RNAi沉默survivin和HIF-1α基因对胃癌BGC-823细胞体外增殖和凋亡的影响 被引量：8

1

作者 王淼 母润红 +1 位作者 李明成 李洪杰 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期753-758,893,共7页

目的:应用RNA干扰(RNAi)技术抑制胃癌BGC-823细胞中survivin和HIF-1α基因的表达,探讨其对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别设计并合成经过化学修饰的靶向survivin和HIF1αmRNA的小干扰RNA(siRNAs),同时合成错义RNA(SCR),采... 目的:应用RNA干扰(RNAi)技术抑制胃癌BGC-823细胞中survivin和HIF-1α基因的表达,探讨其对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别设计并合成经过化学修饰的靶向survivin和HIF1αmRNA的小干扰RNA(siRNAs),同时合成错义RNA(SCR),采用HifectinⅡ真核体外转染胃癌BGC-823细胞,将转染siRNA-survivin、siRNA-HIF-1α和SCR的各组细胞分别命名为sis组、siH组和SCR组,同时设空白对照组(无血清培养基),RT-PCR法检测各组细胞中survivin和HIF-1αmRNA表达水平。将胃癌BGC-823细胞分为单干扰组(survivin-siRNA,sis组)、联合干扰组(survivin-siRNA+HIF1α-siRNA,sis+siH组)、非靶向特异性组(SCR组)和空白对照组(无血清培养基),MTT法检测各组细胞增殖活性,Western blotting法检测各组细胞中survivin和HIF-1α蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:与空白对照组比较,sis组细胞中survivin mRNA表达水平和siH组细胞中HIF-1αmRNA表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。与空白对照组比较,SCR组细胞增殖活性无明显变化(P>0.05),sis组和sis+siH组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);与sis组比较,sis+siH组细胞增殖活性明显降低(P<0.05)。与空白对照组比较,sis+siH组细胞中surviving和HIF-1α蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:联合靶向沉默survivin和HIF-1α基因可下调靶基因的表达,抑制胃癌BGC-823细胞增殖,促进细胞凋亡,RNAi基因沉默技术有望成为治疗胃癌的新方法。 展开更多

关键词 人胃癌BGC-823细胞 小干扰RNA SURVIVIN 缺氧诱导因子1Α 细胞增殖 细胞凋亡

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灵芝酸A对人非小细胞肺癌PC-9细胞增殖和凋亡的影响及其机制 被引量：1

2

作者 任爱华 鞠欣达 +2 位作者 柳骜飞 刘永超 刘岩峰 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1466-1472,共7页

目的:探讨灵芝酸A(GAA)对PC-9细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养非小细胞肺癌(NSCLC)PC-9细胞,分为对照组(未加GAA)、低剂量GAA组(0.1 mmol·L^(-1)GAA)和高剂量GAA组(0.5 mmol·L^(-1)GAA)。采... 目的:探讨灵芝酸A(GAA)对PC-9细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养非小细胞肺癌(NSCLC)PC-9细胞,分为对照组(未加GAA)、低剂量GAA组(0.1 mmol·L^(-1)GAA)和高剂量GAA组(0.5 mmol·L^(-1)GAA)。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组PC-9细胞增殖率,流式细胞术检测各组PC-9细胞凋亡率,细胞划痕实验检测各组PC-9细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测各组PC-9细胞迁移能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组PC-9细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及蛋白表达水平。结果:MTT法检测,与对照组比较,处理48和72 h时低剂量GAA组细胞增殖率均降低(P<0.05),处理24、48和72 h时高剂量GAA组细胞增殖率均降低(P<0.05);与低剂量GAA组比较,处理24、48和72 h时高剂量GAA组细胞增殖率均降低(P<0.05)。流式细胞术检测,与对照组和低剂量GAA组比较,高剂量GAA组细胞凋亡率升高(P<0.05)。细胞划痕实验,与对照组和低剂量GAA组比较,高剂量GAA组细胞划痕愈合率降低(P<0.05)。Transwell小室实验,与对照组和低剂量GAA组比较,高剂量GAA组迁移细胞数减少(P<0.05)。RT-qPCR法和Western blotting法检测,与对照组和低剂量GAA组比较,高剂量GAA组细胞中HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:高剂量GAA可抑制PC-9细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控VEGF和HIF-1αmRNA及蛋白表达有关。 展开更多

关键词 灵芝酸A 癌 非小细胞肺 血管内皮生长因子 缺氧诱导因子1Α 细胞增殖 细胞凋亡

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Lewis肺癌细胞TLR4对Foxp3表达的调控 被引量：1

3

作者 历春 杨巍 +3 位作者 张英林 盖晓东 李一 付海英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期701-705,共5页

目的:探讨小鼠Lewis肺癌(Lewis lung cancer,LLC)细胞中TLR4对Foxp3表达的调控作用。方法:选择LPS为配体活化TLR4,采用RT-PCR方法检测LPS在不同浓度(0,1,10μg/ml)和不同时间点(12,24,36,48小时)Foxp3 mRNA的表达量的变化,流式细胞术检... 目的:探讨小鼠Lewis肺癌(Lewis lung cancer,LLC)细胞中TLR4对Foxp3表达的调控作用。方法:选择LPS为配体活化TLR4,采用RT-PCR方法检测LPS在不同浓度(0,1,10μg/ml)和不同时间点(12,24,36,48小时)Foxp3 mRNA的表达量的变化,流式细胞术检测有效浓度LPS 10μg/ml和最佳作用时间点24小时Foxp3蛋白和TLR4蛋白表达量的变化,RT-PCR和流式细胞术检测anti-TLR4/MD2抗体阻断TLR4后再用LPS刺激LLC细胞Foxp3表达量的变化。结果:LPS在10μg/ml浓度作用LLC细胞后可显著上调Foxp3 mRNA的表达量,与未刺激组相比差异显著(P<0.05);LPS最佳作用时间为24小时;LPS在10μg/ml浓度作用LLC细胞24小时后可显著上调Foxp3蛋白和TLR4蛋白的表达量,与对照组相比差异显著(P<0.05);阻断TLR4后再用LPS刺激LLC细胞,Foxp3的表达量较未阻断组明显降低(P<0.05)。结论:LLC细胞TLR4蛋白参与对Foxp3的表达调控,TLR4可能是Foxp3的上游信号分子。 展开更多

关键词 叉头蛋白3 LEWIS肺癌 TOLL样受体4 脂多糖

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幽门螺旋杆菌检测方法及其应用价值的研究进展 被引量：6

4

作者 常明珠 李雨澎 +1 位作者 母润红 朱建宇 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期253-260,共8页

幽门螺旋杆菌(Hp)是一种定植于人类胃部并对机体造成一定损害的病原菌。多年来针对Hp的各类检测技术不断被研发改进并被应用于临床Hp感染的诊断中,以组织病理切片法为代表的侵入性检测方法因有创性而使其应用范围受限,以^(13/14)C呼气... 幽门螺旋杆菌(Hp)是一种定植于人类胃部并对机体造成一定损害的病原菌。多年来针对Hp的各类检测技术不断被研发改进并被应用于临床Hp感染的诊断中,以组织病理切片法为代表的侵入性检测方法因有创性而使其应用范围受限,以^(13/14)C呼气试验为代表的非侵入性检测方法因无创和简便等特点更易被患者接受,但不同检测方法均存在一定的局限性,因此需考虑患者年龄、既往史、当地医疗条件、检测方法的可靠性和检测成本等因素选择适合患者的Hp检测方法,可以帮助临床医生及时并准确地做出诊断。近年来对于Hp检测技术的研究已不仅局限于Hp的定性检测,定量检测、基因检测和分型检测方法也在不断探索和更新,家用检测试剂盒的开发也为Hp检测带来了更多的可能性。现从侵入性和非侵入性2个方面就近年来Hp检测方法的检测原理、检测灵敏度和特异度等进行综述,为Hp感染的临床诊疗和科学研究提供参考。 展开更多

关键词 幽门螺旋杆菌 检测方法 侵入性 非侵入性

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重组人IL-17A在胃癌组织中的表达及其对胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响 被引量：5

5

作者 母润红 艾一玖 +4 位作者 李雨澎 林睿 叶思萍 马方 郭笑 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1510-1517,共8页

目的:检测人白细胞介素17A(IL-17A)重组蛋白在人胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:收集胃癌患者术后石蜡标本30例、肠上皮化生标本20例和正常胃组织标本10例。免疫组织化学染色... 目的:检测人白细胞介素17A(IL-17A)重组蛋白在人胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:收集胃癌患者术后石蜡标本30例、肠上皮化生标本20例和正常胃组织标本10例。免疫组织化学染色法检测各种组织中IL-17A和白细胞介素17受体A(IL-17RA)的阳性表达率,Pearson相关分析法分析IL-17A与IL-17RA表达的相关性。将对数生长期BGC-823细胞分为对照组和不同浓度(50、100和200μg·L-1)IL-17A组。MTT法检测各组胃癌BGC-823细胞增殖活性,流式细胞术检测各组胃癌BGC-823细胞凋亡率,Transwell实验检测各组胃癌BGC-823细胞侵袭细胞数,划痕实验检测各组胃癌BGC-823细胞迁移率,Western blotting法检测各组胃癌BGC-823细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果:肠上皮化生和胃癌组织中IL-17A和IL-17RA阳性表达率明显高于正常胃组织(P<0.01),胃癌组织中IL-17A与IL-17RA表达呈正相关关系(r=0.891,P<0.01)。IL-17A作用48和72 h后,与对照组比较,100和200μg·L^(-1)IL-17A组胃癌BGC-823细胞增殖活性升高(P<0.05)。与对照组比较,100和200μg·L-1IL-17A组胃癌BGC-823细胞凋亡率明显降低(P<0.01),侵袭细胞数和细胞迁移率升高(P<0.05);Western blotting法检测,与对照组比较,200μg·L^(-1)IL-17A组胃癌BGC-823细胞中VEGF、MMP-9和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bax蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:重组人IL-17A可促进胃癌BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡,其作用机制可能与促进侵袭相关蛋白VEGF和MMP-9表达以及抑制凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达有关。 展开更多

关键词 白细胞介素17A 白细胞介素17受体A 胃肿瘤 细胞凋亡 细胞迁移

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PRDX6过表达对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制 被引量：4

6

作者 母润红 刘馨竹 +4 位作者 林睿 李雨澎 王璐瑶 王春雨 郭笑 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期559-565,共7页

目的:探讨过表达过氧化物氧化还原蛋白6(PRDX6)基因对肝细胞癌增殖、侵袭和迁移的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:人肝癌HepG2和Hep3B细胞分为过表达PRDX6组(转染过表达质粒PIRES-EGFP-PRDX6)和空载体组(转染对照质粒PIRES)。实时... 目的:探讨过表达过氧化物氧化还原蛋白6(PRDX6)基因对肝细胞癌增殖、侵袭和迁移的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:人肝癌HepG2和Hep3B细胞分为过表达PRDX6组(转染过表达质粒PIRES-EGFP-PRDX6)和空载体组(转染对照质粒PIRES)。实时荧光定量PCR(RTqPCR)和Western blotting法检测2组肝癌细胞中PRDX6 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测2组肝癌细胞增殖活性,划痕实验检测2组肝癌细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测2组肝癌细胞的侵袭细胞数。Western blotting法检测2组细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平。结果:RT-qPCR和Western blotting法检测,过表达PRDX6组肝癌细胞中PRDX6 mRNA和蛋白表达水平明显高于空载体组(P<0.05)。MTT法检测,过表达PRDX6组肝癌细胞的增殖活性明显高于空载体组(P<0.05)。划痕实验和Tanswell小室实验检测,与空载体组比较,过表达PRDX6组肝癌细胞划痕愈合率和侵袭细胞数升高(P<0.05)。Western blotting检测,与空载体组比较,过表达PRDX6组肝癌细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:PRDX6过表达可增强肝癌HepG2和Hep3B细胞体外增殖、侵袭及迁移能力,其作用机制可能与PRDX6过表达调控MMP-2和MMP-9蛋白表达水平有关。 展开更多

关键词 肝肿瘤 过氧化物氧化还原蛋白6 细胞增殖 细胞侵袭 细胞迁移

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IL-17A在非小细胞肺癌组织中的表达及其通过NF-κB信号通路对VEGF表达的调控作用 被引量：4

7

作者 何程远 杨红宇 +3 位作者 谭钰晶 苏杭 李泓澍 历春 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期1003-1009,共7页

目的:探讨白细胞介素17A(IL-17A)在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的作用及其通过核转录因子κB(NF-κB)信号通路对血管内皮生长因子(VEGF)的调控作用,阐明其相关机制。方法:收集NSCLC术后石蜡标本55例,免疫组织化学染色法检测正常肺组... 目的:探讨白细胞介素17A(IL-17A)在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的作用及其通过核转录因子κB(NF-κB)信号通路对血管内皮生长因子(VEGF)的调控作用,阐明其相关机制。方法:收集NSCLC术后石蜡标本55例,免疫组织化学染色法检测正常肺组织和NSCLC组织中IL-17A和CD31的表达,分析IL-17A阳性表达率与NSCLC患者临床病理参数的关系,Pearson相关分析法分析IL-17A表达与CD31标记的微血管密度(MVD)的相关性。选取对数生长期的人肺腺癌A549细胞,将A549细胞分为对照组(A549细胞)、外源性重组人IL-17A(rhIL-17A)组、BAY11-7082组(NF-κB信号通路抑制剂)和联合组(rhIL-17A+BAY11-7082),Western blotting法检测各组A549细胞中IL-17受体A(IL-17RA)、P65、磷酸化P65(p-P65)和VEGF蛋白表达水平,MTT法检测各组A549细胞培养上清液作用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)48 h后各组细胞增殖活性。结果:NSCLC组织中IL-17A阳性表达率明显高于正常肺组织(P<0.05),低分化组NSCLC患者IL-17A阳性表达率明显高于高-中分化组(P<0.05),NSCLC组织中IL-17A表达与MVD呈正相关关系(r=0.329,P<0.05)。与对照组比较,rhIL-17A组细胞中IL-17RA、p-P65和VEGF蛋白表达水平明显升高(P<0.05),BAY11-7082组细胞中IL-17RA、p-P65和VEGF表达水平明显降低(P<0.01);与rhIL-17A组比较,联合组细胞中IL-17RA、p-P65和VEGF表达水平明显降低(P<0.05)。各组培养上清液作用HUVECs后,与对照组比较,rhIL-17A组细胞增殖活性明显升高(P<0.05),BAY11-7082组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);与rhIL-17A组比较,联合组细胞增殖活性明显降低(P<0.05)。结论:IL-17A在低分化NSCLC细胞中高表达,其可通过NF-κB信号通路调控VEGF的表达进而促进HUVECs的增殖。 展开更多

关键词 白细胞介素17A 非小细胞肺癌 核转录因子ΚB 血管内皮生长因子 人脐静脉内皮细胞

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急性髓系白血病患者血清外泌体中miR-92a-3p的表达及其意义 被引量：1

8

作者 王涵 张亚丽 +3 位作者 全海薇 母润红 邹雨彤 夏薇 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期467-472,共6页

目的:检测急性髓系白血病(AML)患者血清外泌体中微小RNA-92a-3p (miR-92a-3p)表达水平,探讨其对AML的诊断价值。方法:选取AML患者51例(AML组)和34名同期健康体检志愿者(对照组)作为研究对象,收集研究对象外周血标本;差速离心法提取血清... 目的:检测急性髓系白血病(AML)患者血清外泌体中微小RNA-92a-3p (miR-92a-3p)表达水平,探讨其对AML的诊断价值。方法:选取AML患者51例(AML组)和34名同期健康体检志愿者(对照组)作为研究对象,收集研究对象外周血标本;差速离心法提取血清外泌体,通过透射电子显微镜、纳米粒度分析仪和Western blotting法鉴定外泌体;采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组研究对象血清外泌体中miR-92a-3p表达水平;根据血清外泌体中miR-92a-3p表达水平绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算ROC曲线下面积(AUC),确定其临界值,根据灵敏度和特异度评估miR-92a-3p表达水平对AML的诊断效能。结果:在透射电子显微镜下外泌体呈外观圆形且中间凹陷的膜状结构,纳米粒度分析仪检测外泌体粒径为30~100 nm,Western blotting法在提取外泌体中检测到CD63和CD9蛋白表达。与对照组比较,AML组患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平明显降低(P<0.01);ROC曲线分析,血清外泌体miR-92a-3p诊断AML的最佳临界值为0.51,灵敏度为76.47%,特异度为94.12%,AUC为0.913,AUC 95%置信区间(CI)为(0.856,0.971)(P<0.001)。结论:AML患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平诊断AML的灵敏度和特异度较高,可应用于早期AML的临床诊断。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 外泌体 微小RNA-92a-3p 肿瘤标志物

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FOXP3基因沉默抑制肺腺癌A549细胞上皮-间质转化和改善5-氟尿嘧啶耐药性 被引量：3

9

作者 历春 王鹤霏 +3 位作者 何程远 房惠 裴怡杰 盖晓东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1212-1217,共6页

目的:探究叉头蛋白3(FOXP3)基因沉默对肺腺癌上皮-间质转化(EMT)及5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药性的影响。方法:构建2段特异性针对FOXP3基因的siRNA片段,并将其通过脂质体介导转染至肺腺癌A549细胞,同时设立转染无义序列的阴性对照组。将转染后... 目的:探究叉头蛋白3(FOXP3)基因沉默对肺腺癌上皮-间质转化(EMT)及5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药性的影响。方法:构建2段特异性针对FOXP3基因的siRNA片段,并将其通过脂质体介导转染至肺腺癌A549细胞,同时设立转染无义序列的阴性对照组。将转染后的A549细胞分为3组:si-NC组(阴性对照)、si-FOXP3-1组和si-FOXP3-2组。qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中FOXP3的表达水平,Western blot检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平,Transwell检测各组细胞迁移和侵袭能力,ELISA检测各组细胞上清液中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白浓度。qRT-PCR和Western blot检测5-FU处理A549细胞后FOXP3表达水平,CCK-8检测各组细胞对5-FU的敏感性,Western blot检测各组细胞中P-糖蛋白(P-gp)表达水平。结果:与si-NC组相比,si-FOXP3-1和si-FOXP3-2组中FOXP3在mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),EMT相关蛋白Vimentin和N-cadherin表达明显下降而E-cadherin表达明显升高(P<0.01),细胞迁移和侵袭能力明显减弱(P<0.01),MMP-2和MMP-9蛋白浓度明显降低(P<0.01)。5-FU处理的A549细胞中FOXP3表达水平显著高于未经5-FU处理组(P<0.05),与si-NC组相比,si-FOXP3-1组和si-FOXP3-2组细胞对5-FU的敏感性显著增加(P<0.05),P-gp表达显著降低(P<0.01)。结论:FOXP3基因沉默可抑制肺腺癌A549细胞EMT,改善5-FU的耐药性。 展开更多

关键词 叉头蛋白3 肺腺癌 上皮-间质转化 5-氟尿嘧啶 药物敏感性

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尿素通道蛋白B在人膀胱癌组织中的表达及其临床意义 被引量：1

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作者 历春 付天悦 +1 位作者 杨宝学 盖晓东 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期705-708,I0003,共5页

目的:检测膀胱癌患者肿瘤组织和正常膀胱黏膜组织中尿素通道蛋白B(UT-B)的表达,阐明其在膀胱癌组织中表达的临床意义。方法:收集临床膀胱癌患者术后石蜡包埋标本52例,以正常膀胱黏膜组织15例作为对照,采用免疫组织化学方法检测UT-B蛋白... 目的:检测膀胱癌患者肿瘤组织和正常膀胱黏膜组织中尿素通道蛋白B(UT-B)的表达,阐明其在膀胱癌组织中表达的临床意义。方法:收集临床膀胱癌患者术后石蜡包埋标本52例,以正常膀胱黏膜组织15例作为对照,采用免疫组织化学方法检测UT-B蛋白阳性表达率,分析UT-B蛋白阳性表达率在膀胱癌组织和正常膀胱黏膜表达的差异以及其与患者临床病理参数的关联。结果:UT-B蛋白在膀胱癌组织中低表达,阳性表达率为44.2%;在正常膀胱黏膜组织中高表达,阳性表达率为93.3%,2组UT-B蛋白阳性表达率比较差异有统计学意义(P=0.001)。膀胱癌组织中UT-B蛋白的阳性表达率随肿瘤组织分级的增高而逐渐降低,不同分级间比较差异有统计学意义(P=0.010)。膀胱癌组织中UT-B蛋白在非肌层浸润期(Ta+T1)的阳性表达率明显高于肌层浸润期(T2+T3),组间比较差异有统计学意义(P=0.014)。结论:UT-B蛋白的表达降低或缺失可能促进了膀胱癌的发生发展和侵袭。 展开更多

关键词 膀胱肿瘤 尿素通道蛋白B 免疫组织化学

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FOXP3调控非小细胞肺癌A549细胞对阿霉素敏感性的作用及其机制 被引量：1

11

作者 盖晓东 赵颖 +3 位作者 王鹤霏 何程远 王星翔 历春 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1161-1167,共7页

目的:探讨叉头蛋白3(FOXP3)基因沉默后非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞对阿霉素(Dox)敏感性的变化,阐明其参与Dox耐药的机制。方法:采用脂质体法将FOXP3小干扰RNA(siRNA)片段转染至人NSCLC A549细胞,细胞分为空白对照组(不转染)、si-NC组(... 目的:探讨叉头蛋白3(FOXP3)基因沉默后非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞对阿霉素(Dox)敏感性的变化,阐明其参与Dox耐药的机制。方法:采用脂质体法将FOXP3小干扰RNA(siRNA)片段转染至人NSCLC A549细胞,细胞分为空白对照组(不转染)、si-NC组(转染对照siRNA)和si-FOXP3组(转染FOXP3-siRNA)。采用Westernblotting法和免疫荧光法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平,CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性和半数抑制浓度(IC50)值。各组A549细胞中分别加入0、10和20μmol·L^(-1)DAPT,作为0、10和20μmol·L^(-1)DAPT组;另取A549细胞,分别加入0μmol·L^(-1)DAPT、1.0mg·L^(-1)Dox和1.0mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT,作为0μmol·L^(-1)DAPT组、1.0 mg·L^(-1)Dox组和1.0 mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT组。Western blotting法检测各组细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平,CCK-8和Western blotting法检测0、10和20μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞的IC50值和细胞中Notch1、Hes1及FOXP3蛋白表达水平,Western blotting法检测0μmol·L^(-1)DAPT组、1.0 mg·L^(-1)Dox组和1.0 mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞中FOXP3、P-糖蛋白(P-gp)、Notch1和Hes1蛋白表达水平。结果:与空白对照和si-NC组比较,si-FOXP3组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),增殖活性和IC50值降低(P<0.05或P<0.01),细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与0μmol·L^(-1)DAPT组比较,10和20μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞中Notch1、Hes1和FOXP3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与0μmol·L^(-1)DAPT组比较,1.0 mg·L^(-1)Dox组A549细胞中FOXP3、P-gp、Notch1和Hes1蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与1.0 mg·L^(-1)Dox组比较,1.0 mg·L^(-1)Dox联合10μmol·L^(-1)DAPT组A549细胞中FOXP3、P-gp、Notch1和Hes1蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:沉默FOXP3可提高NSCLC细胞对Dox的敏感性,其作用机制与抑制Notch1/Hes1信号通路有关。 展开更多

关键词 癌 非小细胞肺 叉头蛋白3 NOTCH1 阿霉素 药物敏感性

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Tum-5基因对肝细胞癌生长的抑制作用和对血管生成的影响

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作者 历春 关新刚 +2 位作者 王英楠 徐聪睿 盖晓东 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期58-62,共5页

目的:探讨肿瘤抑素5(Tum-5)基因对肝细胞癌的抑制作用及对血管生成的影响,阐明其参与抗肿瘤生成的作用机制。方法:体外实验选择人肝癌HepG-2细胞,采用不同感染复数(MOI)(0、1、5、10、25和50)的pLXSN和pLXSN-Tum-5病毒颗粒感染72h,MTT... 目的:探讨肿瘤抑素5(Tum-5)基因对肝细胞癌的抑制作用及对血管生成的影响,阐明其参与抗肿瘤生成的作用机制。方法:体外实验选择人肝癌HepG-2细胞,采用不同感染复数(MOI)(0、1、5、10、25和50)的pLXSN和pLXSN-Tum-5病毒颗粒感染72h,MTT法检测各组细胞增殖率。体内构建肝癌H22荷瘤小鼠模型,分为saline组、pLXSN组和pLXSN-Tum-5组,每组5只。saline组小鼠瘤内注射生理盐水,pLXSN组和pLXSN-Tum-5组小鼠瘤内分别注射相应的病毒颗粒(MOI=5),隔日注射,共注射5次。测定各组小鼠移植瘤体积、质量和小鼠体质量,免疫组织化学法检测CD31蛋白在各组小鼠移植瘤组织中的表达,计算微血管密度(MVD)。结果:与pLXSN组比较,不同MOI pLXSN-Tum-5组的细胞增殖率差异无统计学意义(P>0.05);荷瘤鼠瘤内注射结束后,pLXSN-Tum-5组小鼠移植瘤体积和质量均明显小于pLXSN组和saline组(P<0.05或P<0.01);免疫组织化学检测,各组小鼠移植瘤内均有形态不规则的新生血管生成,与saline组和pLXSN组比较,pLXSN-Tum-5组小鼠移植瘤组织MVD平均值明显降低(P<0.05)。结论:Tum-5可通过抑制肝癌组织内新生血管的生成发挥抑瘤作用。 展开更多

关键词 肝细胞癌 肿瘤抑素 血管生成 逆转录病毒载体

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MMP-14和TIMP-2在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

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作者 历春 顾晓琪 盖晓东 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期990-994,F0003,共6页

目的:检测基质金属蛋白酶14(MMP-14)和基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)在结直肠癌组织中的表达情况,探讨MMP-14和TIMP-2在结直肠癌组织中的表达与临床病理指标及二者之间的关系。方法:收集结直肠癌术后石蜡包埋标本60例,正常结直肠组... 目的:检测基质金属蛋白酶14(MMP-14)和基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)在结直肠癌组织中的表达情况,探讨MMP-14和TIMP-2在结直肠癌组织中的表达与临床病理指标及二者之间的关系。方法:收集结直肠癌术后石蜡包埋标本60例,正常结直肠组织20例作为对照,采用免疫组织化学SP法检测MMP-14和TIMP-2的表达水平,分析MMP-14和TIMP-2在结直肠癌中的表达与正常结直肠组织的差异及其与临床病理指标和二者之间的关系。结果:MMP-14和TIMP-2在结直肠癌组织中高表达,阳性率分别为86.7%和80.0%,高于正常结直肠组织(P<0.01)。MMP-14的表达与结直肠癌肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期密切关联,在浸润浆膜组、有淋巴结转移组和Dukes C+D期的阳性表达率分别为89.5%、94.1%和94.3%,显著高于未及浆膜组、无淋巴结转移组和Dukes A+B期的68.2%、73.1%和76.0%(P<0.05)。TIMP-2的表达与结直肠癌肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和Dukes分期密切关联,在浸润浆膜组、有淋巴结转移组和Dukes C+D期的阳性表达率分别为55.3%、64.7%和62.9%,显著低于未及浆膜组、无淋巴结转移组和Dukes A+B期的81.8%、88.5%和92.0%(P<0.05)。MMP-14和TIMP-2在结直肠癌组织中的表达呈显著负相关(rs=-1.0,P<0.05)。结论:结直肠癌组织中MMP-14的高表达可能促进了肿瘤的浸润和转移,TIMP-2在结直肠癌的发生发展中可能起抑制作用,二者之间的平衡失调可能是肿瘤侵袭和转移的重要机制之一。 展开更多

关键词 基质金属蛋白酶14 基质金属蛋白酶抑制因子2 结直肠肿瘤 侵袭转移

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