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寄主植物对桉树枝瘿姬小蜂生物学特性的影响 被引量：7
1
作者 朱方丽 韩鹏飞 +2 位作者 任顺祥 彭正强 万方浩 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期1451-1457,共7页
桉树枝瘿姬小蜂Leptocybe invasa Fisher&La Salle是桉属(Eucalyptus)植物的重要枝叶害虫。自2007年在我国发现以来,对广西、海南及广东地区的桉树种植已造成严重危害。本文在野外调查的基础上,研究了海南和广东地区共5种桉树上桉... 桉树枝瘿姬小蜂Leptocybe invasa Fisher&La Salle是桉属(Eucalyptus)植物的重要枝叶害虫。自2007年在我国发现以来,对广西、海南及广东地区的桉树种植已造成严重危害。本文在野外调查的基础上,研究了海南和广东地区共5种桉树上桉树枝瘿姬小蜂的虫体大小、寿命及怀卵量。结果表明,桉树品种能够显著影响桉树枝瘿姬小蜂的虫体大小;用40%蜂蜜水进行补充营养时,不同寄主植物上桉树枝瘿姬小蜂雌成虫的寿命差异显著,而桉树枝瘿姬小蜂雄虫在不同寄主间无显著性差异;不同寄主植物上桉树枝瘿姬小蜂雌成虫的怀卵量不同,并且随着日龄的延长,其怀卵量呈现上升的趋势。 展开更多
关键词 桉树枝瘿姬小蜂 寄主植物 虫体大小 寿命 怀卵量
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斜纹夜蛾普通气味结合蛋白ⅡcDNA的克隆及在原核细胞中的表达 被引量：5
2
作者 金丰良 董小林 +1 位作者 许小霞 任顺祥 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2008年第11期1076-1083,共8页
采用同源克隆结合RACE的方法克隆了斜纹夜蛾的普通气味结合蛋白Ⅱ(SlGOBPⅡ)的cDNA序列(GenBank登录号为EU086371).序列分析表明,SlGOBPⅡ可读框序列为489bp,编码162个氨基酸,分子量为18.2kD,等电点为5.72.SlGOBPⅡ具有昆虫气味结合蛋... 采用同源克隆结合RACE的方法克隆了斜纹夜蛾的普通气味结合蛋白Ⅱ(SlGOBPⅡ)的cDNA序列(GenBank登录号为EU086371).序列分析表明,SlGOBPⅡ可读框序列为489bp,编码162个氨基酸,分子量为18.2kD,等电点为5.72.SlGOBPⅡ具有昆虫气味结合蛋白的典型特征,即氨基酸序列中具有6个保守的半胱氨酸残基,呈酸性.SlGOBPⅡ氨基酸序列与草地贪夜蛾(S.frugiperda)和甜菜夜蛾(S.exigua)的气味结合蛋白具有较高的同源性.RT-PCR和Northern blot检测表明,SlGOBPⅡ具有触角组织表达特异性.将SlGOBPⅡ,克隆到表达载体pET-32a上,阳性重组子转化表达宿主菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行了高效表达.SDS-PAGE检测表明SlGOBPⅡ在大肠杆菌中可表达相对分子质量(Mr)为32.0kD的可溶性融合蛋白,Western blot分析表明表达产物能与Ni-NTA螯合物特异性结合,表明表达的SlGOBPⅡ为N端带有6His标签的融合蛋白.利用Ni2+-NTA亲和柱进一步纯化了SlGOBPⅡ,以该融合蛋白免疫新西兰大白兔制备了抗SlGOBPⅡ的抗血清,ELISA滴度为1∶12800,Western印迹检测结果显示,SlGOBPⅡ抗血清与表达的融合蛋白呈阳性反应,表明所表达的融合蛋白仍保持原有蛋白的免疫原性. 展开更多
关键词 斜纹夜蛾 触角 气味结合蛋白 基因克隆 原核表达
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桉树枝瘿姬小蜂产卵行为研究 被引量：2
3
作者 朱方丽 邱宝利 任顺祥 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期192-196,共5页
桉树枝瘿姬小蜂Leptocybe invasa Fisher&La Salle喜好在桉属(Eucalyptus)植物的新生部位产卵。本研究以尾赤桉为寄主研究其产卵模式发现,当天羽化且没有产卵经验的雌成虫在经过寄主识别(116.87 s)和寄主评估(208.27 s)后即进行产... 桉树枝瘿姬小蜂Leptocybe invasa Fisher&La Salle喜好在桉属(Eucalyptus)植物的新生部位产卵。本研究以尾赤桉为寄主研究其产卵模式发现,当天羽化且没有产卵经验的雌成虫在经过寄主识别(116.87 s)和寄主评估(208.27 s)后即进行产卵循环(平均5.87次),每个产卵循环产2粒卵,且搜索行为的发生一般伴随产卵位置的变换。在被观察的15头雌成虫中,平均每头产卵13.60粒,每次产卵持续17.31 s。在产卵过程中,其刺探行为所占总时间的比例和发生频次最大,而静息行为最小。在不同寄主植物间,桉树枝瘿姬小蜂喜好在尾赤桉的叶柄和叶脉处产卵,且2个部位间无显著性差异,而在尾叶桉、巨尾桉、隆缘桉和小果灰桉上,其喜好在叶柄处产卵且显著大于其它2个部位。 展开更多
关键词 桉树枝瘿姬小蜂 产卵行为 寄主植物
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死亡素与泛素在大肠杆菌中的高效融合表达 被引量：3
4
作者 金丰良 张呈文 +2 位作者 许小霞 孙强 任顺祥 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期495-501,共7页
死亡素是由21个氨基酸残基组成的广谱抗菌肽。为了高效表达可溶性的死亡素,本研究利用递归式PCR(recursive PCR,rPCR)扩增了死亡素基因thanatin,并将其和家蝇Musca domestica泛素基因ubiquitin构成嵌合基因,克隆到表达载体pET-32a,再与... 死亡素是由21个氨基酸残基组成的广谱抗菌肽。为了高效表达可溶性的死亡素,本研究利用递归式PCR(recursive PCR,rPCR)扩增了死亡素基因thanatin,并将其和家蝇Musca domestica泛素基因ubiquitin构成嵌合基因,克隆到表达载体pET-32a,再与硫氧还蛋白融合后构建表达载体pET-TRX-UBI-THA。将酶切和测序鉴定正确的质粒转化表达宿主菌BL21,经0.6mmol/L IPTG诱导,TRX-UBI-THA融合蛋白得到了高效可溶性表达。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明融合蛋白的分子量为28.9kD,与预期的结果一致,表达量占菌体总蛋白的46%。Western blot分析结果显示融合蛋白能与Ni-NTA鏊合物特异性的结合,表明在融合蛋白的N-端带有6×His标签。利用C-端带有6×His标签的泛素C-端水解酶对融合蛋白进行切割,切割产物经Ni2+-NTA亲和柱和HPLC纯化(纯化量为5.4mg/L),Tricince-SDS-PAGE电泳得到单一的泛素蛋白条带。电喷雾质谱(ESI-MS)分析表明,纯化的泛素分子量为2.57kD,与通过氨基酸预测的分子量完全一致。利用琼脂孔穴扩散法对泛素活性进行检测,结果显示纯化的泛素对大肠杆菌K12D31和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus具有较强的活性抑制。本研究表明,利用泛素融合技术可以高效表达可溶性的死亡素。 展开更多
关键词 抗菌肽 死亡素 泛素 融合表达 纯化 活性检测
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