人禽流感H5N1病毒HA1蛋白抗原表位及主要免疫功能区特征的研究

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作者 夏玉坤 刘伯华 +4 位作者 杨保安 李靖 张永国 车小燕 祝庆余 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期695-700,710,共7页

目的确定人禽流感H5N1病毒HA1蛋白的单克隆抗体(McAb)抗识别表位及主要免疫功能区。方法将16条人禽流感H5N1病毒HA1基因重叠片段克隆入真核表达载体pDisplay,构建表达HA1蛋白的重叠肽段重组质粒,转染HeLa细胞后制备细胞抗原片。利用灭活... 目的确定人禽流感H5N1病毒HA1蛋白的单克隆抗体(McAb)抗识别表位及主要免疫功能区。方法将16条人禽流感H5N1病毒HA1基因重叠片段克隆入真核表达载体pDisplay,构建表达HA1蛋白的重叠肽段重组质粒,转染HeLa细胞后制备细胞抗原片。利用灭活的H5N1病毒免疫BALB/c小鼠,制备病毒特异单克隆抗体(单抗)和多克隆抗体(多抗),采用间接免疫荧光法分析单抗、多抗与HA1肽段的反应性,确定HA1蛋白的单抗识别表位及主要免疫功能区。结果成功克隆、表达了16条不同长度的H5N1肽段,并制备、获得30株分泌抗H5N1型禽流感病毒McAb的杂交瘤细胞株,其中18株为抗HA的单抗,18株中有6株单抗具有中和病毒活性。利用表达的H5N1肽段对单抗识别表位进行分析,初步确定3B5、3D1、3B2、M6、M3等18株McAb识别表位区域分别位于氨基酸残基aa133-143、aa155-165、aa166-196、aa166-176、aa34-66及aa296-328之间,其中3B5、3D1、3B2、M6等McAb识别表位为序列依赖型表位,M3和M7等具有中和活性的McAb识别表位为构象性中和表位。结论利用制备的H5N1病毒特异性McAb和表达的病毒HA1蛋白重叠肽抗原,初步确定了18株抗HAMcAb的识别表位和HA1蛋白的主要免疫功能区,为进一步研究开发新型疫苗提供了重要理论依据。 展开更多

关键词 流感病毒A型 H5N1亚型 血凝素糖蛋白类 流感病毒 表位

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禽流感病毒血凝素H5特异性单克隆抗体的制备及ELISA捕获法的建立 被引量：9

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作者 廖志勇 王压娣 +4 位作者 温坤 丘立文 狄飚 袁国勇 车小燕 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期339-343,共5页

目的制备和鉴定禽流感病毒（H5N1）血凝素（H5）特异性单克隆抗体（mAb）,建立H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法。方法以H5血凝素和携带H5全长基因的质粒免疫Balb/c小鼠制备mAb,利用血凝抑制（HI）实验筛选和鉴定,通过竞争抑制试验分析抗... 目的制备和鉴定禽流感病毒（H5N1）血凝素（H5）特异性单克隆抗体（mAb）,建立H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法。方法以H5血凝素和携带H5全长基因的质粒免疫Balb/c小鼠制备mAb,利用血凝抑制（HI）实验筛选和鉴定,通过竞争抑制试验分析抗体识别表位,并采用抗体配对试验筛选捕获抗体和检测抗体,建立测定H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法。结果获得16株特异性针对H5的单克隆抗体,与A型流感病毒H1、H3、H7、H9和B型流感病毒的血凝素无HI交叉反应,对H5血凝素的血凝抑制效价为1∶100-1∶51200;通过配对实验,建立以单克隆抗体H5M9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记单克隆抗体H5M11为检测抗体的双抗体夹心ELISA;检测多株H5N1病毒和H5血凝素的最低检出值为1/32血凝单位,检测A型流感病毒H1N1、H3N2、B型流感病毒以及H7、H9血凝素均为阴性。结论建立了一种灵敏度高、特异性强的测定H5抗原的ELISA捕获法,可应用于禽流感病毒H5N1感染的实验室早期诊断。 展开更多

关键词 禽流感病毒H5N1 H5血凝素 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验

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shRNA转染对异位内膜细胞survivin基因的靶点抑制作用 被引量：9

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作者 彭冬先 何援利 丘立文 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期859-862,866,共5页

目的构建靶向人survivin基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒载体,观察其对异位内膜细胞survivin基因的抑制作用。方法设计干扰人survivin基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核酸后克隆到pGCL-GFP载体,PCR鉴定和测序分析及阳性克隆质粒抽提... 目的构建靶向人survivin基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒载体,观察其对异位内膜细胞survivin基因的抑制作用。方法设计干扰人survivin基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核酸后克隆到pGCL-GFP载体,PCR鉴定和测序分析及阳性克隆质粒抽提,在脂质体的介导下将慢病毒包装辅助质粒和survivin基因重组慢病毒载体导入293T细胞包装病毒,测定病毒滴度。感染人异位子宫内膜细胞,采用RT-PCR测定细胞中survivin mRNA的表达,并与未转染及空转染细胞进行比较。结果慢病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为8×108U/ml。Survivin shRNA慢病毒载体感染人异位内膜细胞后,Survivin mRNA水平为0.15±0.03,明显低于阴性对照组0.42±0.06和空白对照组0.48±0.08(P<0.01);而阴性对照组与空白对照组相比无统计学差异。结论成功构建针对survivin基因的shRNA慢病毒载体,体外感染人异位内膜细胞后可有效抑制survivin基因的表达,为研究子宫内膜异位症分子病因和基因治疗提供了新的平台。 展开更多

关键词 SURVIVIN基因 短发夹状RNA 慢病毒 异位内膜细胞 子宫内膜异位症

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慢病毒介导shRNA沉默survivin基因对鸡胚绒毛尿囊膜子宫内膜异位症模型的影响 被引量：5

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作者 彭冬先 何援利 丘立文 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期995-999,共5页

目的研究慢病毒介导生存素基因特异性短发夹状RNA(shRNA)对子宫内膜异位症异位内膜生长及新生血管形成的影响。方法建立鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)子宫内膜异位症模型,随机分成单纯接种组、shRNA慢病毒组、空载慢病毒组和空白载体组,每组30只... 目的研究慢病毒介导生存素基因特异性短发夹状RNA(shRNA)对子宫内膜异位症异位内膜生长及新生血管形成的影响。方法建立鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)子宫内膜异位症模型,随机分成单纯接种组、shRNA慢病毒组、空载慢病毒组和空白载体组,每组30只。通过Image-proplus软件测量新生血管面积与鸡胚尿囊膜面积比(VA/CAM)评价沉默survivin基因对CAM血管生成的影响,TUNEL检测异位内膜细胞凋亡,组织病理学观察异位内膜病灶生长行为。结果 shRNA慢病毒处理组种植内膜存活率最低,该组VA/CAM明显低于单纯接种组、空载慢病毒组和空白载体组(P<0.001),后3组间比较无显著性差异(P>0.05)。shRNA慢病毒处理组种植内膜细胞凋亡率明显高于其他3组(P<0.05),另3组间比较无显著性差异(P>0.05)。shRNA慢病毒处理组病灶在光镜下可见腺体结构不完整,间质伴有不同程度的坏死。结论慢病毒介导survivin基因特异性shRNA能够显著抑制人子宫内膜异位症种植CAM模型的新生血管形成,抑制子宫内膜在CAM上的种植生长。 展开更多

关键词 生存素 短发夹状RNA 子宫内膜异位症 慢病毒 鸡胚绒毛尿囊膜

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Ⅲ型登革病毒NS1单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：5

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作者 晋晶 潘玉先 +3 位作者 丁细霞 蔡建飘 狄飙 车小燕 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1726-1729,共4页

目的研制Ⅲ型登革病毒(DV3)非结构蛋白1(NS1)单克隆抗体,鉴定其血清型特异性。方法以具有良好抗原性的重组DV3-NS1蛋白与DV3交替免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合免疫荧光(IFA)和We... 目的研制Ⅲ型登革病毒(DV3)非结构蛋白1(NS1)单克隆抗体,鉴定其血清型特异性。方法以具有良好抗原性的重组DV3-NS1蛋白与DV3交替免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合免疫荧光(IFA)和Weatern Blot对抗体的特异性进行鉴定。结果经交替免疫法免疫Balb/c小鼠,共获得14株抗DV3-NS1单抗,其亚类测定1株为IgG2a,余为IgG1。其中3株特异性结合DV3及DV3-NS1蛋白,4株能同时结合4型登革病毒NS1蛋白,其余7株与其他3型登革病毒NS1蛋白存在交叉反应。结论成功获得了针对DV3-NS1的特异性单抗及交叉性单抗,将为进一步研究登革病毒NS1蛋白的结构与功能及临床诊断试剂的研发奠定基础。 展开更多

关键词 登革病毒 非结构蛋白1 单克隆抗体

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禽流感病毒非结构蛋白1单克隆抗体的制备及其特异性分析 被引量：4

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作者 丁细霞 Hoi-wah Tsoi +5 位作者 陈伟俊 丘立文 王压娣 廖志勇 袁国勇 车小燕 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期493-498,共6页

为研制禽流感病毒(H5N1)非结构蛋白1(NS1)的特异性单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性,本研究在分别表达了具有良好抗原性的A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1和A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1重组蛋白基础上,用A/Viet-nam/1194/04(H5N1)-NS1蛋白... 为研制禽流感病毒(H5N1)非结构蛋白1(NS1)的特异性单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性,本研究在分别表达了具有良好抗原性的A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1和A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1重组蛋白基础上,用A/Viet-nam/1194/04(H5N1)-NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,间接ELISA筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合免疫荧光和免疫印迹对抗体的特异性进行鉴定,通过竞争抑制实验对单抗识别的抗原位点进行分析。结果共获得19株能识别4个H5N1-NS1蛋白不同抗原位点的mAb,亚类测定显示,5株为IgG2a、1株为IgG2b,另外13株为IgG1。这些mAb均与A/Vietnam/1194/04(H5N1)-NS1和A/HongKong/486/97(H5N1)-NS1重组蛋白特异性结合,免疫荧光检测均与A型流感病毒(H1N1和H3N2)有交叉反应,而与B型流感病毒无交叉现象。表明成功获得特异性针对H5N1-NS1蛋白的mAb,为进一步研究禽流感病毒NS1蛋白的结构与功能奠定基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒(H5N1) 非结构蛋白 单克隆抗体

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禽流感病毒H5N1血凝素基因在昆虫细胞中的表达及鉴定 被引量：4

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作者 温坤 丘立文 +1 位作者 王压娣 车小燕 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期20-23,共4页

目的应用杆状病毒-昆虫细胞表达体系克隆及表达禽流感病毒H5N1血凝素H5抗原,鉴定其抗原性和生物活性。方法PCR扩增禽流感病毒H5全长基因序列,克隆、转化制备重组杆状病毒Bacmid质粒,通过转染昆虫细胞制备重组杆状病毒进行蛋白表达。采... 目的应用杆状病毒-昆虫细胞表达体系克隆及表达禽流感病毒H5N1血凝素H5抗原,鉴定其抗原性和生物活性。方法PCR扩增禽流感病毒H5全长基因序列,克隆、转化制备重组杆状病毒Bacmid质粒,通过转染昆虫细胞制备重组杆状病毒进行蛋白表达。采用细胞免疫荧光、Westernblotting和血凝试验分别对表达的蛋白进行抗原性和生物活性分析。结果在昆虫细胞中成功表达禽流感病毒重组his-H5蛋白,其相对分子质量约为64000,与豚鼠红细胞能够发生凝集反应,免疫荧光与Westernblotting结果提示该重组蛋白能够与禽流感病毒H5标准血清中的抗体特异性结合。结论经杆状病毒-昆虫细胞表达系统获得的重组his-H5抗原具备天然的生物活性和抗原性,该方法为进一步研究禽流感病毒血凝素抗原生物学特性以及制备亚单位疫苗、相关抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 血凝素抗原 杆状病毒 昆虫细胞

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机会性真菌感染中保护性抗体的研究进展 被引量：3

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作者 王艳芳 梁卫华 车小燕 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期188-190,共3页

机会性真菌感染是因机体免疫力下降引发的严重的播散性真菌感染。近30年来，随着继发性免疫功能低下（如肿瘤、烧伤、器官移植、AIDS等）人群的增多、广谱抗生素的大量使用、导管置管的广泛开展等，机会性真菌感染日益增多，且死亡率很... 机会性真菌感染是因机体免疫力下降引发的严重的播散性真菌感染。近30年来，随着继发性免疫功能低下（如肿瘤、烧伤、器官移植、AIDS等）人群的增多、广谱抗生素的大量使用、导管置管的广泛开展等，机会性真菌感染日益增多，且死亡率很高，据报道已经超过50％。主要原因是（1）目前缺乏早期、准确的诊断；（2）对继发于免疫力低下的系统性真菌感染而言， 展开更多

关键词 机会性真菌感染 保护性抗体 治疗性抗体 抗真菌作用

原文传递

Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1的克隆表达及抗体制备 被引量：3

9

作者 王新帅 丘立文 +3 位作者 狄飙 陈伟俊 潘玉先 车小燕 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1478-1480,共3页

目的克隆表达Ⅱ型登革病毒(dengue virus 2,DV2)非结构蛋白1(DV2-NS1)基因,并制备其单克隆抗体。方法提取Ⅱ型登革病毒的RNA,扩增其NS1全长基因片段,经TA克隆将NS1基因克隆至pQE30载体中进行诱导表达,表达产物经变性处理后用Ni柱亲和层... 目的克隆表达Ⅱ型登革病毒(dengue virus 2,DV2)非结构蛋白1(DV2-NS1)基因,并制备其单克隆抗体。方法提取Ⅱ型登革病毒的RNA,扩增其NS1全长基因片段,经TA克隆将NS1基因克隆至pQE30载体中进行诱导表达,表达产物经变性处理后用Ni柱亲和层析纯化并复性,经免疫印迹法(Western Blot)鉴定抗原性。用复性后的NS1蛋白和灭活Ⅱ型登革病毒交替免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞经间接ELISA法、间接免疫荧光法(IFA)进行单抗亚类、特异性的筛选与鉴定。结果携带重组质粒pQE30/DV2-NS1的菌株经诱导,可高效表达重组DV2-NS1蛋白,经复性获得可溶性蛋白,Western Blot证实重组的DV2-NS1蛋白具有抗原性;用重组蛋白和病毒混合免疫,共获得10株抗NS1蛋白的单抗,其中3株为特异性抗DV2-NS1蛋白,与其他3型登革病毒无交叉,另7株为混合交叉型;亚类分析一株为IgG2b,余为IgG1。结论获得重组Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1,并得到10株抗DV2-NS1蛋白的杂交瘤细胞株,为进一步研究NS1的生物学特性和临床诊断试剂建立奠定了基础。 展开更多

关键词 登革病毒 非结构蛋白NS1 克隆 单克隆抗体

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细胞色素P450 1A1在子宫腺肌病组织中的表达 被引量：1

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作者 彭冬先 何援利 丘立文 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期101-103,共3页

目的探讨细胞色素P4501A1(CYP1A1)mRNA在子宫腺肌病组织中的表达及意义。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应法检测42例子宫腺肌病(研究组)异位内膜及在位子宫内膜以及40例非子宫腺肌病患者(对照组)子宫内膜组织中CYP1A1 mRNA的表达。结... 目的探讨细胞色素P4501A1(CYP1A1)mRNA在子宫腺肌病组织中的表达及意义。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应法检测42例子宫腺肌病(研究组)异位内膜及在位子宫内膜以及40例非子宫腺肌病患者(对照组)子宫内膜组织中CYP1A1 mRNA的表达。结果子宫腺肌病异位子宫内膜、在位子宫内膜及对照组子宫内膜CYP1A1 mRNA相对表达强度分别为0.62±0.15、0.42±0.12、0.40±0.14,子宫腺肌病异位子宫内膜CYP1A1 mRNA相对表达强度明显高于在位子宫内膜及对照组子宫内膜(均P<0.01)。子宫腺肌病在位子宫内膜与对照组子宫内膜之间CYP1A1 mRNA相对表达强度比较差异无显著性(P>0.05)。子宫内膜CYP1A1 mRNA相对表达强度增殖期与分泌期比较两组差异均无显著性(P>0.05)。结论异位子宫内膜组织中CYP1A1 mRNA表达明显增加可能与子宫腺肌病的发生和发展相关。 展开更多

关键词 子宫腺肌病 细胞色素P4501A1 子宫内膜 表达 意义

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1组曲霉单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2

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作者 郝卫 潘玉先 +4 位作者 廖志勇 丘立文 王压娣 宋朝阳 车小燕 《中国真菌学杂志》 2008年第3期129-133,共5页

目的制备并鉴定一组抗曲霉不同抗原的单克隆抗体。方法采用烟曲霉细胞壁抗原成分、分泌抗原和灭活分生孢子,分别免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,免疫荧光法鉴定单克隆抗体与曲霉属和念珠菌属抗原的交叉反应。结果获得29株稳定分泌抗曲... 目的制备并鉴定一组抗曲霉不同抗原的单克隆抗体。方法采用烟曲霉细胞壁抗原成分、分泌抗原和灭活分生孢子,分别免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,免疫荧光法鉴定单克隆抗体与曲霉属和念珠菌属抗原的交叉反应。结果获得29株稳定分泌抗曲霉单抗的杂交瘤细胞株,其中用烟曲霉细胞壁抗原成分免疫获得11株,用分泌抗原免疫获得13株,用孢子免疫获得5株;Ig亚类鉴定,11个克隆株为IgG1亚类,3个克隆株为IgG3,15个克隆株为IgM。免疫荧光法鉴定29株单抗特异性识别烟曲霉细胞壁抗原,与其他曲霉抗原有交叉反应。结论29株单克隆抗体,对于建立侵袭性曲霉感染早期诊断方法、筛选曲霉保护性抗体以及研究抗体保护机制奠定了实验基础。 展开更多

关键词 曲霉抗原 单克隆抗体 交叉反应

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子宫内膜异位症异位内膜细胞原代培养方法的改良 被引量：1

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作者 彭冬先 何援利 丘立文 《西北国防医学杂志》 CAS 2011年第2期97-99,共3页

目的:建立一种简易的人异位子宫内膜细胞体外原代培养方法。方法:通过胰蛋白酶消化、贴壁纯化等技术,分离及培养10例子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜细胞。在光学显微镜下观察细胞形态,以免疫细胞化学法鉴定细胞类型。结果:8份标本获... 目的:建立一种简易的人异位子宫内膜细胞体外原代培养方法。方法:通过胰蛋白酶消化、贴壁纯化等技术,分离及培养10例子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜细胞。在光学显微镜下观察细胞形态,以免疫细胞化学法鉴定细胞类型。结果:8份标本获得成功,培养的异位内膜细胞均有腺上皮细胞和间质细胞两种形态细胞。膜上皮细胞和基质细胞分别经角蛋白单抗和波形蛋白单抗免疫组化染色为阳性,腺上皮细胞平均生长时间为5周,间质细胞平均生长时间为14周。结论:成功建立了子宫内膜异位症异位内膜细胞体外原代培养方法,该改良培养法经济、简单、高效。 展开更多

关键词 子宫内膜异位症 异位内膜细胞 原代培养

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曲霉抗原双抗体夹心ELISA法特异性检测 被引量：1

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作者 王艳芳 梁卫华 +2 位作者 郝卫 潘玉先 车小燕 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期476-478,共3页

目的用2组曲霉单克隆抗体(mAbs)建立特异性识别不同种类曲霉抗原的检测方法。方法采用天然烟曲霉抗原免疫,获得广谱针对曲霉抗原的单克隆抗体;采用重组烟曲霉抗原获得特异性针对烟曲霉抗原的单克隆抗体,用间接免疫荧光鉴定,并分别建立2... 目的用2组曲霉单克隆抗体(mAbs)建立特异性识别不同种类曲霉抗原的检测方法。方法采用天然烟曲霉抗原免疫,获得广谱针对曲霉抗原的单克隆抗体;采用重组烟曲霉抗原获得特异性针对烟曲霉抗原的单克隆抗体,用间接免疫荧光鉴定,并分别建立2种双抗体夹心ELISA法,对19种常见的环境和临床分离曲霉株、马尔尼菲氏青霉菌及念珠菌培养液进行检测。结果间接免疫荧光显示,用天然烟曲霉抗原免疫获得的单克隆抗体(mAbs-1)可广谱识别多种曲霉分离株,而重组烟曲霉抗原获得的单克降抗体(mAbs-2)仅能特异性结合临床和环境分离的烟曲霉抗原。用mAbs-1建立的双抗体夹心ELISA法可检测19种常见曲霉株培养液;用特异性针对烟曲霉抗原单克降抗体(mAbs-2)建立的双抗体夹心ELISA法可特异性检测临床和环境分离株烟曲霉培养液;与其他曲霉株无交叉反应;2种双抗体夹心ELISA法与马尔尼菲氏青霉菌及念珠菌培养液均无交叉反应。结论2种曲霉单克降抗体双抗体夹心ELISA法,除可广谱检测环境和临床分离曲霉株,还可以区分烟曲霉与其他曲霉,可作为监测环境、农产品、食品中的曲霉污染和早期诊断曲霉病的新技术手段。 展开更多

关键词 曲霉 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA法 环境监测

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Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1血清型特异性单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1

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作者 王新帅 丘立文 +2 位作者 潘玉先 狄飙 车小燕 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1176-1179,共4页

目的制备并鉴定Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1(DV2-NS1)的血清型特异性单克隆抗体。方法以具有良好抗原性的重组DV2-NS1蛋白与灭活的Ⅱ型登革病毒(DV2)混合免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞经间接ELISA法、IFA法... 目的制备并鉴定Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1(DV2-NS1)的血清型特异性单克隆抗体。方法以具有良好抗原性的重组DV2-NS1蛋白与灭活的Ⅱ型登革病毒(DV2)混合免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞经间接ELISA法、IFA法筛选,ELISA、IFA及WesternBlot对mAbs的类型及亚类、交叉实验及特异性等进行鉴定。结果免疫的Balb/c小鼠经多次融合筛选,共获得14株血清型特异性抗DV2-NS1蛋白的mAbs,其亚类测定两株为IgG2b,余均为IgG1。ELISA和免疫印迹显示这些mAbs与重组DV2-NS1蛋白和DV2抗原均特异性结合,IFA结果显示这14株单抗特异结合Ⅱ型登革病毒,与其它3型登革病毒无交叉。结论成功获得了特异性针对DV2-NS1蛋白的mAb,为进一步研究NS1蛋白的结构和功能以及研制早期诊断试剂奠定基础。 展开更多

关键词 登革病毒 非结构蛋白NS1 单克隆抗体

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钩端螺旋体外膜蛋白LipL32单克隆抗体的制备及鉴定

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作者 王亚琳 张湘燕 +2 位作者 王压娣 车小燕 郭晓奎 《微生物与感染》 2010年第1期26-30,共5页

LipL32是钩端螺旋体外膜中含量最丰富的蛋白,有很好的免疫原性,且在致病性钩端螺旋体中高度保守。在非变性条件下纯化LipL32重组蛋白,与佐剂混匀后免疫BALB/c小鼠,取脾脏细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,然后用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和... LipL32是钩端螺旋体外膜中含量最丰富的蛋白,有很好的免疫原性,且在致病性钩端螺旋体中高度保守。在非变性条件下纯化LipL32重组蛋白,与佐剂混匀后免疫BALB/c小鼠,取脾脏细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,然后用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和有限稀释法分别进行筛选和细胞克隆,获得29株能稳定分泌抗LipL32单克隆抗体的杂交瘤细胞株,它们能识别8个LipL32抗原表位。用这些细胞株制备腹水型抗体,并对特性进行鉴定。用生物素标记这些抗体后两两配对,采用双抗夹心ELISA检测提取自15株致病性钩端螺旋体及其他致病菌的抗原,以评估单克隆抗体的灵敏度和特异度。筛选出1对灵敏度高和特异度好的单克隆抗体,ELISA检测rLipL32的最低浓度为1ng/ml。结果提示,该钩端螺旋体外膜蛋白LipL32单克隆抗体及检测方法有很好的应用前景。 展开更多

关键词 钩端螺旋体 LIPL32 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验

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一组曲霉单克隆抗体的制备及在免疫病理诊断中的研究

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作者 郝卫 潘玉先 +4 位作者 廖志勇 丘立文 王压娣 宋朝阳 车小燕 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1633-1636,共4页

目的研究一组抗曲霉共同抗原的单克隆抗体,在病理组织切片中特异性诊断曲霉感染的免疫病理学方法。方法采用烟曲霉细胞壁抗原、分泌抗原和灭活分生孢子,分别免疫BALB/c小鼠,制备特异性的抗曲霉单克隆抗体,免疫荧光法鉴定单克隆抗体与曲... 目的研究一组抗曲霉共同抗原的单克隆抗体,在病理组织切片中特异性诊断曲霉感染的免疫病理学方法。方法采用烟曲霉细胞壁抗原、分泌抗原和灭活分生孢子,分别免疫BALB/c小鼠,制备特异性的抗曲霉单克隆抗体,免疫荧光法鉴定单克隆抗体与曲霉属和念珠属抗原的交叉反应。以单克隆抗体检测侵袭性烟曲霉感染兔模型的肾、肝脏组织切片和SARS合并侵袭性曲霉感染患者和肺曲霉病患者的肺组织切片。结果特异性抗曲霉共同抗原的单克隆抗体可敏感检测组织病理切片中曲霉菌丝体抗原。结论抗曲霉共同抗原的单克隆抗体在免疫病理诊断中为确定组织中曲霉,区分真菌种属提供了有用的工具,具有很好的临床应用前景。 展开更多

关键词 曲霉 单克隆抗体 免疫组化

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