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重组人BMP6在大肠杆菌中可溶表达、纯化及活性分析 被引量：12
1
作者 雷荣悦 乔玉欢 +2 位作者 闫继东 杨爽 朱天慧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期452-459,共8页
BMP6是一种调节成骨细胞和成软骨细胞分化的骨诱导因子,在修复各种骨缺损方面具有很好的应用潜力。有诱骨活性的BMP6是多二硫键的二聚体蛋白,疏水性极强容易聚集沉淀。为了在大肠杆菌中可溶表达具有生物活性的重组人BMP6(rhBMP6),构建... BMP6是一种调节成骨细胞和成软骨细胞分化的骨诱导因子,在修复各种骨缺损方面具有很好的应用潜力。有诱骨活性的BMP6是多二硫键的二聚体蛋白,疏水性极强容易聚集沉淀。为了在大肠杆菌中可溶表达具有生物活性的重组人BMP6(rhBMP6),构建了具有TRX、GST、MBP、CBD融合标签和His6标签的rhBMP6成熟肽原核表达载体,调节诱导温度和IPTG浓度,比较不同融合标签和诱导条件对目的蛋白表达量和溶解性的影响。结果表明,MBP最能有效的增强rhBMP6的溶解性,诱导条件对溶解性影响较小。大肠杆菌BL21 trxB(DE3)这种硫氧还蛋白还原酶缺陷菌株为rhBMP6二硫键在胞质中形成提供了合适的氧化还原环境。MBP和BL21 trxB(DE3)相结合在细胞质中高效可溶表达出了BMP6融合蛋白二聚体。表达产物经亲和层析和凝胶排阻层析纯化后,能诱导成肌细胞系C2C12向成骨细胞方向转化。 展开更多
关键词 BMP6 MBP BL21 trxB(DE3) 可溶性
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重组人骨形态发生蛋白2在CHO细胞中的表达、鉴定及活性分析 被引量：9
2
作者 张道永 杨爽 +2 位作者 吕树军 闫继东 朱天慧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期968-972,共5页
构建真核表达载体pCDNA3.1(+)-hBMP-2,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO-dhfr-细胞,以含有700μg/mLG418的IMDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-2的表达量。收集的rhBMP-2蛋白进行Westernblot检测,还原蛋白样品电泳产生一... 构建真核表达载体pCDNA3.1(+)-hBMP-2,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO-dhfr-细胞,以含有700μg/mLG418的IMDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-2的表达量。收集的rhBMP-2蛋白进行Westernblot检测,还原蛋白样品电泳产生一条大小约为18kD的特异性条带,非还原蛋白样品电泳产生一条大小约为30kD的特异性条带,提示表达的rhBMP-2是经过糖基化修饰的,且以同源二聚体形式分泌表达。单细胞分离培养得到14株rCHO(hBMP-2)单克隆细胞株,ELISA法检测rhBMP-2表达水平,最高可达7.83μg/24h/106cells。活性分析结果表明,表达的rhBMP-2具有很强的生物学活性。 展开更多
关键词 人骨形态发生蛋白2 CHO 共转染 C2C12 碱性磷酸酶
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电穿孔法基因转染哺乳动物细胞的应用 被引量：4
3
作者 乔玉欢 杨爽 +3 位作者 袁伟 杜金 张杰 朱天慧 《实验室科学》 2007年第1期69-71,共3页
应用电穿孔技术转染pEGFP于哺乳动物细胞,讨论了电穿孔技术的应用条件,影响因素,初步确定了COS7、Hela、HepG2、K562、Jurkat等细胞系的转染条件,为今后的分子生物学研究打下了良好的基础。
关键词 电穿孔 哺乳动物细胞 绿色荧光蛋白基因
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原癌基因LMO2短剪切模式的结合蛋白鉴定及功能分析
4
作者 袁伟 杨爽 +4 位作者 孙伟 杜君 翟春利 王兆琦 朱天慧 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期325-328,共4页
目的研究原癌基因LMO2短剪切模式（LMO2-C）的结合蛋白在白血病细胞K562中的表达及功能分析。方法利用麦芽糖结合蛋白（MBP）沉淀技术和哺乳动物双杂交技术研究LMO2-C的结合蛋白在K562细胞中的表达；半定量RT-PCR检测过表达LMO2-C的K56... 目的研究原癌基因LMO2短剪切模式（LMO2-C）的结合蛋白在白血病细胞K562中的表达及功能分析。方法利用麦芽糖结合蛋白（MBP）沉淀技术和哺乳动物双杂交技术研究LMO2-C的结合蛋白在K562细胞中的表达；半定量RT-PCR检测过表达LMO2-C的K562细胞中红系发育的标志性基因GPA的表达水平。结果MBP原核表达系统成功表达并被纯化出可溶性MBP-LMO2-C结合蛋白，利用MBP沉淀技术验证了LMO2-C能与K562细胞中内源性的GATA-1、LDB1结合；哺乳动物双杂交试验进一步证明LMO2-C能与LDB1结合，而且其过表达能够抑制LMO2-L与LDB1的结合，抑制率达（81．13±0．68）％；半定量RT-PCR结果显示在过表达LMO2-C的K562细胞中，GPA基因相对表达水平下调（51．00±1．58）％。结论LMO2-C能结合K562细胞中内源性GATA-1、LDB1蛋白，并能下调红系发育的标志性基因GPA的表达。 展开更多
关键词 基因 LMO2-C GATA1 LIM结构域结合蛋白 麦芽糖结合蛋白沉淀 双杂交系统技术
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骨形态发生蛋白-6的研究进展 被引量：4
5
作者 吴双庆 朱天慧 《国外医学（遗传学分册）》 CAS 2003年第6期350-353,共4页
骨形态发生蛋白 (BMPs)属于转化生长因子 -β(TGF-β)超家族的成员 ,最初因其能促进成骨细胞、成软骨细胞的分化和诱导异位骨的形成而得名。随着研究的深入 ,BMPs的广泛生物学功能不仅限于其诱导成骨活性 ,而且涉及几乎全身所有系统的... 骨形态发生蛋白 (BMPs)属于转化生长因子 -β(TGF-β)超家族的成员 ,最初因其能促进成骨细胞、成软骨细胞的分化和诱导异位骨的形成而得名。随着研究的深入 ,BMPs的广泛生物学功能不仅限于其诱导成骨活性 ,而且涉及几乎全身所有系统的发育和形成 ,包括心血管、胃肠、呼吸、泌尿生殖、体被及神经系统的胚胎发育、生长及分化等。 BMP- 6是 BMPs家族成员中之一 ,除了具有 BMP家族的一些特征外 ,还有其独特的分子生物学功能。本文主要阐述了 BMP- 6在近五年中的研究进展 ,包括其结构特征、信号的传递、生物学功能的多样性及其临床应用前景。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白-6 转化生长因子-Β 生物学功能 信号传递
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