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蜂胶HPLC指纹图谱及质量控制 被引量:19
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作者 朱恩圆 窦玉玲 +2 位作者 魏东芝 王峥涛 卢艳花 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第18期1423-1425,共3页
目的:研究蜂胶HPLC指纹图谱,对蜂胶进行质量控制。方法:采用RP-HPLC测定。结果:不同来源的蜂胶所含黄酮类成分之间的相似性较大,其差异较小。结论:可以采用HPLC指纹图谱,对市场上蜂胶的品种和蜂胶保健品的真伪进行鉴别。
关键词 蜂胶 黄酮 HPLC指纹图谱 质量控制
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日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶的生物信息学鉴定与分析 被引量:4
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作者 杨忠 胡薇 +4 位作者 苏谨 马骊 李亦学 冯正 魏东芝 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期272-275,共4页
目的鉴定日本血吸虫中存在的腺嘌呤磷酸核糖转移酶,分析其蛋白结构特征。方法采用双向同源比对、结构域搜索和系统发育分析等生物信息学手段,在已有转录组和蛋白质组数据基础上鉴定日本血吸虫的腺嘌呤磷酸核糖转移酶,并采用同源建模方... 目的鉴定日本血吸虫中存在的腺嘌呤磷酸核糖转移酶,分析其蛋白结构特征。方法采用双向同源比对、结构域搜索和系统发育分析等生物信息学手段,在已有转录组和蛋白质组数据基础上鉴定日本血吸虫的腺嘌呤磷酸核糖转移酶,并采用同源建模方法获得日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶的结构特征。结果获得了2条腺嘌呤磷酸核糖转移酶的同源蛋白序列;分析了这2条序列的EST丰度、理化性质及蛋白三维结构等信息。结论日本血吸虫至少存在2个腺嘌呤磷酸核糖转移酶的异构体。 展开更多
关键词 日本血吸虫 腺嘌呤磷酸核糖转移酶 生物信息学
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新方法活化聚乙二醇修饰细胞因子类药物 被引量:5
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作者 何明磊 熊玉春 魏东芝 《药物生物技术》 CAS CSCD 2005年第3期158-161,共4页
文章提供一种活化聚乙二醇的新方法。其主要步骤是先把聚乙二醇两端的两个羟基转化为羧基,然后在活化两个羧基的同时,用含有氨基的试剂将其中的一个活化端封闭,从而造成单端活化的状态,使之适合对蛋白质等物质进行修饰反应。使用该方法... 文章提供一种活化聚乙二醇的新方法。其主要步骤是先把聚乙二醇两端的两个羟基转化为羧基,然后在活化两个羧基的同时,用含有氨基的试剂将其中的一个活化端封闭,从而造成单端活化的状态,使之适合对蛋白质等物质进行修饰反应。使用该方法活化的分子质量为10ku的聚乙二醇修饰了重组人白细胞介素2,分子质量为12ku的聚乙二醇修饰了重组人干扰素α2b,取得了较好的修饰效果。 展开更多
关键词 聚乙二醇 活化 细胞因子 修饰
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通过分析来自Pyrococcus abyssi的腈水解酶中带电基团位置变化探讨蛋白耐热机制 被引量:1
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作者 汤晓芒 张鲁嘉 +3 位作者 崔东冰 姚志强 王学东 魏东芝 《生物加工过程》 CAS CSCD 2012年第6期29-33,共5页
蛋白含带电侧链基团的氨基酸的位置对蛋白质的热稳定性有很大的影响,目前,往往采用蛋白质结构模型"静态"分析这一影响。本文以1株耐热的腈水解酶作为研究对象,构建并异源表达了该酶,对其酶学性质进行初步分析。利用Discovery ... 蛋白含带电侧链基团的氨基酸的位置对蛋白质的热稳定性有很大的影响,目前,往往采用蛋白质结构模型"静态"分析这一影响。本文以1株耐热的腈水解酶作为研究对象,构建并异源表达了该酶,对其酶学性质进行初步分析。利用Discovery Studio对该酶进行同源建模,得到空间结构。将此空间结构利用Gromacs软件在不同温度下进行分子动力学(MD)模拟,使用Macrodox软件计算蛋白质所有带电氨基酸残基的包埋率与溶剂可接触性面积(SA),发现在不同温度下,部分氨基酸带电基团的SA值会发生显著变化。说明通过静态分析并不一定能够得到非常准确的结果,而应进行动态分析。 展开更多
关键词 同源建模 分子动力学 溶剂可接触性 腈水解酶 热稳定性
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Determination of Candicidin/FR-008 and Related Components in Fermentation Broth by RP-HPLC
5
作者 毛相朝 沈亚领 +2 位作者 魏东芝 陈实 邓子新 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS 2005年第2期115-118,共4页
Aim A liquid chromatographic method for the determination ofcandicidin/FR-008 and related components in fermentation broth has been developed. Methods Therewere four major components in the candicidin/FR-008 complex, ... Aim A liquid chromatographic method for the determination ofcandicidin/FR-008 and related components in fermentation broth has been developed. Methods Therewere four major components in the candicidin/FR-008 complex, which were separated by HPLC under thefollowing conditions: SB-C8 column (4.6 mm x 250 mm, 5 μm) was used, the mobile phase consisted ofacetonitrileam-monium acteate (20 mmol·L^(-1) , pH 4.0) (40:60, V/V) , with a flow rate of 1 .0mL·min^(-1) , the UV detection wavelength was 380 nm, and the whole process was performed at 25℃ .Results The linearity was obtained in the range of 6.25 - 500 μg· mL^(-1) candicidin/FR-008 withthe regression equation of Y = 20 461 x + 30 748 and the correlation coefficient of 0.999 1. Theinstrument precision was 1.84% and the method precision was 3.8%. Conclusion This method isaccurate, rapid and simple; it can be used for determination of candicidin/FR-008 and relatedcomponents in fermentation broth. 展开更多
关键词 candicidin/FR-008 HPLC fermentation broth METABOLITES
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反相高效液相色谱法对大鼠体内菲达司他的药代分析
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作者 汪吉忠 任宇红 +2 位作者 欧伶 张鲁嘉 魏东芝 《生物加工过程》 CAS CSCD 2008年第4期74-77,共4页
建立反相高效液相色谱(RP—HPLC)测定大鼠血浆中菲达司他浓度的方法,在此基础上对菲达司他在大鼠体内的药代动力学进行初步研究。菲达司他的血浆样品利用乙酸乙酯提取法进行处理,色谱检测条件为用安捷伦Zorbax Eclipse XDB C18色谱... 建立反相高效液相色谱(RP—HPLC)测定大鼠血浆中菲达司他浓度的方法,在此基础上对菲达司他在大鼠体内的药代动力学进行初步研究。菲达司他的血浆样品利用乙酸乙酯提取法进行处理,色谱检测条件为用安捷伦Zorbax Eclipse XDB C18色谱柱,紫外检测波长200nm,流动相中v(水):v(甲醇)为72.28,流速1mL/min,柱温30℃。建立的RP—HPLC法线性范围为0.8~400ug/mL(R=0.9997)。提取回收率大于95%,日内、日间精密度相对标准差(RSD)小于2%。本法简便、准确,适用于菲达司他药代动力学的研究;菲达司他在大鼠体内的药代动力学过程二室模型. 展开更多
关键词 菲达司他 反相高效液相色谱法 药代动力学
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假丝酵母Candida rugosa产脂肪酶条件的优化(英文) 被引量:8
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作者 张立莹 魏东芝 童望宇 《生命科学研究》 CAS CSCD 2003年第4期320-323,345,共5页
对假丝酵母Candidarugosa产脂肪酶的条件进行了优化.比较实验证明,碳源是影响酶产量的主要因素.其中,糖类使细胞生长良好,但酶产量较低,而脂类是较为适合的碳源.本实验首次发现长链的不饱和脂肪酸酯,三油酸甘油酯是最好的碳源.氮源的影... 对假丝酵母Candidarugosa产脂肪酶的条件进行了优化.比较实验证明,碳源是影响酶产量的主要因素.其中,糖类使细胞生长良好,但酶产量较低,而脂类是较为适合的碳源.本实验首次发现长链的不饱和脂肪酸酯,三油酸甘油酯是最好的碳源.氮源的影响较小.而添加物的使用是有效提高脂肪酶产量的另一种方法.PVA可促进碳源的乳化,从而提高脂肪酶产量.吐温虽没有促进细胞生长,但却大幅度提高了酶的产量.将以上优化的结果应用于发酵罐中,分批流加操作时,脂肪酶产量高达每毫升128.2单位,为目前报道的最高值. 展开更多
关键词 假丝酵母 脂肪酶 碳源 诱导物
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粘质沙雷氏菌产2,3-丁二醇培养基的优化 被引量:9
8
作者 李元芳 徐勤 +3 位作者 曹学 王学东 沈亚领 魏东芝 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期24-28,共5页
研究了各种碳源、氮源、柠檬酸及无机盐对细胞生长与产物形成的影响,通过单因子、正交及中心组合设计响应面分析优化发酵培养基。结果表明在培养基中添加柠檬酸不但可以促进细胞生长与糖耗速度,还可以缩短发酵周期,提高2,3-丁二醇的产... 研究了各种碳源、氮源、柠檬酸及无机盐对细胞生长与产物形成的影响,通过单因子、正交及中心组合设计响应面分析优化发酵培养基。结果表明在培养基中添加柠檬酸不但可以促进细胞生长与糖耗速度,还可以缩短发酵周期,提高2,3-丁二醇的产量。采用优化后的培养基,2,3-丁二醇的产量由14.03g/L增加到39.27g/L,提高了近3倍。 展开更多
关键词 2 3-丁二醇 粘质沙雷氏菌 柠檬酸 培养基 响应面分析
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虫草素高产菌株的筛选及菌丝体中核苷类成分的分析 被引量:8
9
作者 刘艳芳 唐庆九 +6 位作者 杨焱 张劲松 冯娜 周帅 蔡令仪 高君辉 魏东芝 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2010年第6期1061-1064,共4页
用高效液相色谱对摇瓶培养获得的19个虫草属菌株的菌丝体及胞外液中核苷类成分进行了分析比较。结果表明,菌丝体中含有的核苷种类较多,且不同菌株菌丝体核苷类成分含量差异显著,而胞外液中的核苷主要为虫草素。同时发现虫草素主要分泌... 用高效液相色谱对摇瓶培养获得的19个虫草属菌株的菌丝体及胞外液中核苷类成分进行了分析比较。结果表明,菌丝体中含有的核苷种类较多,且不同菌株菌丝体核苷类成分含量差异显著,而胞外液中的核苷主要为虫草素。同时发现虫草素主要分泌到培养基中,胞外液虫草素的含量可比菌丝体中高出40倍。通过筛选,获得一株虫草素高产菌株,培养液中虫草素含量可达366mg/L。 展开更多
关键词 深层发酵 虫草素 核苷 胞外液
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粘质沙雷氏菌利用蔗糖和柠檬酸铵生产2,3-丁二醇的研究 被引量:5
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作者 杨云龙 张燎原 +4 位作者 孙建安 魏东芝 周文瑜 沈亚领 朱家文 《化学与生物工程》 CAS 2009年第9期41-44,共4页
研究了几种无机氮源对粘质沙雷氏菌发酵生物量和产物2,3-丁二醇形成的影响,在确定柠檬酸铵为无机氮源的基础上,利用响应面法(RSM)对柠檬酸铵和硫酸锰的浓度进行了优化,得出了最佳浓度,并以此最优成分进行了摇瓶发酵和分批补料发酵。在... 研究了几种无机氮源对粘质沙雷氏菌发酵生物量和产物2,3-丁二醇形成的影响,在确定柠檬酸铵为无机氮源的基础上,利用响应面法(RSM)对柠檬酸铵和硫酸锰的浓度进行了优化,得出了最佳浓度,并以此最优成分进行了摇瓶发酵和分批补料发酵。在摇瓶发酵中,110g·L-1的蔗糖最终被转化成44g·L-1的2,3-丁二醇,转化率为0.4g.g-1,产率为1.13g·L-1.h-1;在分批补料发酵中,共有166g·L-1的蔗糖被消耗,2,3-丁二醇的最高浓度为81.2g.L-1,乙偶姻的浓度为7.7g·L-1,2,3-丁二醇转化率达到0.489g.g-1,产率达到1.7g·L-1.h-1。 展开更多
关键词 粘质沙雷氏菌 无机氮源 2 3-丁二醇 响应面法 分批补料发酵
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培养条件及培养基组分对粘质沙雷氏菌生长及产D-乳酸的影响 被引量:6
11
作者 满永博 范季瀛 +2 位作者 苏刚 饶犇 沈亚领 《化学与生物工程》 CAS 2013年第7期56-60,70,共6页
通过摇瓶实验,确定粘质沙雷氏菌发酵生产D-乳酸的培养条件为:温度34℃,pH值6.5,种子液接种量5%,载液量为150mL/500mL,采用前期通气有氧培养至菌体对数生长后期、而后厌氧发酵产酸的两阶段培养工艺。考察培养基各组分对菌体生长及乳酸产... 通过摇瓶实验,确定粘质沙雷氏菌发酵生产D-乳酸的培养条件为:温度34℃,pH值6.5,种子液接种量5%,载液量为150mL/500mL,采用前期通气有氧培养至菌体对数生长后期、而后厌氧发酵产酸的两阶段培养工艺。考察培养基各组分对菌体生长及乳酸产量的影响,确定葡萄糖及酵母粉作为碳、氮源,并补充添加适量的无机氮。培养基各组分如下(g·L-1):葡萄糖15,酵母粉15,KH2PO41.5,K2HPO4.3H2O 2.0,MgSO4.7H2O 1.0,FeSO4.7H2O 0.03,MnSO4.H2O 0.005,以此培养条件及培养基配方进行摇瓶发酵,D-乳酸产量由(13.5±1.29)g.L-1提高至(29.0±1.42)g·L-1,提高一倍以上,光学纯度大于97%。 展开更多
关键词 粘质沙雷氏菌 D-乳酸 培养条件 培养基组分
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微小根毛霉耐热α-淀粉酶基因的克隆与高效表达(英文) 被引量:5
12
作者 何正贵 尹燕辰 +4 位作者 毛佑志 周思行 潘琪 魏东芝 高蓓 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期165-172,共8页
【目的】开发具有高表达活力的耐热耐酸新型真菌α-淀粉酶,研究其酶学性质和催化活性,探讨其潜在工业应用潜力。【方法】采用RT-PCR从嗜热真菌微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)中克隆耐热α-淀粉酶基因,并命名为RpAmy。以质粒pPIC9K... 【目的】开发具有高表达活力的耐热耐酸新型真菌α-淀粉酶,研究其酶学性质和催化活性,探讨其潜在工业应用潜力。【方法】采用RT-PCR从嗜热真菌微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)中克隆耐热α-淀粉酶基因,并命名为RpAmy。以质粒pPIC9K为表达载体,将α-淀粉酶基因(RpAmy)转入毕赤酵母(Pichia pastoris)表达宿主KM71,进行异源表达,并测定动力学参数和酶学性质,分析水解淀粉的产物。【结果】克隆得到嗜热真菌微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)耐热α-淀粉酶基因,其开放阅读框全长1416 bp,编码471个氨基酸,与米根毛霉α-淀粉酶的氨基酸序列相似性最高(56.0%)。RpAmy在毕赤酵母(Pichia pastoris)KM71中表达,最高酶活达到32100.0 U/mL,蛋白表达量为1.5 mg/mL;测定纯化后RpAmy比活力、Km和Vmax,分别为6745.9 U/mg、2.26 mg/mL、0.2875 mg/mL·min;最适pH和最适温度分别为pH 4.0、70℃;具有较宽的pH耐受性(4.0~9.0)和较高的温度耐受性(60℃);水解可溶性淀粉产物主要为麦芽糖(69.0%,w/w)和葡萄糖(22.0%,w/w)。【结论】从微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)中克隆得到α-淀粉酶基因(RpAmy),其可在毕赤酵母(Pichia pastoris)KM71中高效异源表达并得到α-淀粉酶RpAmy。该酶具有较好的耐酸耐热性质,并能水解淀粉产生高麦芽糖含量的糖浆,在工业应用方面具有很大的潜力。 展开更多
关键词 微小根毛霉 Α-淀粉酶 表达 麦芽糖 毕赤酵母
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分枝杆菌Mycobacterium sp.NwIB-01 3-甾酮-9α-羟基化酶基因的克隆、异源表达及分离纯化 被引量:5
13
作者 范书玥 魏巍 +1 位作者 王风清 魏东芝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2014-2021,共8页
3-甾酮-9α-羟基化酶(KSH)是微生物甾体降解途径中的关键酶,在甾体药物制备中有重要价值。以本实验室从土壤中自行筛选的分枝杆菌Mycobacterium sp.NwIB-01为出发菌株,利用红平红球菌Rhodococcus erythropolis SQ1已报道的ksh序列与已... 3-甾酮-9α-羟基化酶(KSH)是微生物甾体降解途径中的关键酶,在甾体药物制备中有重要价值。以本实验室从土壤中自行筛选的分枝杆菌Mycobacterium sp.NwIB-01为出发菌株,利用红平红球菌Rhodococcus erythropolis SQ1已报道的ksh序列与已全基因组测序的分枝杆菌序列数据库进行比对分析,根据同源基因设计简并引物获得部分ksh序列,通过染色体步移扩增出全长ksh(命名为M.S.-ksh),该基因与耻垢分枝杆菌M.smegmatis mc2155的ksh同源性为85%。构建pET32-ksh表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高表达重组转化子菌株,经IPTG低温诱导,SDS-PAGE电泳分析,目的蛋白主要为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上,用Ni2+亲和层析柱纯化,纯度达90%以上。本研究为利用基因工程菌进行工业化生产甾体药物奠定了基础。 展开更多
关键词 分枝杆菌NwIB-01 3-甾酮-9α-羟基化酶 甾体降解 异源表达 分离纯化
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短小芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆、表达及酶学性质研究 被引量:4
14
作者 苏二正 吴向萍 +1 位作者 高蓓 魏东芝 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期132-138,共7页
从土壤样品中通过筛菌过程获得一株产脂肪酶的菌株,经16S rRNA鉴定属于短小芽孢杆菌,根据已报道的来源于芽孢杆菌的脂肪酶基因设计引物,克隆获得其全长基因,命名为lipS6,大小为648 bp,编码215个氨基酸,经比对其与已报道的脂肪酶基因B26... 从土壤样品中通过筛菌过程获得一株产脂肪酶的菌株,经16S rRNA鉴定属于短小芽孢杆菌,根据已报道的来源于芽孢杆菌的脂肪酶基因设计引物,克隆获得其全长基因,命名为lipS6,大小为648 bp,编码215个氨基酸,经比对其与已报道的脂肪酶基因B26有96%的同源性。构建重组表达质粒pET32a-lipS6,在大肠杆菌中实现了可溶表达,酶活达到2 000 U/mL。重组脂肪酶LipS6的最适温度为30℃,最适pH为9,低浓度的Ca2+与Mn2+对其有很明显的激活作用,疏水性有机溶剂对其毒害作用小,在正己烷体系中可以催化酯化反应,最适酯化底物酸为十四酸,底物醇为正丁醇。 展开更多
关键词 脂肪酶 短小芽孢杆菌 基因克隆 重组表达 性质
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葡萄糖流加策略对基因工程FR-008/杀念菌素衍生物CS103补料分批发酵过程的影响 被引量:1
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作者 毛相朝 杨亮 +3 位作者 陈实 沈亚领 魏东芝 邓子新 《工业微生物》 CAS CSCD 2009年第2期1-6,共6页
以组合生物合成技术得到的链霉菌FR-008突变株CS103为研究对象,研究了3.7L发酵罐上维持一定葡萄糖浓度对其次级代谢产物脱羧FR-008/candicidin衍生聚酮抗生素CS103生物合成的影响。当初始葡萄糖浓度20g/L,发酵过程还原糖浓度维持在10g/L... 以组合生物合成技术得到的链霉菌FR-008突变株CS103为研究对象,研究了3.7L发酵罐上维持一定葡萄糖浓度对其次级代谢产物脱羧FR-008/candicidin衍生聚酮抗生素CS103生物合成的影响。当初始葡萄糖浓度20g/L,发酵过程还原糖浓度维持在10g/L时,抗生素CS103最高产量较分批发酵最高产量相比提高30%。研究了3.7L罐上补料分批发酵生产CS103的工艺,主要考察了脉冲补料、间歇流加补料和连续流加补料三种补料分批发酵工艺,并与分批发酵进行了比较。连续流加补料维持糖浓度的效果明显,最高产量达到126.9μg/mL,与分批发酵相比提高了44%左右。 展开更多
关键词 葡萄糖 流加策略 补料分批发酵 基因工程FR-008/杀念菌素
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提高重组TRAIL表达产率的优化策略 被引量:3
16
作者 鲍熹珺 魏东芝 +4 位作者 沈亚领 周劲松 张国钧 孙菁 球谊 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期74-80,共7页
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Apo2L/TRAIL)是一种新型的抗肿瘤蛋白。针对缩短发酵周期,提高生产效率这一目标,首先在摇瓶中利用响应面设计优化发酵表达条件,总TRAIL蛋白的表达量提高到25.7%。在此基础上研究了发酵条件对可溶性TRAIL... 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Apo2L/TRAIL)是一种新型的抗肿瘤蛋白。针对缩短发酵周期,提高生产效率这一目标,首先在摇瓶中利用响应面设计优化发酵表达条件,总TRAIL蛋白的表达量提高到25.7%。在此基础上研究了发酵条件对可溶性TRAIL蛋白表达量的影响。于3.7L发酵罐放大进行补料-分批发酵实验时,单位菌体可溶性TRAIL蛋白的表达量提高了67%,实现了在大肠杆菌高密度培养过程中单位细胞重组TRAIL蛋白的可溶性表达和体积生产率的提高。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 重组大肠杆菌 响应面法 发酵优化
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粘质沙雷氏菌G1利用玉米浆干粉和磷酸氢二铵生产2,3-丁二醇的研究 被引量:3
17
作者 郝英利 张燎原 +4 位作者 孙建安 魏东芝 周文瑜 沈亚领 朱家文 《化学与生物工程》 CAS 2013年第6期34-38,共5页
研究了几种工业氮源对粘质沙雷氏菌G1发酵生产2,3-丁二醇的影响,在确定玉米浆干粉为氮源的基础上,利用Plackett-Burman(PB)实验和响应面法(RSM)实验对玉米浆干粉和磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]的浓度进行了优化,确定优化培养基(g·L-1)为... 研究了几种工业氮源对粘质沙雷氏菌G1发酵生产2,3-丁二醇的影响,在确定玉米浆干粉为氮源的基础上,利用Plackett-Burman(PB)实验和响应面法(RSM)实验对玉米浆干粉和磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]的浓度进行了优化,确定优化培养基(g·L-1)为:蔗糖90,玉米浆干粉20.32,(NH4)2HPO47.21,NaAc 4,柠檬酸钠14,MgSO40.5,Fe-SO40.02,MnSO40.01。并以此优化培养基进行了摇瓶和分批补料发酵,结果表明,摇瓶发酵中,90g·L-1的蔗糖最终被转化成43.06g·L-1的2,3-丁二醇;分批补料发酵中,2,3-丁二醇浓度为128.28g·L-1,产率为2.67g·L-1·h-1,转化率为0.48g·g-1蔗糖。以玉米浆干粉和(NH4)2HPO4为氮源,2,3-丁二醇浓度较高,培养基的成本大幅降低,为工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 粘质沙雷氏菌G1 玉米浆干粉 磷酸氢二铵 2 3-丁二醇 响应面法 成本 分批补料发酵
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酶及其生物催化技术的研究与应用 被引量:2
18
作者 杨林 陈志 +1 位作者 姜水琴 魏东芝 《生物产业技术》 2019年第3期25-35,共11页
与传统化学催化工艺相比,基于酶的生物催化工艺具有反应条件温和、环境友好、操作简便、立体选择性优良等优势。当前已有多个生物催化工艺应用于生产精细大宗化学品和高附加值医药中间体,此外在食品、化妆品等领域也有广泛的应用。主要... 与传统化学催化工艺相比,基于酶的生物催化工艺具有反应条件温和、环境友好、操作简便、立体选择性优良等优势。当前已有多个生物催化工艺应用于生产精细大宗化学品和高附加值医药中间体,此外在食品、化妆品等领域也有广泛的应用。主要综述了酶及其生物催化技术的研究进展,包括酶序的构建、酶的定向进化,以及酶与生物催化技术在大宗化学品、医药中间体、食品、化妆品、纺织以及纸浆造纸工业中的应用。 展开更多
关键词 生物催化 选择性 精细大宗化学品 高附加值医药中间体
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gdh和ldh基因共表达重组大肠杆菌合成D-乳酸研究 被引量:3
19
作者 胡媛 周文瑜 +1 位作者 魏东芝 沈亚领 《药物生物技术》 CAS 2014年第1期13-17,共5页
D-聚乳酸是一种生物可降解材料,具有高热稳定性,生物合成其单体D-乳酸将具有广阔的前景。以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增葡萄糖脱氢酶基因gdh,与表达载体pETduet-1连接获得pETduetGDH;再以粘质沙雷氏菌基因组DNA为模板,PCR扩增... D-聚乳酸是一种生物可降解材料,具有高热稳定性,生物合成其单体D-乳酸将具有广阔的前景。以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增葡萄糖脱氢酶基因gdh,与表达载体pETduet-1连接获得pETduetGDH;再以粘质沙雷氏菌基因组DNA为模板,PCR扩增乳酸脱氢酶基因ldh,与已构建的pETduet-GDH连接获得pETduet-LG,转化E.Coli BL21共表达。过表达GDH和LDH大肠杆菌可不对称还原丙酮酸合成D-乳酸。经全细胞转化条件优化发现,添加NAD+能提高起始反应速度,在最佳温度37℃、0.2 mol/L磷酸缓冲液、pH7.0、细胞浓度OD值为40和丙酮酸20 g/L时,底物转化率可达86.5%,D-乳酸产量为17.3 g/L。 展开更多
关键词 D-乳酸 乳酸脱氢酶 葡萄糖脱氢酶 共表达 辅酶再生 全细胞转化
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基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物发酵过程优化 被引量:2
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作者 杨亮 毛相朝 +4 位作者 周文瑜 陈实 沈亚领 邓子新 魏东芝 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期333-337,共5页
以组合生物合成技术得到的基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物CS103为研究对象,在摇瓶水平进行培养条件的初步优化。确定了接种量、接种时间、发酵过程pH、装液量等初步条件。对3.7L发酵罐水平的培养条件进行优化,确定了最适搅拌转... 以组合生物合成技术得到的基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物CS103为研究对象,在摇瓶水平进行培养条件的初步优化。确定了接种量、接种时间、发酵过程pH、装液量等初步条件。对3.7L发酵罐水平的培养条件进行优化,确定了最适搅拌转速和通气量,并初步建立了补料分批发酵工艺。结果表明,接种时间30h、接种量为10%、控制pH6.5-7.0、搅拌转速450r/min、通气量200L/h,发酵过程维持发酵液残余葡萄糖浓度5g/L左右,在3.7L发酵罐基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物CS103产量达到99.87μg/ml。本研究为基因工程FR-008/杀念菌素工业化生产工艺提供了依据。 展开更多
关键词 链霉菌FR-008 基因工程FR-008/杀念菌素 衍生物 发酵过程优化
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