RNA干扰SMYD3基因表达对诱导肝癌细胞凋亡的影响 被引量：7

1

作者 徐鋆耀 陈立波 +3 位作者 徐鋆阳 杨镇 魏海燕 许荣华 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第5期526-532,共7页

背景与目的:SMYD3(SETandMYNDdomain-containingprotein3)基因的表达蛋白是一种组蛋白甲基转移酶,参与肿瘤细胞增殖与凋亡的调控。本研究旨在探讨利用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)抑制SMYD3基因表达对肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:... 背景与目的:SMYD3(SETandMYNDdomain-containingprotein3)基因的表达蛋白是一种组蛋白甲基转移酶,参与肿瘤细胞增殖与凋亡的调控。本研究旨在探讨利用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)抑制SMYD3基因表达对肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:RT-PCR、免疫组织化学法分别检测SMYD3在肝癌细胞和肝癌组织中的表达。构建小发夹状RNA(smallhairpinRNA,shRNA)干扰质粒Pgenesil-1-s1、Pgenesil-1-s2及无干扰效应质粒Pgenesil-1-hk并转染入肝癌细胞HepG2,阻抑其表达SMYD3,以空质粒Pgenesil-1转染组为对照。Westernblot检测阻抑效应;MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术及TUNEL检测细胞凋亡。结果:SMYD3在肝癌组织和多种肝癌细胞中表达明显增强。shRNA转染HepG2细胞后:SMYD3蛋白表达下调75%～85%;细胞增殖明显受抑制,抑制率高达60.95%～72.14%;流式细胞术结果显示Pgenesil-1-s1组HepG2细胞凋亡率(17.68±2.36)%、Pgenesil-1-s2组(19.07±1.78)%,均显著高于Pgenesil-1-hk组[(1.44±0.28)%]及Pgenesil-1组[(0.47±0.12)%](P<0.01);TUNEL检测的凋亡指数结果与流式细胞术检测结果类似。结论:SMYD3高表达于多种肝癌细胞及肝癌组织;RNAi能特异性下调SMYD3的表达,抑制肝癌细胞增殖并促进细胞凋亡,提示其可能为治疗肝癌提供新的途径。 展开更多

关键词 肝肿瘤 肝癌细胞系 RNA干扰 SMYD3 凋亡

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RNA干扰技术靶向SMYD3基因治疗肝癌的实验研究 被引量：7

2

作者 徐鋆耀 陈立波 +3 位作者 徐鋆阳 杨镇 许荣华 魏海燕 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期481-484,共4页

目的构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)编码基因的短发夹状RNA(shRNA)干扰质粒,并研究其对肝癌细胞的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测SMYD3 mRNA在肝癌细胞系HepG2、Hep3B、SMMC7721的表达。构建重组SMYD3... 目的构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)编码基因的短发夹状RNA(shRNA)干扰质粒,并研究其对肝癌细胞的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测SMYD3 mRNA在肝癌细胞系HepG2、Hep3B、SMMC7721的表达。构建重组SMYD3 shRNA表达质粒Pgenesil-1-s,并采用介导转染法导入HepG2细胞,蛋白免疫印迹法(W estern b lot)检测阻抑效应,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞生长增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。建立人肝癌细胞HepG2皮下移植瘤裸鼠模型,注射Pgenesil-1-s,动态观察肿瘤体积并于2周后处死裸鼠称取瘤重。结果肝癌细胞株HepG2、Hep3B、SMMC7721的SMYD3 mRNA表达水平显著高于正常肝细胞株L-02;Pgenesil-1-s转染HepG2细胞后,SMYD3蛋白表达明显下调,而且细胞凋亡率显著增加,细胞生长明显受抑;经重组质粒治疗14 d后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相较于对照组瘤体明显缩小、瘤重明显减轻(P<0.01)。结论肝癌细胞高表达SMYD3,shRNA干扰特异性抑制SMYD3表达,可以促进肝癌细胞凋亡并抑制裸鼠移植瘤的生长。 展开更多

关键词 基因 治疗 RNA 肝肿瘤

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短发夹状RNA抑制SMYD3基因在HepG2细胞中的表达 被引量：5

3

作者 徐鋆耀 陈立波 +3 位作者 徐鋆阳 杨镇 魏海燕 许荣华 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期105-108,共4页

目的构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)基因的短发夹状RNA (shRNA)表达载体pGenesil-1-s,观察其对人肝癌细胞株HepG2细胞SMYD3基因表达的特异性抑制效应。方法设计合成针对SMYD3 mRNA编码序列267～288、302～323靶位点之间... 目的构建针对人SET-和MYND-结构域含有蛋白3(SMYD3)基因的短发夹状RNA (shRNA)表达载体pGenesil-1-s,观察其对人肝癌细胞株HepG2细胞SMYD3基因表达的特异性抑制效应。方法设计合成针对SMYD3 mRNA编码序列267～288、302～323靶位点之间的核苷酸片断,并定向克隆到仅表达EGFP的空载体pGenesil-1的U6启动子下,构建重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2；不针对任何序列的重组质粒pGenesil-1-hk作为对照。通过脂质体介导转染人肝癌细胞株HepG2,应用逆转录聚合酶链反应,western blot蛋白免疫印迹法分别从mRNA、蛋白水平检测阻抑效应。结果酶切鉴定和测序结果证实了pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2、pGenesil-1-hk的成功构建,转染HepG2细胞后,pGenesil-1- s1、pGenesil-1-s2组SMYD3 mRNA和蛋白表达均明显下调,与pGenesil-1-hk组及pGenesil-1对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论构建的重组质粒pGenesil-1-s1、pGenesil-1-s2能特异性抑制SMYD3 在HepG2细胞中的表达。 展开更多

关键词 RNA 癌 肝细胞

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门静脉高压症外科治疗的原则:精准、微创和个体化 被引量：4

4

作者 杨镇 《腹部外科》 2016年第3期153-155,共3页

中国版的精准医学计划（initiative of chineseprecision medicine）应该包括精准就医和精准医疗两个部分.在门静脉高压症多学科协作诊治模式中,目前传统外科手术仍具有重要意义,外科治疗应遵循精准、微创和个体化原则,从而提高疗效并... 中国版的精准医学计划（initiative of chineseprecision medicine）应该包括精准就医和精准医疗两个部分.在门静脉高压症多学科协作诊治模式中,目前传统外科手术仍具有重要意义,外科治疗应遵循精准、微创和个体化原则,从而提高疗效并使病人最大程度获益. 展开更多

关键词 门静脉高压症 个体化原则 外科治疗 微创 多学科协作诊治模式 传统外科手术 医学计划 中国版

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外源性前列腺素E_1对血吸虫病家兔肝脏血小板衍生生长因子B及其受体表达的影响 被引量：3

5

作者 邹卫龙 杨镇 +1 位作者 梁志鹏 李岽健 《中华普通外科杂志》 CSCD 北大核心 2005年第4期210-212,共3页

目的　探讨外源性前列腺素E1(PGE1)对血吸虫病家兔肝脏血小板衍生生长因子B(PDGF B)及其受体表达的影响。方法　14只血吸虫病纤维化家兔模型,其中7只家兔在感染后6 0d开始给予PGE1( 2 5 μg/kg·d-1)至12 0d。RT PCR、Westernblot... 目的　探讨外源性前列腺素E1(PGE1)对血吸虫病家兔肝脏血小板衍生生长因子B(PDGF B)及其受体表达的影响。方法　14只血吸虫病纤维化家兔模型,其中7只家兔在感染后6 0d开始给予PGE1( 2 5 μg/kg·d-1)至12 0d。RT PCR、Westernblot和免疫组化分别检测肝组织PDGF BmRNA、PDGFR β蛋白和α平滑肌肌动蛋白(αSMA)表达。原位杂交观察内源性干扰素(IFN)γ水平。结果　纤维化形成过程中HSCs活化,PDGF BmRNA以及PDGFR β蛋白水平增高。外源性PGE1治疗后PDGFmRNA和受体β蛋白表达的增高趋势都受到明显抑制(与模型组比较分别为2 9 4 2±5 0 5和4 1 37±7 2 3,P <0 0 1;0 2 1±0 11和0 4 6±0 0 7,P <0 0 1)。αSMA表达强阳性视野从6 8下降到10个;而内源性IFN γ积分光密度从0 10 5±0 0 2 4升高到0 4 38±0 0 76 (P <0 0 1)。结论　PGE1可以降低血吸虫病家兔肝脏PDGF B基因及其受体表达水平,内源性IFN γ水平上调可能是这种作用的机制之一。 展开更多

关键词 血吸虫病 受体表达 前列腺素E1 外源性 生长因子B 肝脏 血小板衍生生长因子 α-平滑肌肌动蛋白 PDGF-B Western PDGFR-Β α-SMA表达 IFN-γ水平 RT-PCR mRNA 积分光密度 内源性 家兔模型 免疫组化 blot 原位杂交 HSCs

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NOS、ET-1在血吸虫病门静脉高压兔肺组织中的表达和意义

6

作者 周永贵 杨镇 《临床外科杂志》 2005年第3期156-158,共3页

目的　探讨内皮素 (endothelin -1,ET -1)、一氧化氮 (NO)在血吸虫病门静脉高压性肺血管病变发病机制中的作用。方法　运用腹部敷贴法感染血吸虫尾蚴形成血吸虫病肝硬化门静脉高压症动物模型 ,模型组 (M组 ) 10只和正常对照组 (N组 ) 10... 目的　探讨内皮素 (endothelin -1,ET -1)、一氧化氮 (NO)在血吸虫病门静脉高压性肺血管病变发病机制中的作用。方法　运用腹部敷贴法感染血吸虫尾蚴形成血吸虫病肝硬化门静脉高压症动物模型 ,模型组 (M组 ) 10只和正常对照组 (N组 ) 10只 ,应用免疫组织化学法对动物模型的肺组织中的ET -1、一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase ,NOS)进行定位性研究 ,并以正常兔作对照。结果　感染血吸虫尾蚴 12 0d后 ,肝硬化门静脉高压症动物模型成功 ,模型组肺组织中ET -1、NOS阳性细胞的表达均明显增多 ,染色增强 ,计算机图像定量分析示两组光灰度值和光密度值均具有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　ET -1、NOS在血吸虫病门静脉高压兔肺血管中的表达明显增强 ,表明ET -1、NO在血吸虫病门脉高压性肺血管病变发病机制中具有重要意义。 展开更多

关键词 血吸虫病门静脉高压 免疫组化 一氧化氮 内皮素-1

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选择性贲门周围血管离断术对治疗门静脉高压症的临床价值评估 被引量：20

7

作者 曾军 杨镇 +4 位作者 周永贵 李涛 李岽健 王雄彪 高志强 《腹部外科》 2005年第1期23-25,共3页

目的　探讨选择性贲门周围血管离断术对门静脉高压症治疗的价值。方法　自2002 年1月～2004年3月,我院用选择性贲门周围血管离断术共治疗门静脉高压症47例,以104例经典 的贲门周围血管离断术作为对照组。测量病人手术前、切脾后、手术... 目的　探讨选择性贲门周围血管离断术对门静脉高压症治疗的价值。方法　自2002 年1月～2004年3月,我院用选择性贲门周围血管离断术共治疗门静脉高压症47例,以104例经典 的贲门周围血管离断术作为对照组。测量病人手术前、切脾后、手术后自由门静脉压力,入院时、手术 后2周的门静脉血流量,观察术后复发出血、肝性脑病、门静脉高压性胃病发生率,腹水、食管胃底静 脉曲张改善程度以及成活情况。结果　选择性贲门周围血管离断术后病人复发性出血、门静脉高压 性胃病发生率明显减低(P<0.05),腹水、食管胃底曲张程度改善(P<0.05),自由门静脉压和门静脉 血流量明显下降(P<0.01),但不增加肝性脑病发生率(P>0.05)。结论　选择性贲门周围血管离断 术保留了机体自发性的分流,兼有分流术和断流术的优点,是一种较合理的手术方式。 展开更多

关键词 贲门周围血管离断术 治疗 门静脉高压症 发生率 门静脉高压性胃病 门静脉血流 临床价值 肝性脑病 腹水 手术后

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核因子-κB的活化与肿瘤坏死因子-α mRNA的表达在门静脉高压症性血管病变中的作用 被引量：6

8

作者 孙政 杨镇 徐鋆耀 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1457-1460,共4页

目的探讨脾脏动、静脉组织核因子-κB(NF-κB)的活化与肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA的表达在门静脉高压症(PHT)性血管病变中的意义。方法采用化学发光凝胶电泳迁移率实验(EMSA)方法检测肝硬化PHT患者脾脏动、静脉和正常血管NF-κB的活... 目的探讨脾脏动、静脉组织核因子-κB(NF-κB)的活化与肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA的表达在门静脉高压症(PHT)性血管病变中的意义。方法采用化学发光凝胶电泳迁移率实验(EMSA)方法检测肝硬化PHT患者脾脏动、静脉和正常血管NF-κB的活性,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测TNF-α mRNA的表达情况。结果对照组内脾脏动、静脉组织TNF- α mRNA分别为(0．24±0．12)、(0．21±0．10),显著低于肝硬化PHT组脾动脉、脾静脉TNF-α mR— NA的表达(0．38±0．21)、(0．36±0．16),(P<0．05);对照组脾动、静脉NF-κB未被检测到明显的活性,而于肝硬化PHT组检测到显著具有活性的NF—κB表达(P<0．05),且PHT组脾脏动、静脉 TNF-α mRNA表达与NF-κB的活性呈显著的正相关。结论肝硬化PHT血管组织NF-κB的活化、TNF-α表达增强,可能是肝硬化PHT时内脏血管病变形成和发展的原因之一。 展开更多

关键词 高血压 核因子-ΚB 肿瘤坏死因子-Α 门静脉高压症 血管病变

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项目导向教学法在老年科护士耐高压双腔PICC维护培训中的应用 被引量：3

9

作者 兰红珍 赵梅珍 《护理学杂志》 CSCD 2016年第20期81-84,共4页

目的 探讨项目导向教学法在老年科护士耐高压双腔PICC维护培训中的应用效果,提高患者导管护理质量。方法 采取项目导向教学法,以提高老年科护士维护耐高压双腔PICC导管技能为项目,对全科护士进行耐高压双腔PICC导管维护技能培训,培训后... 目的 探讨项目导向教学法在老年科护士耐高压双腔PICC维护培训中的应用效果,提高患者导管护理质量。方法 采取项目导向教学法,以提高老年科护士维护耐高压双腔PICC导管技能为项目,对全科护士进行耐高压双腔PICC导管维护技能培训,培训后（2015年4~6月）观察耐高压双腔PICC置管的48例患者（观察组）导管相关并发症发生情况,并与培训前（2014年6~12月）的45例患者（对照组）进行比较。结果 项目实施后护士双腔PICC导管维护知识和操作水平显著高于实施前（均P〈0.01）。观察组PICC导管相关并发症发生率显著低于对照组,患者满意率显著高于对照组（均P〈0.01）。结论 项目导向教学法有利于护士将理论知识迁移至实践,提高培训效果,从而提高双腔PICC导管维护质量。 展开更多

关键词 老年科 耐高压双腔PICC 项目导向教学法 护士培训

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局部血管紧张素原mRNA的表达与核因子-κB的活化在门静脉高压症性血管病变中的意义 被引量：3

10

作者 孙政 杨镇 徐鋆耀 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第32期2283-2286,共4页

目的探讨肝硬化门静脉高压症(PHT)时局部血管紧张素原mRNA表达与核因子-κB(NF-κB)的活化在门静脉高压症性血管病变中的意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-0PCR)方法检测肝硬化门静脉高压症病人脾脏动、静脉组织和正常血管局部血管... 目的探讨肝硬化门静脉高压症(PHT)时局部血管紧张素原mRNA表达与核因子-κB(NF-κB)的活化在门静脉高压症性血管病变中的意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-0PCR)方法检测肝硬化门静脉高压症病人脾脏动、静脉组织和正常血管局部血管紧张素原mRNA的表达情况,用化学发光凝胶电泳迁移率实验(EMSA)方法检测局部NF-κB的活性。结果对照组内脾脏动、静脉组织局部血管紧张素原mRNA分别为0.23±0.12、0.18±0.10,显著低于肝硬化门静脉高压症组脾动脉、脾静脉组织局部血管紧张素原mRNA的表达0.48±0.21、0.43±0.16(P<0.05);对照组脾动、静脉局部NF-κB未被检测到明显的活性,而于肝硬化门静脉高压症组检测到显著具有活性的NF-κB表达(P<0.05)。结论肝硬化门静脉高压病人局部血管紧张素原mRNA表达增强,NF-κB的活化,可能是肝硬化门静脉高压症时内脏血管病变形成和发展的原因之一。 展开更多

关键词 高血压 门静脉 血管疾病 血管紧张素原 NF-ΚB 核因子-κB(NF-κB) 血管紧张素原mRNA 肝硬化门静脉高压症 血管病变 局部

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脾脏动、静脉组织基质Gla蛋白mRNA的表达在门静脉高压症性血管病变中的意义

11

作者 孙政 杨镇 徐鋆耀 《临床外科杂志》 2005年第9期548-550,603,共4页

目的探讨脾脏动、静脉组织基质Gla蛋白(matrixGlaprotein,MGP)mRNA的表达在门静脉高压症(PHT)性血管病变中的意义。方法光镜及电镜观察对照组和PHT脾脏动、静脉病理形态学改变,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MGPmRNA的表达情... 目的探讨脾脏动、静脉组织基质Gla蛋白(matrixGlaprotein,MGP)mRNA的表达在门静脉高压症(PHT)性血管病变中的意义。方法光镜及电镜观察对照组和PHT脾脏动、静脉病理形态学改变,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MGPmRNA的表达情况。结果光镜与电镜观察下与对照组脾脏血管相比,PHT组的脾脏血管均存在不同程度的平滑肌细胞增生、肥大以及与生物合成有关的细胞器增多;对照组内脾脏动、静脉组织MGPmRNA分别为(0.23±0.10)、(0.26±0.13),PHT组脾动、静脉内MGPmRNA分别为(0.58±0.19)、(0.55±0.15),对照组的显著低于PHT组,P<0.05。结论PHT血管组织MGPmRNA的表达增强,调节血管平滑肌细胞的表型转变、增殖和迁移,并参与了内脏血管病变形成和发展。 展开更多

关键词 高血压 门静脉 血管病变 基质GLA蛋白

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