微小RNA-92a抑制剂对高糖诱导的内皮细胞损伤的保护作用 被引量：1

1

作者 戴婧 金军华 +1 位作者 肖飞 郭立新 《中华糖尿病杂志》 CAS CSCD 2016年第5期299-303,共5页

目的探讨微小RNA（microRNA，miR）92a抑制剂对高糖诱导的内皮细胞损伤的作用。方法分离原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs），脂质体转染miR？92a抑制剂或阴性对照，采用5 mmol/L正常浓度葡萄糖或30 mmol/L葡萄糖刺激HUVECs 48 h后，分为4... 目的探讨微小RNA（microRNA，miR）92a抑制剂对高糖诱导的内皮细胞损伤的作用。方法分离原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs），脂质体转染miR？92a抑制剂或阴性对照，采用5 mmol/L正常浓度葡萄糖或30 mmol/L葡萄糖刺激HUVECs 48 h后，分为4组：空白组（5 mmol/L葡萄糖），高糖组（30 mmol/L葡萄糖），阴性对照＋高糖组（转染阴性对照＋30 mmol/L葡萄糖处理），miR？92a抑制剂＋高糖组（转染miR？92a抑制剂＋30 mmol/L葡萄糖处理）。处理后，用荧光实时定量PCR法分析miR？92a水平，Hoechst染色观察细胞核改变，MTS观察HUVECs活力，Western blotting检测caspase？3和cleaved caspase？3蛋白表达。2组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果高糖组（30 mmol/L）HUVECs与空白对照组相比，miR？92a水平增加31%（1.31±0.37比1，t=1.93，P〈0.05）。细胞数目减少，排列不规则，轮廓模糊。细胞核染色质浓缩凝集、边缘化，凋亡小体增加。细胞活力下降19%（81%±2%比1，t=-29.85，P〈0.01），cleaved caspase？3/caspase？3增加24%（0.31±0.07比0.25±0.02， t=2.18，P〈0.05）。miR？92a抑制剂＋高糖组HUVECs与高糖组相比，形态损伤减轻，凋亡小体减少，细胞活力增加9%（88%±11%比81%±2%，t=1.82，P〈0.05），cleaved caspase？3/caspase？3减少26%（0.23±0.03比0.31±0.07，t=-2.65，P〈0.05）。结论 miR？92a抑制剂可缓解高糖诱导的内皮细胞形态损伤、活力抑制，减少caspase？3激活。miR？92a具有成为防治糖尿病血管并发症靶点的临床价值。 展开更多

关键词 内皮细胞 微小RNAS 高糖 细胞活力 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3

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胰高血糖素样肽1通过调控葡萄糖调节蛋白78表达改善高糖及波动性高糖诱导的内皮细胞内质网应激及凋亡 被引量：5

2

作者 唐甜甜 郭立新 +4 位作者 潘琦 王晓霞 金军华 宫环 张恩毅 《中华糖尿病杂志》 CAS CSCD 2015年第11期684-688,共5页

目的探讨胰高血糖素样肽1（GLP-1）对持续性高糖和波动性高糖诱导的内皮细胞内质网应激及凋亡的保护作用和机制。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECS）分成6组：正常葡萄糖对照组（5．5mmol／L葡萄糖培养）、持续性高糖tN30mmol... 目的探讨胰高血糖素样肽1（GLP-1）对持续性高糖和波动性高糖诱导的内皮细胞内质网应激及凋亡的保护作用和机制。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECS）分成6组：正常葡萄糖对照组（5．5mmol／L葡萄糖培养）、持续性高糖tN30mmol／L葡萄糖培养）、波动性高糖组（5．5mmol／L和30mmol／L葡萄糖培养，每12h交替1次）、正常葡萄糖＋10nmol／LGLP-1组、持续性高糖＋10nmol／LGLP-1组、波动性高糖＋10nmol／LGLP．1组。后3组均先加入10nmol／LGLP-1预处理半小时，后以相应浓度葡萄糖培养。各组细胞经处理48h后，流式细胞仪测定细胞凋亡率，Westernblotting法检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）表达水平的变化。应用30mmol／L高糖处理HUVECS不同时间（0、3、6、12、24、48h），Westernblotting法检测加入GLP-1前后GRP78蛋白表达水平的变化。两组问比较采用LSD—t检验，多组比较采用单因素方差分析。结果将正常对照组的细胞凋亡率设定为1，波动性高糖组细胞凋亡率增至1．20＋0．05，与对照组差异有统计学意义（F=45．086，P〈0．05）；波动性高糖＋GLP-1组细胞凋亡率降至0．87-＋0．01，与波动性高糖组差异有统计学意义（t=17．400，P〈0．05）。与对照组（0h组，设定为1）相比，高糖处理HUVECS3hGRP78的表达量升高至1．62±0．48，差异有统计学意义（t=2．584，P〈0．05）；6h达到高峰（2．82±0．59），与对照组差异有统计学意义（t=6．123，P〈0．05）；12h后开始下降，高糖作用48h下降至0．98±0．59，与对照组相比无统计学差异（t=0．378，P〉0．05）。波动性高糖组GRP78的表达水平降至（0．77±0．04），与持续性高糖组（0．96±0．10）相比，差异有统计学意义（t=3．134，P〈0．05）。结论持续性高糖和波动性高糖均可引起内皮细胞发生内质网应激和凋亡，后者通过进一步抑制防御蛋白GRP7 展开更多

关键词 胰高血糖素样肽1 波动性高糖 葡萄糖调节蛋白78 人脐静脉内皮细胞

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热量限制对人二倍体成纤维细胞衰老相关基因表达的影响 被引量：5

3

作者 金军华 张铁梅 +4 位作者 韩彩和 张恩毅 张延 张宗玉 童坦君 《中华老年医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期520-523,共4页

目的观察热量限制对人二倍体成纤维细胞IMR-90衰老相关基因表达的影响。方法应用RT-PCR和Western blot的方法，对含低浓度（3．0mmol／L）、高浓度（22．5mmol／L）葡萄糖和正常对照组（含5．0mmol／L葡萄糖）培养条件下的IMR-90细胞衰... 目的观察热量限制对人二倍体成纤维细胞IMR-90衰老相关基因表达的影响。方法应用RT-PCR和Western blot的方法，对含低浓度（3．0mmol／L）、高浓度（22．5mmol／L）葡萄糖和正常对照组（含5．0mmol／L葡萄糖）培养条件下的IMR-90细胞衰老相关基因p16、p21和p53的mRNA和蛋白表达水平进行分析。结果与对照组和高糖培养条件下的早期和晚期细胞相比较，低浓度葡萄糖培养条件下的早期和晚期细胞p16和p21在mRNA水平均显著下降（P〈0．05）；低浓度葡萄糖组、对照组和高浓度葡萄糖培养组晚期细胞p16蛋白水平分别为4．2、7．4、9．7，比各自早期细胞表达（0．6、1．0、1．8）增加5～7倍；低浓度葡萄糖组，对照组和高浓度葡萄糖培养早期细胞和低糖培养晚期细胞p21蛋白水平差异无统计学意义，分别为1．1、1．0、1．3、0．9，但与对照组和高糖培养晚期细胞p21蛋白水平（3．1、4．2）相比较则降低3～4倍；各组培养条件下的早期和晚期细胞中p53表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论各组晚期细胞比各自早期细胞p16基因表达增高；对照组和高糖培养条件下的晚期细胞比各自早期细胞p21基因表达增高；低浓度葡萄糖培养延缓IMR-90细胞衰老并伴有p16和p21基因表达下调；p53基因可能不是IMR-90细胞复制衰老主要调节因子。 展开更多

关键词 热量限制 成纤维细胞 基因 P16 基因 p53 二倍性 衰老

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胰岛β-细胞的衰老

4

作者 胡刚 《国外医学（老年医学分册）》 1989年第2期60-63,共4页

随着年龄的增加,机体血糖水平也逐渐升高,糖耐量试验也出现改变;然而,血浆胰岛素水平不仅没有下降,反而升高。这种现象与胰岛β-细胞衰老有着密切的关系。动物实验表明,机体血糖、糖耐量试验出现改变的时候,β-细胞分泌胰岛素的功能下降... 随着年龄的增加,机体血糖水平也逐渐升高,糖耐量试验也出现改变;然而,血浆胰岛素水平不仅没有下降,反而升高。这种现象与胰岛β-细胞衰老有着密切的关系。动物实验表明,机体血糖、糖耐量试验出现改变的时候,β-细胞分泌胰岛素的功能下降,而血浆胰岛素的升高,则是由于老龄动物较青龄动物β-细胞数量多的结果。这可能是随血糖变化而出现的代偿变化的缘故。代偿变化不能完全补偿血糖的改变。不仅如此,β-细胞的其它一些功能也出现与年龄相关的改变,这些功能都与分泌胰岛素有关。因此,胰岛β-细胞的衰老问题,对于老年性糖尿病来说,可能是相当重要的。 展开更多

关键词 胰岛 β─细胞 衰老 糖尿病

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干细胞脑内移植有效标记研究:绿色荧光蛋白质粒标记的应用价值 被引量：15

5

作者 关云谦 陈彪 +2 位作者 刘平 邹春林 张愚 《中国临床康复》 CSCD 2004年第13期2506-2508,T002,共4页

目的:观察绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)质粒转化小鼠胚胎干细胞(embryonicstemcell,ESC)的效果,以及将转化的胚胎干细胞移植入正常大鼠纹状体后,GFP质粒作为细胞存活情况示踪剂的效果。方法:首先利用感受态大肠杆菌提取... 目的:观察绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)质粒转化小鼠胚胎干细胞(embryonicstemcell,ESC)的效果,以及将转化的胚胎干细胞移植入正常大鼠纹状体后,GFP质粒作为细胞存活情况示踪剂的效果。方法:首先利用感受态大肠杆菌提取大量高纯度GFP质粒DNA,然后将GFP质粒与脂质体孵育形成的转化复合物和小鼠胚胎干细胞共同孵育,使GFP质粒转入胚胎干细胞;筛选表达GFP的胚胎干细胞。将筛选后表达GFP的ESC移植入活体大鼠纹状体内,移植21d后,观察表达绿色荧光蛋白的移植细胞的存活情况。结果:GFP质粒转化以后的ES细胞团和单细胞都表达亮绿色的GFP,细胞打散计数证实大约60%的细胞携带GFP,移植21d后,大鼠脑内可见大量表达GFP的移植细胞。结论:脂质体可以将GFP质粒转入鼠的胚胎干细胞,携带有GFP的ES移植后21d,GFP可以作为示踪剂观察移植细胞的存活状况。脂质体辅助的GFP质粒转化胚胎干细胞是移植示踪的较好方法。 展开更多

关键词 干细胞脑内移植 有效标记 绿色荧光蛋白质粒标记 胚胎干细胞 转基因技术

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胚胎干细胞“五步法”体外诱导成为神经细胞的实验观察 被引量：7

6

作者 关云谦 陈彪 +1 位作者 邹春林 张愚 《中国临床康复》 CSCD 2004年第10期1851-1853,共3页

目的:采用“五步法”将鼠胚胎干细胞(embryonicstemcell,ES)诱导成为神经元和胶质细胞。方法:首先将ES细胞接种到铺有明胶的培养瓶里,在无滋养层细胞的情况下生长3d,然后将细胞悬浮培养4d成为胚胎体(,胚胎体经过无血清培养基培养6d,富集... 目的:采用“五步法”将鼠胚胎干细胞(embryonicstemcell,ES)诱导成为神经元和胶质细胞。方法:首先将ES细胞接种到铺有明胶的培养瓶里,在无滋养层细胞的情况下生长3d,然后将细胞悬浮培养4d成为胚胎体(,胚胎体经过无血清培养基培养6d,富集nestin阳性细胞,在有丝分裂原bFGF作用下扩增6d,最后经过烟酰胺诱导分化6d,共计经过5个步骤。结果:诱导出多量表达Tuj-1的不成熟神经元(约占分化后细胞数量的80%～90%)和表达神经胶质纤维酸性蛋白的星形胶质细胞(5%～10%),还有少量表达微管相关蛋白Ⅱ的成熟神经元(5%～10%)。结论:“五步法”诱导使胚胎干细胞在分化过程中处于不同的阶段,最终诱导出大量不成熟的神经元,少量星型胶质细胞和成熟神经元。为利用不同成熟度的分化细胞移植治疗神经系统疾病提供了充足的细胞来源。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 “五步法” 体外诱导 神经细胞 实验 神经元 神经系统疾病

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肌浆网钙离子泵与心血管疾病的研究进展 被引量：5

7

作者 于雪婧 邹彤 +1 位作者 金军华 杨杰孚 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2016年第12期1232-1234,共3页

心血管疾病是威胁人类健康和生存的最重要病因之一。心血管疾病属于慢性进展性疾病,治愈率极低,目前全球罹患心血管疾病的人数为2.9亿。众所周知,离子通道在维持心脏电生理活动中发挥着重要作用。钙离子通道则是最重要的离子通道之一,... 心血管疾病是威胁人类健康和生存的最重要病因之一。心血管疾病属于慢性进展性疾病,治愈率极低,目前全球罹患心血管疾病的人数为2.9亿。众所周知,离子通道在维持心脏电生理活动中发挥着重要作用。钙离子通道则是最重要的离子通道之一,它参与心肌细胞的电传导以及调控心肌细胞收缩和舒张过程。在心力衰竭、心律失常等心脏疾病中,钙离子依然发挥着重要作用。肌浆网钙离子泵(SERCA)亚型SERCA2a可以促进钙离子重新摄取至肌浆网中,SERCA2a功能紊乱可导致钙离子稳态受损,诱发缺血性心脏病、肥厚性心肌病、舒张性心肌病以及心力衰竭等心脏疾病的发生和恶化。因此SERCA2a在维持心脏正常功能和心脏疾病中发挥着重要作用。 展开更多

关键词 综述 钙通道 肌浆网转运ATP酶类 心血管疾病

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脂肪组织生物学功能的研究进展 被引量：1

8

作者 周立红 张铁梅 《国外医学（老年医学分册）》 2006年第2期83-86,共4页

随着肥胖发病率的日益升高和对肥胖在疾病发生中的作用认识的逐渐深入,脂肪组织的生理和病理生理特征越来越受到重视．要真正理解脂肪组织在诸多疾病中所起的作用,首先必须从整体上了解其功能．本文将综述脂肪组织功能中的那些必须相互... 随着肥胖发病率的日益升高和对肥胖在疾病发生中的作用认识的逐渐深入,脂肪组织的生理和病理生理特征越来越受到重视．要真正理解脂肪组织在诸多疾病中所起的作用,首先必须从整体上了解其功能．本文将综述脂肪组织功能中的那些必须相互作用以实现其生物学功能的方面:脂肪贮存和动员的调节;脂肪库的部位特异性;脂肪细胞的分化;脂肪组织的分泌功能;脂肪组织可能有的节律性行为。 展开更多

关键词 脂肪组织 脂肪平衡 分泌活动

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长链非编码核糖核酸与心血管疾病 被引量：1

9

作者 于雪婧 邹彤 +1 位作者 张恩毅 杨杰孚 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2017年第1期99-101,共3页

长链非编码核糖核酸(lnc RNA)是一类长度大于200 nt的非编码核糖核酸(RNA),它参与多种细胞生命活动和疾病的进展。由于科学技术的飞速发展,高通量测序以及微阵列技术的成熟,lnc RNA在心血管领域的研究中具有极大潜力。目前,lnc RNA在心... 长链非编码核糖核酸(lnc RNA)是一类长度大于200 nt的非编码核糖核酸(RNA),它参与多种细胞生命活动和疾病的进展。由于科学技术的飞速发展,高通量测序以及微阵列技术的成熟,lnc RNA在心血管领域的研究中具有极大潜力。目前,lnc RNA在心肌梗死、心肌缺血再灌注损伤、心力衰竭、高血压等疾病中均有涉及和研究报道。lnc RNA也是一类重要的生物标志物,对于心血管疾病的诊断、治疗及远期预后的评估发挥重要作用。lnc RNA的出现,为心血管疾病的诊疗带来希望。关于lnc RNA参与心血管疾病的深入机制,还有待进一步研究。 展开更多

关键词 综述 心血管疾病 长链非编码核糖核酸

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血管性血友病因子三个常见变异位点与肺血栓栓塞症的相关性 被引量：4

10

作者 孙月杰 许小毛 +4 位作者 孙亮 张恩毅 翟振国 方保民 肖飞 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第30期2428-2432,共5页

目的 探讨血管性血友病因子（VWF）基因三个常见变异位点rs216321、rs216325和rs1800378与肺血栓栓塞症（PTE）的相关性.方法 选取2008年11月至2012年3月卫生部北京医院及北京朝阳医院呼吸科确诊的95例PTE患者为PTE组,同期90名健康体检... 目的 探讨血管性血友病因子（VWF）基因三个常见变异位点rs216321、rs216325和rs1800378与肺血栓栓塞症（PTE）的相关性.方法 选取2008年11月至2012年3月卫生部北京医院及北京朝阳医院呼吸科确诊的95例PTE患者为PTE组,同期90名健康体检人群为对照组,均采集空腹静脉血,提取基因组DNA.挑选VWF中次要等位基因频率（MAF）＞ 0.05的三个单核苷酸多态性位点：rs216321 （T/C）、rs216325 （G/A）和rs1800378（T/C）,经聚合酶链反应（PCR）-Sanger法测序验证,分析两组各位点等位基因及基因型分布频率的差异,并分析其单倍型与PTE的相关性.结果 VWF基因rs216325 （G/A）、rs1800378 （T/C）位点的等位基因频率在两组间的分布差异有统计学意义（P =0.039、0.006）;rs216325中AA基因型与PTE的发生正相关（r=1.914,P=0.047）,rs1800378中TT基因型与PTE的发生正相关（r=0.282,P=0.008）.TGT单倍型在两组间的分布差异有统计学意义,该单倍型与PTE的发生正相关（r=0.239,P＜0.001）.结论 VWF基因rs216325及rs1800378位点的变异与PTE具有相关性,其中rs216325中AA基因型携带、rs1800378中TT基因型携带及TGT单倍型携带预示较高的PTE发病风险. 展开更多

关键词 肺栓塞 血管性血友病 多态性 单核苷酸 连锁不平衡

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下丘脑葡萄糖感受性神经元的研究

11

作者 吴小萌 张铁梅 《中华老年医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期752-754,共3页

关键词 下丘脑 中枢神经系统 糖代谢 外周 脑干 老年人 神经元 过程 参与 重要作用

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北京市老年人群中肌少症及其相关指标的现患特征 被引量：9

12

作者 曾平 吴司南 +6 位作者 韩怡文 宫环 庞婧 张延 张恩毅 张毅 张铁梅 《中华老年医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期478-482,共5页

目的了解北京市老年人群中肌少症及其相关指标的现患特征。方法采用横断面调查的方法，用标准问卷询问相关信息，内容包括人口学资料、现患史、生活习惯等信息。应用生物电阻抗仪测量肌肉质量，6m直线平常步行速度即步速来表示肌肉功能... 目的了解北京市老年人群中肌少症及其相关指标的现患特征。方法采用横断面调查的方法，用标准问卷询问相关信息，内容包括人口学资料、现患史、生活习惯等信息。应用生物电阻抗仪测量肌肉质量，6m直线平常步行速度即步速来表示肌肉功能，用握力器测量握力来表示肌力。结果肌肉质量随增龄下降（F=6．77、P：0．001），城市老年人肌肉质量低于农村（t=4．32、P=0．038）；肌力和步速也随增龄下降（F=7．62、15．79，p=0．0005、0．000），以女性和农村老年人更加明显。Logistic回归分析结果显示，年龄增加、女性握力降低的发生风险高（OR=1．13、1．92，均Pd0．05），而城市老年人握力降低的发生风险低（OR=0．10，P〈0．05）；年龄增加、体质指数（BMI）值高、生活无规律的老年人步速降低的发生风险高（OR=1．12、1．25、2．77，均P〈O．05），城市老年人、经常进行体育锻炼、有兴趣爱好者步速降低的发生风险低（OR=0．08、0．27、0．1l，均P〈0．05）。结论肌少症相关指标存在明显的增龄趋势和人群差异，积极、健康的生活方式有助于维护老年人躯体功能。 展开更多

关键词 肌疾病 握力

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