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CHIKV Real-time PCR检测方法的建立及试剂盒研发 被引量：5
1
作者 郑丽兰 冯海欢 +5 位作者 陈鑫华 张驰 邓茗芝 王晓萌 杨淑君 彭鸿娟 《中国热带医学》 CAS 2018年第4期345-350,共6页
目的建立快速特异检测基孔肯雅病毒的Real-time PCR方法及试剂盒。方法根据发表在Genbank上15株基孔肯雅病毒基因序列全长,应用Clustal W2.0和DNAMAN8软件筛选出位于其E1基因上的种内保守种间特异的目的片段,并据此设计出最优引物。人... 目的建立快速特异检测基孔肯雅病毒的Real-time PCR方法及试剂盒。方法根据发表在Genbank上15株基孔肯雅病毒基因序列全长,应用Clustal W2.0和DNAMAN8软件筛选出位于其E1基因上的种内保守种间特异的目的片段,并据此设计出最优引物。人工合成该基因片段并构建重组质粒,对重组质粒梯度稀释后,再利用SYBR GreenI Real-time PCR的方法检测该特异基因的浓度,建立标准品曲线,用于临床上基孔肯雅病毒的早期诊断。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,标准品的PCR扩增产物的电泳条带长度与目标条带一致,测序结果显示与目标条带序列一致,说明引物与阳性质粒性能良好。经优化确定CHIKV荧光定量PCR反应体系中最佳的引物浓度为350 nmol/L,最佳的反应条件为:50℃2 min;95℃预变性2 min;以95℃15 s,60℃15 s,72℃1 min进行40个循环扩增,在72℃进行荧光采集。根据荧光定量PCR熔解曲线出现特异性单峰,并对黄病毒属成员登革病毒和寨卡病毒的检测为阴性,表明该检测方法特异性高;检测阈值达302拷贝,显示敏感性好,重复试验的变异系数均小于0.1%,说明该实验设计稳定性良好。结论基于该方法的试剂盒具有特异性好、灵敏度高、重复性好、能够快速定量等优点,有利于临床上基孔肯雅病毒的早期诊断,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 基孔肯雅病毒 荧光定量PCR 检测试剂盒
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弓形虫抑制γ干扰素依赖的宿主细胞免疫的研究进展 被引量：3
2
作者 姚礼捷 彭鸿娟 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期503-508,共6页
近年来的研究表明,弓形虫感染小鼠细胞后,分泌的毒力蛋白——棒状体蛋白18(ROP18)能与免疫相关GTP酶(IRG)结合并使其发生磷酸化,致使IRG不能结合至纳虫泡膜上,纳虫泡不发生破裂,弓形虫得以在纳虫泡中生长增殖。此为弓形虫在小鼠细胞内... 近年来的研究表明,弓形虫感染小鼠细胞后,分泌的毒力蛋白——棒状体蛋白18(ROP18)能与免疫相关GTP酶(IRG)结合并使其发生磷酸化,致使IRG不能结合至纳虫泡膜上,纳虫泡不发生破裂,弓形虫得以在纳虫泡中生长增殖。此为弓形虫在小鼠细胞内实现免疫逃避的机制,但是弓形虫感染人细胞后的免疫逃避机制尚未明了。据报道,人细胞中泛素标记的纳虫泡能与内溶酶体系统融合,最终导致弓形虫因酸化而死亡。为此,本文综述了近年来弓形虫抑制宿主免疫功能,尤其是γ干扰素依赖的细胞免疫,以及弓形虫通过阻断泛素标记纳虫泡膜进而成功实现免疫逃避的研究进展。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 IFN-γ 细胞免疫 免疫逃避 泛素蛋白
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应用改良凝集试验(MAT)法检测东北地区野生鸟类弓形虫感染的血清学调查
3
作者 巫水珍 魏海霞 +2 位作者 程鑫宇 戎可 彭鸿娟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期658-663,共6页
目的了解中国东北地区野生鸟类的弓形虫感染情况。方法在对东北地区野生鸟类进行调查时,从翼根静脉采集约500μL全血,凝血后分别分离出血清,采用改良凝集试验(MAT)方法检测血清中弓形虫抗体的阳性率。结果共收集到179份野生鸟类血清样本... 目的了解中国东北地区野生鸟类的弓形虫感染情况。方法在对东北地区野生鸟类进行调查时,从翼根静脉采集约500μL全血,凝血后分别分离出血清,采用改良凝集试验(MAT)方法检测血清中弓形虫抗体的阳性率。结果共收集到179份野生鸟类血清样本,其中弓形虫阳性血清样本20份,总的血清阳性率约为11.17%。179只野生鸟隶属于9目17科31种,其中鸽形目、雀形目、隼形目、鴷形目、佛法僧目、雁形目的血清阳性率分别为5.26%(1/19),9.09%(9/99),14.29%(3/21),15.00%(5/22),16.67%(1/6),和25.00%(1/4)。按不同食性分类,肉食性、杂食性或水生动植物为食的鸟类的血清阳性率分别为12.00%(3/25),10.60%(15/141),15.38%(2/13)。按照鸟类是否迁徙分类,候鸟和留鸟的血清阳性率分别为11.67%(14/120),10.71%(6/59)。结论东北地区的野生鸟类中弓形虫抗体的阳性率约为11.17%,显示弓形虫感染现象常见于野生鸟类。 展开更多
关键词 野生鸟类 弓形虫 改良凝集试验
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白纹伊蚊抗溴氰菊酯品系的筛选及其对登革病毒的易感性 被引量：2
4
作者 贾志荣 刘转转 +5 位作者 王晓明 Tricia WILLIAMS 刘培文 李小聪 闫桂云 陈晓光 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期11-17,共7页
【目的】建立白纹伊蚊Aedes albopictus抗溴氰菊酯的蚊虫品系,对比白纹伊蚊敏感株和抗性株对登革病毒的易感性差异。【方法】采用浸渍法测定溴氰菊酯对白纹伊蚊幼虫的半数致死浓度(LC_(50));再以LC_(50)水平的溴氰菊酯对白纹伊蚊幼虫进... 【目的】建立白纹伊蚊Aedes albopictus抗溴氰菊酯的蚊虫品系,对比白纹伊蚊敏感株和抗性株对登革病毒的易感性差异。【方法】采用浸渍法测定溴氰菊酯对白纹伊蚊幼虫的半数致死浓度(LC_(50));再以LC_(50)水平的溴氰菊酯对白纹伊蚊幼虫进行群体筛选至第11代,并通过接触筒法检测各代成蚊抗性。以白纹伊蚊敏感株和获得的抗性株(第9代)雌蚊吸食含2型登革病毒(DENV-2)的血餐,于感染后0,4,7和10 d解剖蚊虫,收集中肠、卵巢和唾液腺,通过RT-PCR和实时荧光定量PCR分别检测各组织的DENV-2病毒感染率和感染量。【结果】白纹伊蚊经溴氰菊酯筛选至第9代后抗性趋于稳定。第9代抗性株幼虫的LC_(50)为0.053 mg/L,抗性倍数为10.58,成蚊生测的蚊虫死亡率为80%,已达到中度抗性。感染后0 d,所有蚊虫的中肠均可测得DENV-2,而且抗性株的平均病毒感染量高于敏感株;后续时间点敏感株与抗性株蚊虫中肠均保持92.75%~97.18%的病毒感染率,且二株之间无显著性差异(P>0.05)。感染后4 d,两株蚊虫的卵巢中均可检测到DENV-2,感染后7 d和10 d的卵巢病毒感染率均显著高于4 d时(P<0.05),但在7 d和10 d两个时间点,敏感株和抗性株之间均无统计学差异(P>0.05),然而抗性株平均病毒感染量在每一个时间点都显著高于敏感株(P<0.05)。蚊虫唾液腺于感染后7 d检测到DENV-2,10 d时唾液腺的病毒感染率无明显升高且两株蚊虫之间病毒感染率和感染量均无统计学差异(P>0.05)。【结论】经溴氰菊酯的筛选使白纹伊蚊幼虫及成蚊抗性水平逐渐升高,建立了白纹伊蚊抗溴氰菊酯的实验室品系。DENV-2对白纹伊蚊抗性株和敏感株各个组织的感染率相近,但感染量有所不同,说明对溴氰菊酯有中度抗性的白蚊伊蚊对登革病毒的易感性在一定程度上发生了改变。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 抗药性 溴氰菊酯 登革病毒 易感性
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表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌杀蚊幼活性及增效剂型测试 被引量：2
5
作者 邓胜群 邓茗芝 +2 位作者 陈嘉婷 郑丽兰 彭鸿娟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期750-754,共5页
目的构建表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌,检测重组菌对致倦库蚊和白纹伊蚊II龄幼虫的毒力,并测试不同剂型的增效作用。方法分别将AaIT和Cyt2Ba编码基因克隆于pET28a(+)质粒上,并将重组质粒分别转化BL21 E.coli获得... 目的构建表达蝎毒素AaIT或苏云金杆菌毒素Cyt2Ba的大肠埃希菌,检测重组菌对致倦库蚊和白纹伊蚊II龄幼虫的毒力,并测试不同剂型的增效作用。方法分别将AaIT和Cyt2Ba编码基因克隆于pET28a(+)质粒上,并将重组质粒分别转化BL21 E.coli获得分别表达AaIT和Cyt2Ba的工程菌株,经IPTG诱导后,用SDS-PAGE和Western-blot检测重组蛋白的表达;测试不同浓度工程菌菌液对于蚊幼虫的杀灭效果;并将有效的工程菌制成干粉剂,检测其干粉末及其配剂对蚊幼虫的杀灭效果。结果 AaIT和Cyt2Ba重组蛋白在大肠埃希菌中成功表达,但AaIT重组蛋白对蚊幼虫不具有毒性。表达Cyt2Ba重组蛋白的工程菌菌液对白纹伊蚊和致倦库蚊幼虫均具有明显的杀灭作用,48 h的LC50分别为3.00×106和1.25×107cells/m L,其中对白纹伊蚊幼虫的杀灭效果要显著优于对致倦库蚊幼虫的杀灭效果(P<0.001),并且表达Cyt2Ba重组蛋白的工程菌干粉末及其配剂均具有较好的杀蚊幼虫效果。当该工程菌干粉末与干酵母粉、小麦粉和白胡椒粉分别按4∶1、1∶1和1∶4比例制成配剂处理蚊幼虫48 h后,结果显示当质量比为1:1时,配剂杀蚊幼效果显著提高(P=0.044),并且白胡椒粉末配剂效果要显著好于干酵母粉和小麦粉配剂(P=0.002)。结论表达Cyt2Ba的重组大肠埃希菌对蚊幼虫具有较好的杀灭作用,合适配剂的使用可以增强其在蚊虫防制中的效果。 展开更多
关键词 AaIT Cyt2Ba 白纹伊蚊 致倦库蚊 苏云金杆菌毒素
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蚊虫组学研究进展 被引量：1
6
作者 吴恙 周腾飞 +12 位作者 赖泽钿 谢李华 谢雨谷 刘培文 刘通 杨文强 金彬彬 孔翎 郭怡佳 赵宜洁 邓洁琳 顾金保 陈晓光 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期789-797,共9页
近年来,随着高通量测序技术和生物信息学分析技术的成熟和不断革新,蚊虫基因组学、转录组学、小RNA组学也获得了快速发展。迄今为止,已有包括白纹伊蚊、埃及伊蚊、冈比按蚊在内约22种媒介蚊虫的基因组被解析报道。不同蚊种的基因组大小... 近年来,随着高通量测序技术和生物信息学分析技术的成熟和不断革新,蚊虫基因组学、转录组学、小RNA组学也获得了快速发展。迄今为止,已有包括白纹伊蚊、埃及伊蚊、冈比按蚊在内约22种媒介蚊虫的基因组被解析报道。不同蚊种的基因组大小差异很大,且与基因组中的重复序列的多少呈正相关;蚊基因组的解析和比较基因组的分析有助于探索蚊基因组的结构和功能;转录组的研究为蚊虫嗅觉、性别决定、胚胎发育等相关基因的研究提供了有效手段;小RNA组的研究揭示了miRNA和piRNA在蚊媒抗病毒免疫通路中具有重要作用。综上所述,蚊虫组学研究为防治媒介蚊虫和蚊媒传染病病提供了理论基础和数据支撑。 展开更多
关键词 蚊 媒介 基因组学 转录组学 小RNA组学 蚊媒传染病
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