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hBDNF基因原核表达重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1
1
作者 刘智敏 陈俊杰 +3 位作者 林佳 王若菡 游乐然 东云华 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2001年第1期68-71,共4页
我们按照 h BDNF基因全长编码序列设计合成引物 ,从人基因组 DNA中扩增出 76 0 bp的片段 ,反向插入到 p GEM- 3Zf(+ )载体上 ,获得 p GEMBF18克隆 ,限制性酶分析和 DNA序列测定均证实该克隆插入片段为h BDNF基因全长编码序列。从 p GEMB... 我们按照 h BDNF基因全长编码序列设计合成引物 ,从人基因组 DNA中扩增出 76 0 bp的片段 ,反向插入到 p GEM- 3Zf(+ )载体上 ,获得 p GEMBF18克隆 ,限制性酶分析和 DNA序列测定均证实该克隆插入片段为h BDNF基因全长编码序列。从 p GEMBF18克隆中获取 h BDNF全长编码片段 ,与原核表达载体 p GEX- 5 T连接 ,构建了 p5 TBF34原核表达重组质粒。重组质粒转化大肠杆菌 JM10 9,经 IPTG诱导表达 ,SDS- PAGE特异区带分子量为 43k Da,此重组蛋白占菌体可溶性蛋白总量的 7.5 3% ,Western杂交证实该特异区带具 h 展开更多
关键词 HBDNF 基因克隆 SDS-PAGE 原核表达 Western杂交 脑源性神经营养因子 质粒
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hBDNF基因在成纤维细胞中的异位表达 被引量：1
2
作者 刘智敏 陈俊杰 +5 位作者 王若菡 项涛 李霞 林佳 游乐然 东云华 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2001年第3期408-411,共4页
将 h BDNF全长编码序列插入人 I型胶原基因 (Colia1)增强子 -启动子调节序列之下 ,构建了含 Colia1-BDNF微基因的重组体 p SCEPBFCAT,并转染人胚肌腱成纤维细胞。成功地利用了 Colia1基因调控元件介导 BD-NF基因在成纤维细胞中异位表达 ... 将 h BDNF全长编码序列插入人 I型胶原基因 (Colia1)增强子 -启动子调节序列之下 ,构建了含 Colia1-BDNF微基因的重组体 p SCEPBFCAT,并转染人胚肌腱成纤维细胞。成功地利用了 Colia1基因调控元件介导 BD-NF基因在成纤维细胞中异位表达 ,SDS- PAGE显示表达产物分子量为 2 7k Da,免疫斑点杂交、Elisa和 Western杂交证实该表达产物具有 展开更多
关键词 HBDNF 调控元件 微基因 成纤维细胞 基因异位表达
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