为筛选适用于青钱柳(Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja)不同组织器官的稳定内参基因,本研究利用青钱柳花芽的转录组测序数据,选取Actin、CYP、EIF、GAPDH、TUB、TEF和18S r RNA共7个看家基因作为候选内参基因;以根、茎、叶、雌花...为筛选适用于青钱柳(Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja)不同组织器官的稳定内参基因,本研究利用青钱柳花芽的转录组测序数据,选取Actin、CYP、EIF、GAPDH、TUB、TEF和18S r RNA共7个看家基因作为候选内参基因;以根、茎、叶、雌花和雄花为材料,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对各候选内参基因进行扩增。结合Norm Finder、ge Norm和BestKeeper等软件分析各候选基因的表达稳定性,用RefFinder综合分析获得适宜的内参基因。结果表明,不同组织中各内参基因表达稳定性具有一定差别,稳定性综合排序从高到低为EIF>18S r RNA>TEF>GAPDH>CYP>Actin>TUB。但由于EIF较18S r RNA的CT值差异较大,即18S r RNA在各组织中的表达量更高,因此本研究确定18S r RNA为青钱柳荧光定量分析的最适内参基因,为后续相关基因功能性研究奠定理论基础。展开更多
文摘为筛选适用于青钱柳(Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja)不同组织器官的稳定内参基因,本研究利用青钱柳花芽的转录组测序数据,选取Actin、CYP、EIF、GAPDH、TUB、TEF和18S r RNA共7个看家基因作为候选内参基因;以根、茎、叶、雌花和雄花为材料,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对各候选内参基因进行扩增。结合Norm Finder、ge Norm和BestKeeper等软件分析各候选基因的表达稳定性,用RefFinder综合分析获得适宜的内参基因。结果表明,不同组织中各内参基因表达稳定性具有一定差别,稳定性综合排序从高到低为EIF>18S r RNA>TEF>GAPDH>CYP>Actin>TUB。但由于EIF较18S r RNA的CT值差异较大,即18S r RNA在各组织中的表达量更高,因此本研究确定18S r RNA为青钱柳荧光定量分析的最适内参基因,为后续相关基因功能性研究奠定理论基础。
