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CD8^+CD28^-NRP-1^+T细胞在肾移植手术后患者外周血中的比例变化及意义 被引量：3
1
作者 童荔 张利改 +5 位作者 周鸿敏 蔡兰军 徐逸 吴轲 李俊华 陈忠华 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期234-239,共6页
用流式细胞仪分别检测不同功能状态下肾移植术后患者体内的CD8^+CD28^-NRP-1^+Ts细胞和CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts细胞,通过比较两类细胞的阳性表达率初步探讨它们之间的表达关系和意义。选取正常健康人10例,移植肾功能稳定的长期存活者24例... 用流式细胞仪分别检测不同功能状态下肾移植术后患者体内的CD8^+CD28^-NRP-1^+Ts细胞和CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts细胞,通过比较两类细胞的阳性表达率初步探讨它们之间的表达关系和意义。选取正常健康人10例,移植肾功能稳定的长期存活者24例,慢性移植物肾病者20例,急性排斥者15例,取受试者外周静脉血,分离单个核细胞,利用流式细胞仪检测CD8^+CD28^-NRP-1^+Ts细胞和CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts细胞在CD8^+CD28^-T细胞群中的比例。结果表明组间比较得出,CD8^+CD28^-NRP-1^+Ts细胞和CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts细胞比例在四组之间均有统计学差异(P<0.05)。其中在长期存活组表达量最高,其CD8^+CD28^-NRP-1^+Ts细胞和CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts的比例分别为16.15%±1.49%和11.90%±2.73%,其次为正常健康人(13.83%±2.38%、9.44%±2.03%),然后为慢性移植物肾病组(8.03%±2.67%、5.26%±0.65%),而急排组最低(3.34%±1.73%、2.36%±1.14%),并且四组间这两种细胞呈同一变化趋势且前者的变化幅度大于后者。组内比较显示,CD8^+CD28^-NRP-1^+Ts细胞比例均高于CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts细胞(P<0.05)。CD8^+CD28 NRP-1^+Ts细胞可以从整体水平上反映肾移植术后患者的免疫状态,它比CD8^+CD28^-Foxp3^+Ts细胞更能全面的反映术后患者的预后情况。 展开更多
关键词 NEUROPILIN-1 Foxp3 CD8^+ CD28^- TS细胞 肾移植
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抗HBsAg-Fab重组体在小鼠肝脏的表达 被引量：2
2
作者 唐莉 曾志贵 +4 位作者 潘桃 袁劲 陈必成 陈忠华 陈知水 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第16期1554-1560,共7页
目的:研究人抗HBsAg-Fab重组体在小鼠体内的表达分泌．方法:将所构建的pXXUF1-HBs-Fab质粒以 5、10、20和40μg的剂量分别利用尾静脉液压法转染C57BL／6小鼠,建立实验1-4组;同时设立pXXUF1质粒转染对照组和空白组．转染 3 d后采集血清... 目的:研究人抗HBsAg-Fab重组体在小鼠体内的表达分泌．方法:将所构建的pXXUF1-HBs-Fab质粒以 5、10、20和40μg的剂量分别利用尾静脉液压法转染C57BL／6小鼠,建立实验1-4组;同时设立pXXUF1质粒转染对照组和空白组．转染 3 d后采集血清和肝、肾、脾等组织标本,运用RT-PCR,ELISA和免疫组织化学染色等方法从基因和蛋白水平分析基因工程抗体人抗 HBsAg-Fab在体内的表达能力．结果:尾静脉液压注射pXXUF1-HBs-Fab组小鼠血清中证实了人源性Fab蛋白的分泌性表达,各实验组血清中表达量分别为201．3± 13．7、213．1±13．5、513．6±12．8和954．1± 12．7μg／L,并具有与HBsAg特异性结合的活性,蛋白表达与注射质粒剂量有正相关(r= 0．912,P<0．01);对照组和空白组血清中则未测到目的蛋白．实验组肝、肾、脾组织RT-PCR 检测可见肝组织中有Fd重链及κ轻链的mRNA 表达;免疫组织化学检测显示肝细胞胞质中有棕黄色阳性颗粒,且部分肾小球毛细血管腔内壁和肾脏集合管壁可见附着的Fab蛋白, 肾实质细胞及脾脏均未见Fd重链及κ轻链的 mRNA和目的蛋白表达;对照组和空白组均未检測到目的蛋白．结论:pXXUF1-HBs-Fab成功于小鼠肝脏分泌表达人抗HBsAg-Fab重组体,其表达水平与质粒DNA注射剂量存在正相关关系,并可通过肾小球滤过代谢． 展开更多
关键词 真核表达 小分子抗体 乙肝表面抗原 小鼠
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孕早期水平雌孕激素对小鼠体内调节性T细胞的影响 被引量：1
3
作者 林星光 汪理 +4 位作者 高英 张维娜 雒真龙 陈忠华 昌盛 《医药导报》 CAS 2010年第7期839-843,共5页
目的探讨孕早期的雌、孕激素对小鼠调节性T细胞在体内的影响及其相关性。方法建立去势C57BL/6小鼠模型,2周后分别皮下注射雌激素、孕激素及雌孕激素联合重建小鼠性激素水平,模拟妊娠早期小鼠激素水平。维持2周后,用流式细胞术和免疫组... 目的探讨孕早期的雌、孕激素对小鼠调节性T细胞在体内的影响及其相关性。方法建立去势C57BL/6小鼠模型,2周后分别皮下注射雌激素、孕激素及雌孕激素联合重建小鼠性激素水平,模拟妊娠早期小鼠激素水平。维持2周后,用流式细胞术和免疫组化检测给药后小鼠外周血、脾脏、髂窝淋巴结、胸腺中调节性T细胞比例变化情况。结果实验结果显示,雌鼠去势后,单独的雌激素干预可明显提高脾脏、髂窝淋巴结、外周血CD+4CD+25Foxp3+调节性T细胞在CD+4T细胞中的比例,分别为(8.56±1.85)%,(7.63±1.68)%,(6.13±1.32)%;与溶剂组比较差异有显著性(P<0.05)。但胸腺中调节性T细胞比例与溶剂组差异无显著性(P>0.05)。单独妊娠早期水平的孕激素与溶剂组比较,调节性T细胞比例有所升高,但差异无显著性(P>0.05)。而联合应用雌、孕激素对调节性T细胞的影响与单独应用雌激素的结果类似,两者差异无显著性。不同性别组给予相同干预药物,调节性T细胞的变化比例,雌雄两组差异无显著性(P>0.05)。免疫组化也得到了类似的结果。结论单独应用相当于孕早期水平的雌激素可明显提高小鼠外周血,脾脏,髂窝淋巴结CD+4CD+25Foxp3+调节性T细胞比例,而孕激素对外周调节性T细胞没有影响,两种激素对中枢淋巴器官的调节性T细胞均没有影响。小鼠T淋巴细胞中雌孕激素的受体分布及其功能与性别遗传没有相关性。 展开更多
关键词 雌激素 孕激素 T细胞 调节性 妊娠 小鼠
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妊娠浓度的雌激素增强调节性T细胞抑制功能的实验研究 被引量：1
4
作者 汪理 林星光 +1 位作者 陈忠华 昌盛 《医药导报》 CAS 2009年第4期411-414,共4页
目的体外观察妊娠浓度的雌激素(E2)能否诱导天然CD4+CD25+Treg细胞的增殖并增强其抑制功能。方法天然CD4+CD25+Treg细胞的增殖检测:CFSE标记天然CD4+CD25+Treg细胞作为反应细胞预先经妊娠水平的E2孵育2h后,加入抗CD3/CD28单抗体外培养... 目的体外观察妊娠浓度的雌激素(E2)能否诱导天然CD4+CD25+Treg细胞的增殖并增强其抑制功能。方法天然CD4+CD25+Treg细胞的增殖检测:CFSE标记天然CD4+CD25+Treg细胞作为反应细胞预先经妊娠水平的E2孵育2h后,加入抗CD3/CD28单抗体外培养。以是否经E2孵育或加入抗CD3/CD28单抗分为2个阴性对照组和空白对照组。120h后检测天然CD4+CD25+Treg细胞的增殖情况。天然CD4+CD25+Treg细胞的功能检测:以CFSE标记CD4+CD25naiveT细胞作为反应细胞与预先经E2孵育2h的天然CD4+CD25+Treg细胞共培养,并于其中加入抗CD3/CD28单抗。以是否经E2孵育或加入抗CD3/CD28单抗分为2个阴性对照组和空白对照组。120h后检测CD4+CD2-5naiveT细胞的增殖情况。结果增殖检测提示两阴性对照组与空白对照组天然CD4+CD25+Treg细胞无明显增殖,而实验组则较对照组增殖明显;功能检测提示空白对照组标记细胞不发生明显增殖,阴性对照组A中标记细胞增殖明显;实验组标记细胞增殖能力在经E2孵育的天然CD4+CD25+Treg细胞作用下受到明显抑制,与阴性对照组A和空白对照组差异均有显著性;阴性对照组中标记细胞的增殖也被明显抑制,与阴性对照组A比较差异有显著性,但同时其增殖抑制作用又弱于实验组,差异也有显著性。结论体外实验表明,妊娠状态下高水平的雌激素能通过促使天然CD+CD+Treg细胞的扩增而增强其抑制功能。 展开更多
关键词 雌激素 妊娠 天然CD4+CD2+5调节性T细胞 增殖
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小分子干扰RNA转染猪血管内皮细胞优化体系的建立
5
作者 朱珉 曹荣华 +7 位作者 祁洪刚 王璐 胡枫 陈栋 刘斌 陈刚 张伟杰 陈实 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期69-72,共4页
目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofecta... 目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofectamine 2000）转染永生化猪血管内皮细胞系（PED）。分别应用流式细胞术、台盼蓝拒染试验及乳酸脱氢酶释放试验评价干扰α1，3-GT作用下PED的α1，3一半乳糖残基（α-Gal）表达情况以及SiRNA-脂质体转染对PED生长的影响。结果PED能有效发生特异性RNA干扰现象，且呈明显的剂量依赖性特征。SiRNA-1与脂质体Ribo—Juice在12nmol／L：6μl时，干扰效果最佳（67．3％～89．5％），整体量效优于DOSPA及Lipo—fectamine 2000转染体系。靶细胞转染SiRNA-1后48h时的α-Gal相对表达水平为10．5％，而SiRNA-2转染组则未见明显干扰现象。脂质体转染体系在转染后6～12h对靶细胞生长稍有影响，24h后细胞活性逐渐恢复。结论猪血管内皮细胞存在RNA干扰机制，RiboJuice转染体系是一种高效、低毒的SiRNA转染方式，为研究RNAi在抑制异种排斥反应中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 半乳糖苷酶类 内皮细胞
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α1，3-半乳糖基转移酶基因沉默对NK细胞介导的异种细胞毒作用的影响
6
作者 朱珉 祁洪刚 +7 位作者 曹荣华 王璐 黄亚冰 刘斌 林正斌 陈知水 陈刚 陈实 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期460-463,共4页
目的探讨α1，3-半乳糖基转移酶（α1，3-GT）基因沉默对人自然杀伤（NK）细胞介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株PED分为3组。转染组：PED转染了特异性α1，3-GT核糖核酸干扰分子（siRNA-1）；错... 目的探讨α1，3-半乳糖基转移酶（α1，3-GT）基因沉默对人自然杀伤（NK）细胞介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株PED分为3组。转染组：PED转染了特异性α1，3-GT核糖核酸干扰分子（siRNA-1）；错配组：PED转染了错配的SiRNA；空转染组：PED未转染SiRNA。观察各组PED与人NK细胞系细胞株NK92在静止和流动状态下的粘附作用、不同效靶比下的NK92细胞毒作用以及PED和NK92混和培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）的水平。结果PED转染后48h，转染组、错配组和空转染组在静止状态下粘附NK92的数量（个）分别为262±26、275±24和252±23；流动状态下分别为132±12、125±15和110±20，无论是静止还是流动状态下，各组PED对NK92的粘附能力的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。无论PED是否被活化，在相同效靶比下NK92对各组PED的杀伤率的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05），但杀伤率与效靶比呈正相关。NK92与PED共孵育早期即有反应性IFN-γ分泌，其分泌水平[（366．9±28．7）ng／L]较其自发分泌水平[（60．1±6．4）ng／L]增加了5倍，在共孵育后12h分泌值最高，但各组间不同时段IFN-γ分泌值的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论利用RNA干扰技术下调PED上的α1，3-半乳糖残基（reGal）的表达，未引起NK92和PED相互作用的明显改变。α-Gal可能并非是NK细胞作用的靶位点，其表达量的高低对NK细胞的活化、粘附及杀伤能力未产生负性影响。 展开更多
关键词 RNA干扰 杀伤细胞 天然 内皮细胞 半乳糖转移酶类
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