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抗α干扰素双特异性抗体的制备与初步评价
被引量:
1
1
作者
陈鸿斌
侯小娟
+6 位作者
袁旭东
于晓妍
徐磊
王双
郁雯科
杜鹏
孙志伟
《生物技术通讯》
CAS
2017年第6期742-749,共8页
目的:研制对α干扰素(IFN-α)中和活性有突破性提升的双特异性抗体。方法:以靶向IFN-α不同表位的中和单抗Amilimumab和Sifalimumab为基础,采用FIT-Ig(Fabs-in-tandem immunoglobulin)双特异性抗体平台技术,通过分子克隆方法构建针对IFN...
目的:研制对α干扰素(IFN-α)中和活性有突破性提升的双特异性抗体。方法:以靶向IFN-α不同表位的中和单抗Amilimumab和Sifalimumab为基础,采用FIT-Ig(Fabs-in-tandem immunoglobulin)双特异性抗体平台技术,通过分子克隆方法构建针对IFN-α的双特异性抗体FIT2的表达载体,并在Free Style 293-F系统中进行瞬时转染表达;采用protein A柱亲和纯化目标双特异性抗体,SDS-PAGE初步考察目标抗体的相对分子质量、组分及纯度;采用forte BIO系统鉴定其整体结合活性,并分别确认双特异性抗体的2个抗原结合表位的活性;通过ELISA方法评价其特异性,37℃放置实验鉴定其稳定性,Daudi细胞增殖实验定量评价双特异性抗体的中和活性。结果:构建了双特异性抗体FIT2表达载体,在Free Style 293-F系统中实现了瞬转高效表达,表达量为127 mg/L,亲和纯化获得目标双特异性抗体FIT2,纯度可达98.5%;FIT2结构稳定,具有良好的特异性,未发现与其他类型的干扰素及细胞因子存在交叉反应;FIT2对IFN-α1b-His的结合活性显著优于2个亲本抗体,特别是解离过程的改善尤为明显;同时,FIT2有效保留了2个抗原结合表位的活性;细胞增殖实验结果显示,FIT2对IFN-α1b具有优越的中和活性,其中和效能显著高于任一亲本抗体,明显优于2个亲本抗体联用。结论:获得了对IFN-α1b中和活性有突破性提升的双特异性抗体FIT2,特异性良好且结构稳定,有望成为治疗IFN-α相关疾病的良好的成药候选分子。
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关键词
双特异性抗体
FIT-Ig
Α干扰素
抗原结合表位
中和活性
下载PDF
职称材料
抗人OX40单克隆抗体的制备和初步鉴定
2
作者
侯小娟
陈鸿斌
+3 位作者
袁旭东
王双
仇玮祎
孙志伟
《生物技术通讯》
CAS
2017年第3期242-248,376,共8页
目的:获得全人源抗人OX40特异性抗体候选株,为相关药物开发奠定基础。方法:依托本实验室构建的大容量全合成全人源噬菌体单链抗体库平台,以OX40为抗原进行固相筛选,经过3轮条件渐进严苛的筛选后,阳性克隆得到富集;将其中富集效果最好的...
目的:获得全人源抗人OX40特异性抗体候选株,为相关药物开发奠定基础。方法:依托本实验室构建的大容量全合成全人源噬菌体单链抗体库平台,以OX40为抗原进行固相筛选,经过3轮条件渐进严苛的筛选后,阳性克隆得到富集;将其中富集效果最好的一株单链抗体scFv-1改造成全抗体(Ig G1)形式,改造成功的重组质粒按照一定比例转染HEK293-F细胞进行抗体的瞬时表达;基于AKTA系统对全抗体进行纯化,将纯化得到的全抗体重命名为OX40mab-1。通过ELISA、间接免疫荧光、流式细胞术等试验分别验证OX40mab-1与抗原的结合活性、特异性、血清稳定性;通过BIAcore 3000初步测定抗体亲和力。结果:3轮筛选后得到1株富集率达95%的单链抗体,改造成全抗体形式后,与抗原OX40的结合EC50为0.015μmol/L;该抗体与其他无关抗原均不结合,特异性良好;37℃血清放置15 d后,与抗原依具有较好的结合活性,血清稳定性良好;经BIAcore 3000初步测定该抗体亲和力为251 nmol/L。结论:获得1株理化性质良好、特异性较好的抗OX40全人源单克隆抗体OX40mab-1,具有继续开发价值。
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关键词
OX40
单克隆抗体
噬菌体抗体
特异性
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职称材料
题名
抗α干扰素双特异性抗体的制备与初步评价
被引量:
1
1
作者
陈鸿斌
侯小娟
袁旭东
于晓妍
徐磊
王双
郁雯科
杜鹏
孙志伟
机构
军
事医学科学院生物工程研究所
北方
战区
空军
参谋部
门诊部
杭州口腔医院城西分院
出处
《生物技术通讯》
CAS
2017年第6期742-749,共8页
文摘
目的:研制对α干扰素(IFN-α)中和活性有突破性提升的双特异性抗体。方法:以靶向IFN-α不同表位的中和单抗Amilimumab和Sifalimumab为基础,采用FIT-Ig(Fabs-in-tandem immunoglobulin)双特异性抗体平台技术,通过分子克隆方法构建针对IFN-α的双特异性抗体FIT2的表达载体,并在Free Style 293-F系统中进行瞬时转染表达;采用protein A柱亲和纯化目标双特异性抗体,SDS-PAGE初步考察目标抗体的相对分子质量、组分及纯度;采用forte BIO系统鉴定其整体结合活性,并分别确认双特异性抗体的2个抗原结合表位的活性;通过ELISA方法评价其特异性,37℃放置实验鉴定其稳定性,Daudi细胞增殖实验定量评价双特异性抗体的中和活性。结果:构建了双特异性抗体FIT2表达载体,在Free Style 293-F系统中实现了瞬转高效表达,表达量为127 mg/L,亲和纯化获得目标双特异性抗体FIT2,纯度可达98.5%;FIT2结构稳定,具有良好的特异性,未发现与其他类型的干扰素及细胞因子存在交叉反应;FIT2对IFN-α1b-His的结合活性显著优于2个亲本抗体,特别是解离过程的改善尤为明显;同时,FIT2有效保留了2个抗原结合表位的活性;细胞增殖实验结果显示,FIT2对IFN-α1b具有优越的中和活性,其中和效能显著高于任一亲本抗体,明显优于2个亲本抗体联用。结论:获得了对IFN-α1b中和活性有突破性提升的双特异性抗体FIT2,特异性良好且结构稳定,有望成为治疗IFN-α相关疾病的良好的成药候选分子。
关键词
双特异性抗体
FIT-Ig
Α干扰素
抗原结合表位
中和活性
Keywords
bispecific antibody
Fabs-in-tandem immunoglobulin
interferon-α
antigen-binding site
neutralizing activity
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
Q78 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
抗人OX40单克隆抗体的制备和初步鉴定
2
作者
侯小娟
陈鸿斌
袁旭东
王双
仇玮祎
孙志伟
机构
军
事医学科学院生物工程研究所
北方
战区
空军
参谋部
门诊部
出处
《生物技术通讯》
CAS
2017年第3期242-248,376,共8页
文摘
目的:获得全人源抗人OX40特异性抗体候选株,为相关药物开发奠定基础。方法:依托本实验室构建的大容量全合成全人源噬菌体单链抗体库平台,以OX40为抗原进行固相筛选,经过3轮条件渐进严苛的筛选后,阳性克隆得到富集;将其中富集效果最好的一株单链抗体scFv-1改造成全抗体(Ig G1)形式,改造成功的重组质粒按照一定比例转染HEK293-F细胞进行抗体的瞬时表达;基于AKTA系统对全抗体进行纯化,将纯化得到的全抗体重命名为OX40mab-1。通过ELISA、间接免疫荧光、流式细胞术等试验分别验证OX40mab-1与抗原的结合活性、特异性、血清稳定性;通过BIAcore 3000初步测定抗体亲和力。结果:3轮筛选后得到1株富集率达95%的单链抗体,改造成全抗体形式后,与抗原OX40的结合EC50为0.015μmol/L;该抗体与其他无关抗原均不结合,特异性良好;37℃血清放置15 d后,与抗原依具有较好的结合活性,血清稳定性良好;经BIAcore 3000初步测定该抗体亲和力为251 nmol/L。结论:获得1株理化性质良好、特异性较好的抗OX40全人源单克隆抗体OX40mab-1,具有继续开发价值。
关键词
OX40
单克隆抗体
噬菌体抗体
特异性
Keywords
OX40
monoclonal antibody
phage displayed antibody
specificity
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗α干扰素双特异性抗体的制备与初步评价
陈鸿斌
侯小娟
袁旭东
于晓妍
徐磊
王双
郁雯科
杜鹏
孙志伟
《生物技术通讯》
CAS
2017
1
下载PDF
职称材料
2
抗人OX40单克隆抗体的制备和初步鉴定
侯小娟
陈鸿斌
袁旭东
王双
仇玮祎
孙志伟
《生物技术通讯》
CAS
2017
0
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职称材料
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