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黄芪对双歧杆菌生长的影响及其抗黑色素瘤作用研究 被引量:14
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作者 戴宇青 蒋月 +3 位作者 张燕 韩超 徐根兴 华子春 《药物生物技术》 CAS 2017年第3期200-205,共6页
研究黄芪对双歧杆菌生长和活菌数的影响,并探索黄芪联合双歧杆菌对小鼠黑色素瘤模型的作用。在不同培养条件下,利用全自动生长曲线分析仪实时测定光密度值A600的变化,与对照组相比,比较黄芪对双歧杆菌活菌数的影响。建立小鼠黑色素瘤动... 研究黄芪对双歧杆菌生长和活菌数的影响,并探索黄芪联合双歧杆菌对小鼠黑色素瘤模型的作用。在不同培养条件下,利用全自动生长曲线分析仪实时测定光密度值A600的变化,与对照组相比,比较黄芪对双歧杆菌活菌数的影响。建立小鼠黑色素瘤动物模型,测定肿瘤体积大小变化和小鼠生存率,研究黄芪联合双歧杆菌对荷瘤小鼠的抑瘤效果。结果表明,与不加药空白对照相比,黄芪组不仅能提高300μL小体系下双歧杆菌的生长,而且当体系扩大至1 m L后结果相同,说明不同培养时间和不同培养体系下,黄芪都具有促进双歧杆菌生长的作用。通过进一步对双歧杆菌生长曲线的分析发现,黄芪组较对照组对双歧杆菌的生长速率虽没有显著影响,但是能显著延长双歧杆菌到达平台期的时间,从而提高菌量。同时,黄芪对双歧杆菌生长的促进作用具有浓度依赖关系,浓度越高,促进效果越好,以1 g/m L浓度的效果最佳。在动物实验中,与NS组相比,黄芪与双歧杆菌联用组抑瘤效果最显著,其肿瘤体积明显小于其它各组(P<0.05),同时对荷瘤小鼠的生存率也明显延长(P<0.05)。黄芪在体外可促进双歧杆菌的生长,其抗肿瘤作用可能与提高双歧杆菌的数量相关,该特性具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 黄芪 补益 双歧杆菌 生长曲线 黑色素瘤 益生菌
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内皮抑素变体蛋白的表达及复性与纯化工艺的优化 被引量:2
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作者 王博楠 徐根兴 华子春 《药物生物技术》 CAS 2019年第3期199-203,共5页
目前抗血管新生已经成为一种有效的癌症治疗手段。内皮抑素(Endostatin)可以抑制血管新生和形成,已经作为抑癌药物上市并作为辅助用药已起到较好的治疗效果。课题组构建了将内皮抑素与穿膜肽九聚精氨酸融合的内皮抑素变体,拟促进内皮抑... 目前抗血管新生已经成为一种有效的癌症治疗手段。内皮抑素(Endostatin)可以抑制血管新生和形成,已经作为抑癌药物上市并作为辅助用药已起到较好的治疗效果。课题组构建了将内皮抑素与穿膜肽九聚精氨酸融合的内皮抑素变体,拟促进内皮抑素进入细胞膜以期达到更好的治疗效果。该研究以原核表达质粒p BV222为载体,构建了带有His标签的内皮抑素变体(9R-Endo-9R),内皮抑素变体蛋白的相对分子质量约21 k。在1 L的发酵体系下,蛋白以包涵体形式表达,为了深入探究该内皮抑素变体的生物学性能,该研究探索以变复性的方法获得可溶性内皮抑素变体,并对纯化方法进行优化以获得较高回收率。CCK-8实验结果表明该内皮抑素变体对血管内皮细胞具有增殖抑制作用,显示优化后的复性和纯化的内皮抑素变体具有较好的生物学活性。该研究为内皮抑素变体的进一步药学性质的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 内皮抑素 变体 包涵体 变复性 表达纯化 方法优化
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Her2纳米抗体与改构内皮抑素融合蛋白的克隆、表达和活性研究 被引量:2
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作者 谷鹏 李家璜 +1 位作者 徐根兴 华子春 《药物生物技术》 CAS 2017年第3期194-199,共6页
开发一种靶向于乳腺癌的双功能蛋白,探索其对乳腺癌细胞的抑制效果和靶向性。通过分子生物学手段构建融合蛋白的原核表达质粒,并对其进行大量表达,包涵体变复性方法获取可溶性目的蛋白。通过CCK8实验检测可溶性目的蛋白对乳腺癌生长的... 开发一种靶向于乳腺癌的双功能蛋白,探索其对乳腺癌细胞的抑制效果和靶向性。通过分子生物学手段构建融合蛋白的原核表达质粒,并对其进行大量表达,包涵体变复性方法获取可溶性目的蛋白。通过CCK8实验检测可溶性目的蛋白对乳腺癌生长的抑制效果,通过细胞免疫荧光实验检测可溶性目的蛋白的靶向特异性和细胞内化作用。使用重叠PCR定点突变技术成功构建出改造型内皮抑素基因endo(m),而后通过限制性酶切法将其连接到原核表达质粒pET28a-Dim上,成功构建出融合表达质粒pET28a-Dim-endo(m)。融合蛋白Dim-endo(m)是以包涵体形式被表达,选用包涵体变复性方法获取大量可溶性目的蛋白。细胞免疫荧光检测发现融合蛋白可以结合到乳腺癌Her2表达阳性的SKBR3细胞,同时也能抑制该肿瘤细胞的增殖。pET28a-Dim-endo(m)成功构建并表达,融合蛋白能和乳腺癌细胞Her2受体结合,并在穿膜肽的作用下进入细胞,同时具有一定的抑制肿瘤细胞增殖的作用,可用于后续研究和进一步开发相应的乳腺癌检测试剂。 展开更多
关键词 乳腺癌 内皮抑素 纳米抗体 人表皮生长因子受体2 VHH抗体 包涵体 细胞穿膜肽
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一种含ELP60基因的载体pRELPN促进大肠杆菌的外源基因的高表达 被引量:1
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作者 徐根兴 戴宇青 赵广义 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1004-1012,共9页
类弹性蛋白多肽(ELP)为含有人工合成的ELP60基因的表达载体pRELPN,能促使外源基因在大肠杆菌中的高表达。当ELP60在大肠杆菌表达载体p ET28a的多克隆位点被克隆后,其自身的表达低,也不与目的基因构成ELP融合蛋白质,而是促进克隆在ELP60... 类弹性蛋白多肽(ELP)为含有人工合成的ELP60基因的表达载体pRELPN,能促使外源基因在大肠杆菌中的高表达。当ELP60在大肠杆菌表达载体p ET28a的多克隆位点被克隆后,其自身的表达低,也不与目的基因构成ELP融合蛋白质,而是促进克隆在ELP60基因后的含起始密码ATG的外源目的基因独立高表达。外源目的基因表达量占宿主蛋白的20%~60%,比用p ET28a载体表达的外源基因表达量高2~10倍。此类表达载体pRELPN适合于表达包括抗体、抗原、酶、重组蛋白质、多肽及ELP融合蛋白质等的外源基因的独立高表达。这些结果表明,pRELPN代表了一种有效的表达载体,有助于解决在原核表达中,所受限的普通载体对外源基因低表达或不表达所导致的不能产业化的问题。 展开更多
关键词 类弹性蛋白多肽 ELP60基因表达载体pRELPN 重组蛋白质
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双歧杆菌表达载体及启动子的筛选验证 被引量:1
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作者 崔恩情 徐根兴 华子春 《中国科技论文在线精品论文》 2021年第3期371-381,共11页
双歧杆菌作为食品级益生菌,其基因工程具有广阔的应用前景和商业价值,但是双歧杆菌的遗传操作系统还不完备,尚处于探索阶段.利用两种载体pLC-nick和pLH01,六种启动子para、pnis、pPRPL、pgap、phup和pHU,采用红色荧光蛋白(red fluoresce... 双歧杆菌作为食品级益生菌,其基因工程具有广阔的应用前景和商业价值,但是双歧杆菌的遗传操作系统还不完备,尚处于探索阶段.利用两种载体pLC-nick和pLH01,六种启动子para、pnis、pPRPL、pgap、phup和pHU,采用红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)作为报告基因,共构建了12个表达质粒.将重组质粒电转至双歧杆菌中,对于诱导型启动子para加入0.2%(质量分数)L-阿拉伯糖,启动子pnis加入10 mmol/L乳链菌肽诱导RFP蛋白表达,启动子pPRPL则在42℃诱导8 h后表达RFP蛋白.通过检测RFP蛋白的荧光强度,证明在双歧杆菌中利用pLH01载体,phup和pPRPL启动子更有利于RFP蛋白的高效表达.本研究为后续重组双歧杆菌的构建及应用奠定了基础. 展开更多
关键词 微生物药物学 双歧杆菌 表达载体 启动子 红色荧光蛋白
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犬有机磷农药中毒的解救
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作者 金程 张燕 《当代畜牧》 2016年第11Z期58-59,共2页
有机磷农药是一种毒性较强的接触性和内吸性农药,具有高度的脂溶性,会对动物消化道、呼吸道和皮肤黏膜产生严重的危害。犬在误食有机磷农药之后,会对消化道、呼吸道黏膜产生损害,严重的可以导致中毒死亡。因此,饲主在养殖过程中,一定要... 有机磷农药是一种毒性较强的接触性和内吸性农药,具有高度的脂溶性,会对动物消化道、呼吸道和皮肤黏膜产生严重的危害。犬在误食有机磷农药之后,会对消化道、呼吸道黏膜产生损害,严重的可以导致中毒死亡。因此,饲主在养殖过程中,一定要做好饲养管理工作,在使用含有有机磷农药进行驱虫过程中,一定要注意使用量,避免对犬健康生长造成威胁。笔者主要结合实际情况,就犬有机磷农药中毒的解救措施进行了分析,希望通过本次研究对同行有所助益。 展开更多
关键词 有机磷农药 中毒 解救对策
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