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全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性 被引量：9
1
作者 孟晓光 甄里 +5 位作者 刘悦玫 侯利平 刘丹 李斌 欧阳伟民 魏开华 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期343-348,共6页
评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特... 评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特征峰(p I 5.95±0.01);比较重组人生长激素原液和成品,等电点特征峰比例差异明显,且成品有新特征峰出现;对比进口及国产贝伐单抗,发现厂家1、3与原研药基本一致,厂家1的主成分迁移规律与原研药高度一致,厂家2的重链C末端K缺失、N末端焦谷氨酸环化或脱酰胺修饰影响了电荷异质性;通过考察尿素浓度、电解质范围和聚焦时间,优化了检测重组人促卵泡素等电点条件:2 mol/L尿素,两性电解质pH 2.5~5.0与pH 3.0~10.0按1∶1混合,聚焦电压1 000 V(1 min)~1 800 V(4 min)~2 200 V(1 min)。cIEF-WCID可快速、准确测定具有电荷异质性的蛋白类药物等电点,分辨率和重复性好,尤其是可以跟踪聚焦过程中样本的迁移特征,特别适合蛋白类药物复杂电荷异质性的检测。 展开更多
关键词 全柱成像毛细管等电聚焦电泳 电荷异质性 重组蛋白质药物 抗体 药学研究
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重组人肝再生因子可溶性表达及活性鉴定
2
作者 李春男 毛羚羽 +5 位作者 黄瑞麟 高慧英 岳鹏升 丁可盺 贾东明 崔春萍 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期339-343,共5页
目的探索重组人肝细胞生成素Cn(HPPCn)蛋白可溶性表达方法和纯化工艺,提高其比活性和蛋白产量,为发展新的急性肝病治疗药物奠定基础。方法利用分子生物学方法构建4个HPPCn原核表达载体,分别与不同的分子伴侣融合表达,助其表达后正确折... 目的探索重组人肝细胞生成素Cn(HPPCn)蛋白可溶性表达方法和纯化工艺,提高其比活性和蛋白产量,为发展新的急性肝病治疗药物奠定基础。方法利用分子生物学方法构建4个HPPCn原核表达载体,分别与不同的分子伴侣融合表达,助其表达后正确折叠。利用亲和层析方法纯化获得的融合蛋白,MTS法检测所得重组蛋白促进细胞增殖活性。结果成功构建了4个HPPCn表达载体,其中p MBP-P-HPPCn实现了rh HPPCn的可溶性表达。结论首次建立了重组HPPCn蛋白的可溶性生产方法,并对其蛋白活性进行分析和鉴定。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 肝细胞生成素Cn 重组蛋白质类 可溶性表达 MBP融合蛋白 蛋白纯化 肝细胞增殖
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联合UV及SDS-PAGE监测并优化碳二亚胺偶联法制备多肽免疫原 被引量：3
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作者 侯利平 傅海媛 +10 位作者 陶亚岚 黄亚娟 孙云波 宋纯艳 夏云飞 杨保安 韩治国 肖汉族 郑俊杰 甄蓓 魏开华 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期783-788,共6页
建立了一种多肽免疫抗原偶联的双监测法,获得一种操作简便、成功率高、适用范围广的碳二亚胺偶联法,并应用于多种肿瘤相关多肽标志物的免疫抗原制备。以合成多肽SP0104为标准品,牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,碳二亚胺(EDC)为偶联剂,对... 建立了一种多肽免疫抗原偶联的双监测法,获得一种操作简便、成功率高、适用范围广的碳二亚胺偶联法,并应用于多种肿瘤相关多肽标志物的免疫抗原制备。以合成多肽SP0104为标准品,牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,碳二亚胺(EDC)为偶联剂,对加样顺序、投料比、偶联时间等关键条件进行考察,采用UV和SDS-PAGE对反应产物进行联合监测,以偶联比和偶联率联合评价反应条件。加样顺序为多肽和载体蛋白先混合再加到碳二亚胺中,三者质量比为1∶1∶1,偶联时间为12 h,偶联比在4∶1～12∶1之间,偶联率在9%～20%之间,所得SP0104多抗效价达到1∶80 000,MALDI-TOF质谱分析证实该抗体准确捕获目标抗原。用优化的偶联方法制备多肽SPC09、SPC15、SPG01、SPG03、SPG04的免疫抗原,所得免疫血清效价均在1∶1万以上,最高可达1∶51.2万。所建碳二亚胺多肽偶联联合监测法简便实用,可提高多肽抗体制备的成功率。 展开更多
关键词 多肽偶联 碳二亚胺偶联法 监测 抗体
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