体安全、无致病性。 展开更多
关键词 豆豉 细菌 生化指标 肠道菌群
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利用双标记PCR产物的量子点检测副溶血性弧菌 被引量：4
4
作者 许海波 魏华 +1 位作者 张勇 王报贵 《食品工业》 北大核心 2015年第6期283-287,共5页
副溶血弧菌是一种能引起食源性疾病的重要病原菌,为了对该细菌进行检测,研制一种快速、灵敏、简便的量子点免疫层析试纸条。通过磁珠富集DNA后用双标记的特异性引物（上游引物5’用地高辛标记,下游引物5’用生物素标记）扩增不耐热溶血... 副溶血弧菌是一种能引起食源性疾病的重要病原菌,为了对该细菌进行检测,研制一种快速、灵敏、简便的量子点免疫层析试纸条。通过磁珠富集DNA后用双标记的特异性引物（上游引物5’用地高辛标记,下游引物5’用生物素标记）扩增不耐热溶血毒素基因（TLH）,进行量子点免疫试纸条的检测。结果表明,荧光定量PCR检测磁珠（Si-MNPs）的捕获率在浓度102~106 CFU/m L均在50%以上,浓度为102 CFU/m L时达到最高捕获率（64%）。在纯培养物及模拟检测中试纸条的检测限均为4×100 CFU/m L,但在模拟检测中T线的显色强度弱于纯培养物的检测,说明鱼肉糜样本的复杂成分对检测灵敏度有一定的影响,但添加高浓度杂菌（阪崎肠杆菌、志贺氏菌）不影响该方法的特异性。方法具有特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低的特点,2 h即可完成,为副溶血弧菌的快速检测提供了有效手段。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 量子点 免疫层析试纸条
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抗肠炎沙门氏菌单链抗体制备及其特异性分析 被引量：2
5
作者 王报贵 武晓丽 +5 位作者 董素琴 甘敏 陈星星 陈飞 明星 徐锋 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期62-67,共6页
目的:利用基因工程技术制备抗肠炎沙门氏菌的单链抗体。方法:从抗肠炎沙门氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞中纯化RNA,反转录后扩增出抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段,采用重叠延伸的方法,用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)3按VL-... 目的:利用基因工程技术制备抗肠炎沙门氏菌的单链抗体。方法:从抗肠炎沙门氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞中纯化RNA,反转录后扩增出抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段,采用重叠延伸的方法,用柔性多肽Linker接头(Gly4Ser)3按VL-Linker-VH方式将VH基因和VL基因拼接成单链抗体基因片段后,连接到pGEX-4T-1载体上,进行重组转化。挑取阳性克隆,经IPTG诱导后,通过GST柱进行亲和层析,最后利用ELISA检测抗体的活性。结果:成功构建了表达抗肠炎沙门氏菌单链抗体的基因工程菌株,经SDS-PAGE和ELISA检测结果表明,诱导表达的单链抗体scFv分子量约为60 kDa,其能特异与肠炎沙门氏菌结合,但与副甲伤寒沙门氏菌、鸭沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌有轻度交叉反应。结论:成功构建了抗肠炎沙门氏菌单链抗体的表达菌株,表达的单链抗体scFv可作为沙门氏菌的检测的候选抗体分子。 展开更多
关键词 沙门氏菌 单链抗体 重链可变区 轻链可变区
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