目的构建及鉴定Livin基因siRNA慢病毒表达载体并观察其对喉癌细胞HEP-2增殖的影响。方法从基因库获得Livin基因序列,设计3段siRNA序列;经MluⅠ和ClaⅠ双酶切后克隆入慢病毒表达载体p Len OR-THM,构建p Len OR-THMLivin-siRNA重组质粒,...目的构建及鉴定Livin基因siRNA慢病毒表达载体并观察其对喉癌细胞HEP-2增殖的影响。方法从基因库获得Livin基因序列,设计3段siRNA序列;经MluⅠ和ClaⅠ双酶切后克隆入慢病毒表达载体p Len OR-THM,构建p Len OR-THMLivin-siRNA重组质粒,将其转化感受态细菌DH5α,对阳性克隆进行筛选后,用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切及测序鉴定正确后用脂质体转染293T细胞包装病毒颗粒,感染293T细胞及HEP-2细胞,用荧光定量PCR检测其对HEP-2增殖的影响。结果慢病毒表达载体p Len OR-THM-Livin-siRNA被成功构建;转染293T细胞组装病毒液有绿色荧光,并主要表达在细胞膜上;浓缩后的病毒液感染293T细胞及HEP-2细胞均有绿色荧光表达。SH2-R组的Livin蛋白相对表达量最低为(12.31±4.43)%;SH2-R组与SH2-F、NC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了Livin基因siRNA慢病毒载体;HEP-2细胞Livin蛋白表达受到抑制。展开更多
文摘目的构建及鉴定Livin基因siRNA慢病毒表达载体并观察其对喉癌细胞HEP-2增殖的影响。方法从基因库获得Livin基因序列,设计3段siRNA序列;经MluⅠ和ClaⅠ双酶切后克隆入慢病毒表达载体p Len OR-THM,构建p Len OR-THMLivin-siRNA重组质粒,将其转化感受态细菌DH5α,对阳性克隆进行筛选后,用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切及测序鉴定正确后用脂质体转染293T细胞包装病毒颗粒,感染293T细胞及HEP-2细胞,用荧光定量PCR检测其对HEP-2增殖的影响。结果慢病毒表达载体p Len OR-THM-Livin-siRNA被成功构建;转染293T细胞组装病毒液有绿色荧光,并主要表达在细胞膜上;浓缩后的病毒液感染293T细胞及HEP-2细胞均有绿色荧光表达。SH2-R组的Livin蛋白相对表达量最低为(12.31±4.43)%;SH2-R组与SH2-F、NC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了Livin基因siRNA慢病毒载体;HEP-2细胞Livin蛋白表达受到抑制。
