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猪链球菌2型国内分离株毒力相关蛋白的分析 被引量:37
1
作者 欧瑜 陆承平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期105-109,共5页
提纯猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1的毒力相关蛋白溶菌酶释放蛋白 (muramini dase releasedprotein ,MRP)和胞外因子 (extracellularfacter,EF) ,制备其抗体供免疫转印之用。另提取猪源链球菌 1 7株国内分离株、1株德国分离株及 1株猪... 提纯猪链球菌 2型江苏分离株HA980 1的毒力相关蛋白溶菌酶释放蛋白 (muramini dase releasedprotein ,MRP)和胞外因子 (extracellularfacter,EF) ,制备其抗体供免疫转印之用。另提取猪源链球菌 1 7株国内分离株、1株德国分离株及 1株猪链球菌 2型人分离株的胞壁和胞外蛋白 ,经SDS PAGE ,与HA980 1株的MRP和EF的抗体作免疫转印。 1 1株MRP阳性 ,1 0株EF及EF 阳性 ,MRP及EF的分布存在 4种表型 :MPR+ EF+ (8 1 9) ,MRP+ EF (1 1 9) ,MRP+ EF- (1 1 9) ,MRP- EF- (1 0 1 9)。 展开更多
关键词 猪链球菌 溶菌酶释放蛋白 胞外因子 毒力相关蛋白
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PCR扩增特异性16SrDNA和溶血素基因检测致病性嗜水气单胞菌 被引量:33
2
作者 储卫华 陆承平 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期79-82,共4页
根据已发表的气单胞菌16SrDNA基因序列及气单胞菌气溶素(aerolysin)基因序列,设计了2对引物,建立了检测致病性嗜水气单胞菌的PCR方法。通过对12株气单胞菌的检测,发现16SrDNA引物具有高度的特异性,仅对嗜水气单胞菌扩增阳性。而Aero基... 根据已发表的气单胞菌16SrDNA基因序列及气单胞菌气溶素(aerolysin)基因序列,设计了2对引物,建立了检测致病性嗜水气单胞菌的PCR方法。通过对12株气单胞菌的检测,发现16SrDNA引物具有高度的特异性,仅对嗜水气单胞菌扩增阳性。而Aero基因引物检测结果与采用生物学方法(鲜血平板法)检测的结果符合率为97.2%,且具有高度的敏感性,可检测最低1fg的模板。将16SrDNA与Aero基因结合PCR方法检测致病性嗜水气单胞菌与用致病性嗜水气单胞菌检测试剂盒的符合率为94.4%。该方法的建立为致病性嗜水气单胞菌的检测提供了一种简便、快速的途径,是一种比较实用的致病性嗜水气单胞菌的检测方法。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 16S RDNA 气溶素基因 聚合酶链式反应 检测
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鲟鱼嗜水气单胞菌的分离与鉴定 被引量:24
3
作者 储卫华 于勇 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2003年第2期16-17,共2页
关键词 致病性 药物敏感性 鲟鱼 嗜水气单胞菌 分离 鉴定
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筛选用转座子Tn916诱变的具有免疫原性的嗜水气单胞菌蛋白酶缺失株 被引量:10
4
作者 储卫华 陆承平 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期244-248,共5页
以携带质粒pAM120(Apr、Tcr/Tn916)的大肠杆菌CG120株为供体菌,与受体菌嗜水气单胞菌J-1株,采用滤膜接合法进行接合转移,在选择平板(含Tc、cfz和脱脂奶)上进行筛选,筛选出6株蛋白酶缺失株(ECPase-),ECPase-菌株其生长速度,对正常... 以携带质粒pAM120(Apr、Tcr/Tn916)的大肠杆菌CG120株为供体菌,与受体菌嗜水气单胞菌J-1株,采用滤膜接合法进行接合转移,在选择平板(含Tc、cfz和脱脂奶)上进行筛选,筛选出6株蛋白酶缺失株(ECPase-),ECPase-菌株其生长速度,对正常鲫血清的抗性降低,用脱脂奶平板法及底物法检测,蛋白酶产量明显降低。与亲本J-1株相比,突变株致病力降低,对鲫的半数致死量大于108(J-1株对鲫的半数致死量为5×103)。用ECPase-突变株MJ-1株的18h培养物(5×106CFU)接种健康鲫,不产生亲本J-1株引起的病变及死亡。用MJ-I活菌免疫鲫,在第5周产生较高的凝集抗体,且对强毒株J-1的攻击有保护作用。表明蛋白酶是嗜水气单胞菌的一个重要的毒力因子,ECPase-突变株仍具有免疫原性。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 胞外蛋白酶 Tn916诱变 免疫原性 鱼类 毒力
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嗜水气单胞菌J-1株丝氨酸蛋白酶基因克隆与序列分析 被引量:18
5
作者 储卫华 陆承平 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期84-88,共5页
根据已发表的气单胞菌胞外蛋白酶基因核苷酸序列,设计和合成了一对引物,以嗜水气单胞菌AhJ-1的基因组DNA为模板,通过PCR技术,扩增到约900bp的丝氨酸蛋白酶基因片段,并克隆到质粒载体pGEM-T中进行测序和分析,结果表明扩增的丝氨酸蛋白酶... 根据已发表的气单胞菌胞外蛋白酶基因核苷酸序列,设计和合成了一对引物,以嗜水气单胞菌AhJ-1的基因组DNA为模板,通过PCR技术,扩增到约900bp的丝氨酸蛋白酶基因片段,并克隆到质粒载体pGEM-T中进行测序和分析,结果表明扩增的丝氨酸蛋白酶基因片段与已发表的嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶Ahe2的同源性有87%,扩增片段编码343个氮基酸,推测的分子量为35700,计算机软件分析表明编码的氨基酸有较高的抗原性,可作为核酸疫苗的侯选基因片段。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 J-1株 丝氨酸蛋白酶 基因克隆 序列分析 水生动物 病原菌 保护性抗原 基因工程疫苗
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犬α干扰素基因的高效表达及其活性测定 被引量:21
6
作者 王艳 王海震 +1 位作者 曹瑞兵 陈溥言 《中国病毒学》 CSCD 2005年第2期189-192,共4页
以伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导的犬外周血淋巴细胞中提取的总RNA为模板,通过RT PCR的方法克隆扩增出犬α干扰素基因,将所扩增基因克隆于原核表达载体pBV220 并进行测序,结果显示该基因与GenBank上所公布的犬α干扰素基因同源性为100%。将... 以伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导的犬外周血淋巴细胞中提取的总RNA为模板,通过RT PCR的方法克隆扩增出犬α干扰素基因,将所扩增基因克隆于原核表达载体pBV220 并进行测序,结果显示该基因与GenBank上所公布的犬α干扰素基因同源性为100%。将重组表达载体转入宿主菌进行温敏诱导表达,表达产物经SDS PAGE分析,证明目的蛋白以包涵体的形式存在,大小约为19kDa。将表达产物变性、复性、透析、纯化处理后加入犬肾细胞上,用水泡性口炎病毒攻毒,测出重组的CaIFN α具有较高的抗病毒作用,生物活性达到5.11×106 ∪/ ,重组蛋白质的含量约为13 /L。 展开更多
关键词 犬α干扰素基因 原核表达 重组干扰素
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猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体的研制 被引量:7
7
作者 韩庆安 姜平 +5 位作者 董永毅 郝勤宗 裘孝良 班进林 陈溥言 蔡宝祥 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期145-147,共3页
利用猪繁殖与呼吸道综合征病毒 ( PRRSV)国内分离株 J1 ,采用反复差速离心法制备免疫抗原 ,长程免疫法免疫 BALB/ c小鼠 ,用间接 ELISA方法检测抗体 ,通过细胞融合技术 ,并经 3次亚克隆获得了 1 0株能稳定分泌抗 PRRSV单抗的杂交瘤细胞... 利用猪繁殖与呼吸道综合征病毒 ( PRRSV)国内分离株 J1 ,采用反复差速离心法制备免疫抗原 ,长程免疫法免疫 BALB/ c小鼠 ,用间接 ELISA方法检测抗体 ,通过细胞融合技术 ,并经 3次亚克隆获得了 1 0株能稳定分泌抗 PRRSV单抗的杂交瘤细胞克隆株 ( A1 D7H1 0 ,A1 D7H1 1 ,A1 E7H9,A1 E7D9,A2 D8E7,A2 D8B1 1 ,B3D1 1 D6 ,B3D1 1 E6 ,B2 G9A9,B2 G9F2 )。这些细胞经体外连续传代 1个月和冻存 2个月复苏后 ,均能稳定分泌高效价的抗 PRRSV抗体 ,并能在小鼠体内形成肿瘤 ,有效诱导产生高效价 PRRSV抗体腹水 ( ELISA效价为1 0 - 3~ 1 0 - 4 )。其中有 7株能与美洲弱毒株 展开更多
关键词 PRRSV 单克隆抗体 杂交瘤细胞株 腹水效价
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PRRSV NJ-a株ORF5基因A表位的修饰与糖基化位点的突变对其DNA疫苗免疫效力的影响 被引量:13
8
作者 郑其升 李鹏 +5 位作者 毕志香 牛明福 曹瑞兵 周斌 陈德胜 陈溥言 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期33-39,共7页
为了提高PRRSVORF5基因的免疫效力,对ORF5基因进行了改造,将CpG序列和通用型辅助性T淋巴细胞表位插入A表位与B表位之间,并对N33与N51位糖基化位点进行了点突变,获得改造的ORF5基因。在此基础上构建了由两个CMV启动子调控的共表达改造的O... 为了提高PRRSVORF5基因的免疫效力,对ORF5基因进行了改造,将CpG序列和通用型辅助性T淋巴细胞表位插入A表位与B表位之间,并对N33与N51位糖基化位点进行了点突变,获得改造的ORF5基因。在此基础上构建了由两个CMV启动子调控的共表达改造的ORF5(MORF5)与ORF6基因的真核表达质粒pcDNA-M5A-6A。经Western-blot与IFA验证真核质粒的体外表达后,免疫6周龄Balb/c小鼠,利用微量中和试验检测免疫后的中和抗体,利用MTT法检测免疫后淋巴细胞的增生情况,并与未改造ORF5基因真核表达质粒pcDNA-5A-6A、弱毒疫苗以及灭活疫苗的免疫效果进行比较。结果表明,pcDNA-M5A-6A不但能够刺激免疫小鼠在较短的时间内产生更高水平的中和抗体,而且可以诱导产生更强烈的T淋巴细胞增殖反应。所构建的共表达PRRSV改造的ORF5基因与ORF6基因的DNA疫苗pcDNA-M5A-6A,能够较好的诱发小鼠产生较高的特异性针对PRRSV的中和抗体和细胞免疫应答,为研究能够更好地防制PRRSV的新型疫苗提供了新的思路。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 基因改造 DNA疫苗
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嗜水气单胞菌胞外蛋白酶的化学修饰 被引量:8
9
作者 储卫华 陆承平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期372-375,共4页
蛋白酶是嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)的重要致病因子 .为研究其结构与功能之间的关系 ,用DEPC、EDC、PMSF、N AI等 9种化学修饰剂处理嗜水气单胞菌J 1株胞外蛋白酶ECPase54,然后检测残余酶活力 ,借以研究酶分子中氨基酸侧链基... 蛋白酶是嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)的重要致病因子 .为研究其结构与功能之间的关系 ,用DEPC、EDC、PMSF、N AI等 9种化学修饰剂处理嗜水气单胞菌J 1株胞外蛋白酶ECPase54,然后检测残余酶活力 ,借以研究酶分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系 .结果表明 ,羧基、丝氨酸、ε 氨基、胍基等残基与酶活性无关 ;半胱氨酸残基与酶活性也无直接关系 ;而色氨酸、组氨酸、酪氨酸残基侧链以及二硫键的化学修饰引起酶活性的大幅度的下降 ,说明色氨酸、组氨酸。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 包外蛋白酶 化学修饰 酶活性
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猪繁殖与呼吸综合征 被引量:6
10
作者 吴加强 姜平 《畜牧与兽医》 北大核心 1999年第S1期42-46,共5页
美国早在1987年就首先报道过猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),荷兰则于1991年首先分离到病毒。现在该病在许多养猪国家流行,成为造成猪繁殖障碍和呼吸道疾病的一个重要因素。国内外很多学者对其进行了大量研究,本文就此综述如下。1 病原... 美国早在1987年就首先报道过猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),荷兰则于1991年首先分离到病毒。现在该病在许多养猪国家流行,成为造成猪繁殖障碍和呼吸道疾病的一个重要因素。国内外很多学者对其进行了大量研究,本文就此综述如下。1 病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV... 展开更多
关键词 肺泡巨噬细胞 猪繁殖与呼吸综合征 持续性感染 分离株 混合感染 病毒分离 免疫应答 核衣壳蛋白 感染后 单核细胞
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猪链球菌2型溶血素的化学修饰 被引量:8
11
作者 方绍庆 陆承平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期395-399,共5页
用DTT、H2 O2 、DEPC、EDC、N AI、NBS、PCMB、2 ,3 Diacetyl和SA等 9种化学修饰剂 ,处理猪链球菌 2型江苏分离株提纯的溶血素 ,研究其分子中氨基酸侧链基团与其溶血活性的关系。结果表明 ,巯基、氨基、羧基和酪氨酸残基等与其溶血活性... 用DTT、H2 O2 、DEPC、EDC、N AI、NBS、PCMB、2 ,3 Diacetyl和SA等 9种化学修饰剂 ,处理猪链球菌 2型江苏分离株提纯的溶血素 ,研究其分子中氨基酸侧链基团与其溶血活性的关系。结果表明 ,巯基、氨基、羧基和酪氨酸残基等与其溶血活性无关 ,而色氨酸、组氨酸和精氨酸的化学修饰引起溶血活性的大幅度下降 ,二硫键的化学修饰引起溶血活性的大幅度增强。显示色氨酸、组氨酸和精氨酸残基是该溶血素的活性必需基团 ,二硫键的断裂可引起其活性增强。 展开更多
关键词 猪链球菌 溶血素 化学修饰 溶血活性 氨基酸侧链基团
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RT-PCR法检测我国东南沿海凡纳滨对虾的桃拉综合征病毒 被引量:9
12
作者 黄新新 莫胜兰 陆承平 《中国病毒学》 CSCD 2005年第5期546-548,共3页
Taura syndrome virus(TSV) is one of the important pathogenic agents of Penaeus vannami,which causes prawn infection with serious disease in China in recent years.245 samples collected from 26 farms of Zhangzhou,Xiamen... Taura syndrome virus(TSV) is one of the important pathogenic agents of Penaeus vannami,which causes prawn infection with serious disease in China in recent years.245 samples collected from 26 farms of Zhangzhou,Xiamen,Shenzhen,Yangjiang,Ningbo and Guangzhou.were detected for TSV with RT-PCR,the positive rates were 100%,33.3%,40.7%,50% and 40%,respectively.Southern blotting and nucleotide sequencing were performed to confirm the specificity of the amplified RT-PCR products.The homology of 231bp nucleotide sequences reached 98.3%-100% when analysed and compared with the GenBank using the BLAST program.Phylogenetic analyses clustered the TSV isolates into two groups: one contained USA and Chinese Taiwan isolates;the other contained Vietnam isolate(YN1) and 21 isolates of China's Mainland.The 21 China isolates clustered into one branch,while the YN1 distributed in another branch.5 strains from Guangzhou and 2 strains from Shenzhen constituted one subcluster of the China branch. 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 RT—PCR 桃拉综合征病毒(TSV) 核酸测序
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犬瘟热病毒南京株 H 蛋白基因的克隆与表达 被引量:9
13
作者 莫小见 郭爱珍 陆承平 《中国病毒学》 CSCD 2004年第5期487-489,共3页
根据发表的犬瘟热病毒(CDV)参考株Ondetstepoort的序列设计一对引物,以犬瘟热病毒南京株(CDVNJ-15)感染的Vero细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增出1.9kb的全长H蛋白基因,双酶切该全长基因,得到1058bp片段,以正确的阅读框架定向克隆于pET-28b(+... 根据发表的犬瘟热病毒(CDV)参考株Ondetstepoort的序列设计一对引物,以犬瘟热病毒南京株(CDVNJ-15)感染的Vero细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增出1.9kb的全长H蛋白基因,双酶切该全长基因,得到1058bp片段,以正确的阅读框架定向克隆于pET-28b(+)中,然后将重组质粒转化宿主菌RosettaTM,在37℃1.0mmol/LIPTG诱导下获得良好表达。经SDS-PAGE鉴定,表达的融合蛋白质约38kDa,与预期值一致。免疫转印试验显示,该重组蛋白可被CDVOnderstepoort兔抗血清识别,表明该重组蛋白具备部分抗原性。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 H蛋白基因 克隆与表达 免疫转印
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嗜水气单胞菌侵袭力与宿主细胞信号转导和骨架的关系 被引量:5
14
作者 储卫华 陆承平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期817-820,共4页
Invasion of Aeromonas hydrophila strain Ah J-1 isolated from diseased fish to cultured HEp-2cells monolayer was evaluated by the recovery of gentamincin-resistant (Gm r)bacteria from Triton X-100 cell lysates. The inv... Invasion of Aeromonas hydrophila strain Ah J-1 isolated from diseased fish to cultured HEp-2cells monolayer was evaluated by the recovery of gentamincin-resistant (Gm r)bacteria from Triton X-100 cell lysates. The invasive efficiency (IE) could reach to 0.2% at 37℃. In addition, potential signal transduction pathways that precede bacterial internalization were studied by using signal transduction inhibitors. Bacterial internalization of Ah J-1 involved microfilaments and protein tyrosine kinase since cytochalasin D (an inhibitor of microfilament polymerization) and genistein (an inhibitor of protein tyrosine kinase) prevented internalization. Staurosporine(a protein kinase C inhibitor) and Sodium orthovanadate (a protein tyrosine phosphatase inhibitor) accelerated internalization of Ah J-1 into HEp-2 cells. 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 侵袭 信号转导 细胞骨架
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引致河蟹颤抖病的病毒的核酸定性 被引量:5
15
作者 金业 陆承平 李显 《中国病毒学》 CSCD 2004年第1期36-38,共3页
对河蟹(中华绒螯蟹)'颤抖病'病毒及其核酸进行了电镜观察.纯化病毒经负染后由电镜观察显示,病毒粒子呈球状,有囊膜和纤突,直径约为150nm.纯化病毒经核酸酶降解杂核酸后,加入8mol/L尿素释放病毒核酸,经水相法展开后,用覆有碳膜... 对河蟹(中华绒螯蟹)'颤抖病'病毒及其核酸进行了电镜观察.纯化病毒经负染后由电镜观察显示,病毒粒子呈球状,有囊膜和纤突,直径约为150nm.纯化病毒经核酸酶降解杂核酸后,加入8mol/L尿素释放病毒核酸,经水相法展开后,用覆有碳膜的铜网取样,再经染色和真空镀膜,于电镜下观察.病毒核酸呈单股线状,底片经光学精确放大后,测定了核酸分子的长度,根据经验公式计算出病毒核酸分子量为5.05×106.抽提的病毒核酸在0.8%琼脂糖凝胶电泳中呈单一条带,大小为15~16kb,经核酸酶酶切显示,核酸对DNase I不敏感,对RNase、Mung Bean Nuclease敏感,根据以上特性判断,该核酸为ssRNA. 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 颤抖病病毒 核酸 电镜观察
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嗜水气单胞菌温敏胞外蛋白酶基因eprJ的克隆与检测 被引量:7
16
作者 任燕 陆承平 姚火春 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期924-928,共5页
根据已发表的人源嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)温敏胞外蛋白酶基因eprA1的核甘酸序列,设计合成一对引物,以嗜水气单胞菌鱼源株AhJ-1基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到1005bp的胞外蛋白酶基因eprJ1,将该基因片段连接到pM... 根据已发表的人源嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)温敏胞外蛋白酶基因eprA1的核甘酸序列,设计合成一对引物,以嗜水气单胞菌鱼源株AhJ-1基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到1005bp的胞外蛋白酶基因eprJ1,将该基因片段连接到pMD18-T载体中,构建克隆载体pMD-eprJ1。序列分析发现,其与发表的AhAH1的胞外蛋白酶eprA1基因的同源性有91%。根据测序结果在保守区重新设计一对引物以增强特异性,扩增片段大小为387bp。对1990-2004年15年间从浙江、福建、湖北及江苏等地不同患病水产动物肝肾等脏器分离到的23株Ah检测结果显示,从中国东南地区分离的21株Ah水生动物致病性菌株扩增均为阳性,2株Ah非致病性菌株为阴性,推测该基因普遍存在于致病性Ah中。检测模板DNA的灵敏度可达1.5×10^-3ng/μL。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 温敏胞外蛋白酶基因 克隆与检测
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共表达猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒NJ-a株ORF4、ORF5与ORF6基因重组改良型痘苗病毒安卡拉株的构建 被引量:8
17
作者 郑其升 毕志香 +2 位作者 李鹏 陈德胜 陈溥言 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期345-349,共5页
为探讨共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinerep roductive and respiratory syndrome Virus,PRRSV)保护性抗原基因的重组改良型痘苗病毒安卡拉株(Modified Vaccinia Virus Ankala,MVA)的免疫效力,将PRRSVNJ-a株ORF4、ORF5和ORF6基因... 为探讨共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinerep roductive and respiratory syndrome Virus,PRRSV)保护性抗原基因的重组改良型痘苗病毒安卡拉株(Modified Vaccinia Virus Ankala,MVA)的免疫效力,将PRRSVNJ-a株ORF4、ORF5和ORF6基因插入转移载体pⅡLR中,获得了三基因共表达的转移载体pⅡLR-ORF5/ORF6/ORF4,通过同源重组的方法获得重组病毒rMVA-GP5/M/GP4。以lacZ为报告基因进行噬斑筛选和重组病毒纯化后,PCR方法证明ORF4、ORF5和ORF6成功的插入MVA基因组中;经Western blot检测与间接免疫荧光试验证实,重组病毒感染细胞能正确表达PRRSVGP4、GP5与M蛋白。用rMVA-GP5/M/GP4免疫6周龄Babl/C小鼠,首免后3周可检测到特异性PRRSV中和抗体,8周后中和抗体效价可达25,并能继续维持4周;淋巴细胞增殖试验结果表明,重组病毒免疫小鼠产生强烈的特异性细胞增殖反应。上述研究结果表明rMVA-GP5/M/GP4具有良好的免疫原性,可作为预防PRRS的候选疫苗进一步研究。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 修饰的痘苗病毒安卡拉株 GP4 GP5与M蛋白 共表达
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七种常见养殖鱼血清胰酶抑制活性的比较 被引量:6
18
作者 黄素文 陆承平 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期415-419,共5页
α2巨球蛋白能结合并抑制蛋白酶的活性,但不抑制该蛋白酶对人工合成的小分子底物的酶活。利用这一特性,选择胰酶的一种有色小分子底物BAPNA,建立BAPNA比色检测法,对7种常见养殖鱼:草鱼、鲫、鲢、胡子鲇、鳙、加州鲈和黄鳝的血清胰酶抑... α2巨球蛋白能结合并抑制蛋白酶的活性,但不抑制该蛋白酶对人工合成的小分子底物的酶活。利用这一特性,选择胰酶的一种有色小分子底物BAPNA,建立BAPNA比色检测法,对7种常见养殖鱼:草鱼、鲫、鲢、胡子鲇、鳙、加州鲈和黄鳝的血清胰酶抑制活性进行了比较,胰酶抑制活性由高到低依次为:草鱼>鲫>黄鳝>鳙>鲢>胡子鲇>加州鲈;α2巨球蛋白活性由高到低依次为:黄鳝>草鱼>胡子鲇>加州鲈>鲢>鳙>鲫;黄鳝和草鱼的α2巨球蛋白活性明显高于其他几种鱼的α2巨球蛋白活性。 展开更多
关键词 养殖鱼 蛋白酶 活性 胰酶 Α2巨球蛋白
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马链球菌兽疫亚种中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的克隆与表达 被引量:6
19
作者 苏良科 陆承平 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第7期633-636,共4页
目的 构建马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒 (pET -Szp) ,并检测表达产物的免疫反应性。 方法 根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w6 0类M蛋白基因... 目的 构建马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒 (pET -Szp) ,并检测表达产物的免疫反应性。 方法 根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w6 0类M蛋白基因序列设计和合成引物 ,以该菌中国分离株ATCC35 2 4 6的基因组DNA为模板 ,扩增类M蛋白基因 5’端第 5 83~ 10 6 8bp片段 ,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET - 32a(+)中 ,将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1株 ,用IPTG诱导表达 ,并通过SDS -PAGE和免疫印迹对表达蛋白进行初步分析。结果 扩增出 4 86bp的马链球菌兽疫亚种ATCC35 2 4 6的类M蛋白基因片段 ,该基因在大肠杆菌表达系统中经诱导 ,得到分子量为 5 0 0 0 0的表达产物 ,免疫印迹表明该产物具有特异的免疫反应性。结论 成功构建了表达马链球菌兽疫亚种中国株类M蛋白片段的重组表达质粒 ,并实现在大肠杆菌中表达 ,为重组类M蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种 类M基因 克隆 表达 重组表达质粒 免疫反应性
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奶牛α干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定 被引量:7
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作者 李学仁 曹瑞兵 +2 位作者 李斐 魏建超 陈溥言 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期64-68,共5页
提取经新城疫病毒诱导培养的奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α干扰素成熟蛋白基因,然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,测序结果表明,扩增片段为牛α干扰素成熟蛋白序列,与Genebank上发表的α1干扰素序列同源性为98... 提取经新城疫病毒诱导培养的奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α干扰素成熟蛋白基因,然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,测序结果表明,扩增片段为牛α干扰素成熟蛋白序列,与Genebank上发表的α1干扰素序列同源性为98%。然后将特异性片段连接到含分泌信号肽序列的Pichiapastoris表达载体pPICZαA上,将重组质粒经SacI酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。转化子经PCR分析鉴定后利用甘油增菌和甲醇诱导,实现了BoIFN-α在毕赤酵母系统中的分泌表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为23kDa,比其推导结果(20kDa)略大,推测可能是因为表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制法结果表明,重组牛IFN-α具有较高的干扰素活性,约为4.1×105U/ml,经微量蛋白测量仪测得,其表达量约为80μg/ml,比活为5.1×106U/mg。 展开更多
关键词 奶牛α干扰素 毕赤酵母 分泌表达 抗病毒活性 生物活性测定 干扰素 奶牛 RT-PCR方法 PASTORIS SDS-PAGE
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