核酸适体技术及其在兽药残留检测中的应用 被引量：5

1

作者 段烨 高志强 +2 位作者 王慧珊 张鹤晓 李灏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第11期75-78,共4页

近年来,随着食品安全事件的频繁发生,兽药残留已逐渐成为人们普遍关注的一个社会热点问题。传统的兽药残留检测方法主要包括气相色谱法、液相色谱法、毛细管电泳法等,这些方法其具有检测灵敏度较高、稳定性较好等特点,但对样品洁净度的... 近年来,随着食品安全事件的频繁发生,兽药残留已逐渐成为人们普遍关注的一个社会热点问题。传统的兽药残留检测方法主要包括气相色谱法、液相色谱法、毛细管电泳法等,这些方法其具有检测灵敏度较高、稳定性较好等特点,但对样品洁净度的要求较高以及检测成本较高,使得这几种检测方法无法满足现场快检的要求。因此,人们有必要开发更为简单、快速、有效的兽药残留检测方法。 展开更多

关键词 兽药残留检测 检测成本 洁净度 液相色谱法 磺胺甲基嘧啶 气相色谱法 社会热点问题 微孔板 磺胺类药物 靶分子

下载PDF 职称材料

骨形成蛋白与胶原基纳米骨修复牙周骨缺损的实验研究 被引量：6

2

作者 范月静 王春兰 +2 位作者 王英 陈晶晶 蒲勤 《中华口腔医学研究杂志（电子版）》 CAS 2010年第2期4-7,共4页

目的探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)和胶原基纳米骨复合材料(nHAC)修复牙周骨缺损的效果。方法制备小型猪牙周骨缺损模型,设立rhBMP-2-nHAC复合材料植入组、空白对照组和单纯植入胶原基纳米骨组,术后8周观察各组间修复效果及组织病理... 目的探讨重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)和胶原基纳米骨复合材料(nHAC)修复牙周骨缺损的效果。方法制备小型猪牙周骨缺损模型,设立rhBMP-2-nHAC复合材料植入组、空白对照组和单纯植入胶原基纳米骨组,术后8周观察各组间修复效果及组织病理学变化,通过骨组织形态计量学测定分析评价牙周骨组织的再生情况。结果术后8周可见复合材料植入组大量新生牙周组织生长,四环素单标记表面、四环素双标记表面、骨矿化沉积率、骨体积、类骨质表面、成骨细胞表面等骨组织形态计量学结果与空白对照组和单纯胶原基纳米骨组比较,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论rhBMP-2和nHAC可明显促进牙周骨缺损修复。 展开更多

关键词 牙周骨缺损 重组人骨形成蛋白-2 胶原基纳米骨 骨组织形态计量学

原文传递

水疱性口炎病毒荧光RT-PCR鉴别检测方法的建立与应用 被引量：4

3

作者 臧京帅 高志强 +6 位作者 王丽萍 郭金玉 傅毅 牛建蕊 刘文晓 张乐萃 张鹤晓 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第5期73-76,共4页

本研究建立荧光定量RT-PCR鉴别检测水疱性口炎病毒的方法。针对Gen Bank登录的水疱性口炎两血清型-新泽西型(VSV-NJ)和印第安纳型(VSV-IND)的L基因保守区,设计1对引物和2条探针。通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了Taq Man荧光... 本研究建立荧光定量RT-PCR鉴别检测水疱性口炎病毒的方法。针对Gen Bank登录的水疱性口炎两血清型-新泽西型(VSV-NJ)和印第安纳型(VSV-IND)的L基因保守区,设计1对引物和2条探针。通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了Taq Man荧光定量RT-PCR快速检测VSV的方法。与常规RT-PCR试验比较表明,所建立的荧光RT-PCR检测技术快速、敏感,检测时限3 h以内,具有很好的特异性和重复性,可以实现水疱性口炎病毒的快速检测分型。通过对342份临床样品进行检测,结果表明,所建立的检测方法适用于样品中水疱性口炎病毒的直接检测。 展开更多

关键词 水疱性口炎病毒 荧光RT-PCR TCID50 鉴别检测

下载PDF 职称材料

6种非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较

4

作者 王丽萍 臧京帅 +4 位作者 丁凯 张丽 苏莹 龚振华 张鹤晓 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第2期49-53,共5页

为了比较市场上国产及进口非洲猪瘟病毒(ASFV)ELISA抗体检测试剂盒的产品质量和使用效果,本试验对B、C、D三种进口试剂盒和A、E、F三种国产试剂盒进行敏感性、特异性和重复性比较。结果显示,试剂盒B、D、E、F分析敏感性均为1∶512;试剂... 为了比较市场上国产及进口非洲猪瘟病毒(ASFV)ELISA抗体检测试剂盒的产品质量和使用效果,本试验对B、C、D三种进口试剂盒和A、E、F三种国产试剂盒进行敏感性、特异性和重复性比较。结果显示,试剂盒B、D、E、F分析敏感性均为1∶512;试剂盒C分析敏感性为1∶256;试剂盒A分析敏感性为1∶128;诊断敏感性比较结果为试剂盒B>试剂盒D、F>试剂盒E>试剂盒C>试剂盒A;6种试剂盒对7份特异性质控血清的检测结果均为阴性,表明6种试剂盒均具有排除潜在交叉反应的病原抗体的能力;诊断特异性比较结果为试剂盒A、C、D>试剂盒F>试剂盒E>试剂盒B;批内重复性结果显示,6种试剂盒的批内变异系数(CV%)均在15%以内。结果表明,非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测国产试剂盒与进口试剂盒的敏感性、特异性和批内重复性相差无几,国产试剂盒的兴起解决了以往过度依赖昂贵的进口试剂盒的问题,国产化替代进程在不断加速。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 抗体检测试剂盒 敏感性 特异性 重复性

下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测方法

5

作者 李兴帅 张兴林 +2 位作者 牛建蕊 左海莉 臧京帅 《中国畜牧业》 2023年第22期41-42,共2页

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是危害当今养猪业的主要疫病之一,给世界养猪业造成巨大的经济损失。自1995年传入至今,我国几乎所有的省市都有PRRS的发生。流行病学和血清学调查结果表明,我... 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是危害当今养猪业的主要疫病之一,给世界养猪业造成巨大的经济损失。自1995年传入至今,我国几乎所有的省市都有PRRS的发生。流行病学和血清学调查结果表明,我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的感染率非常高。PRRSV还是猪呼吸道疾病综合征(PRDC)的一个主要原发性病原。 展开更多

关键词 猪呼吸道疾病综合征 血清学调查 养猪业 主要疫病 原发性病 PRDC

下载PDF 职称材料

牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究 被引量：2

6

作者 郭金玉 张鹤晓 +3 位作者 吴丹 高志强 张冉 张乐萃 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2025-2031,共7页

旨在制备牛肠道病毒2型(BEV-2)单克隆抗体,建立检测BEV-2抗原的ELISA方法。将纯化的BEV-2VP1+重组蛋白质接种BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0用PEG4000进行融合,对杂交瘤培养上清进行筛选,获得2株稳定分泌抗BEV-2VP1+蛋白... 旨在制备牛肠道病毒2型(BEV-2)单克隆抗体,建立检测BEV-2抗原的ELISA方法。将纯化的BEV-2VP1+重组蛋白质接种BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0用PEG4000进行融合,对杂交瘤培养上清进行筛选,获得2株稳定分泌抗BEV-2VP1+蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1G1、5G6)。用制备的单克隆抗体包被酶标板,通过一系列的优化,建立了BEV-2双抗夹心ELISA检测方法。建立的ELISA方法检测BEV-2病毒量的最低限为100TCID50·0.1mL-1,与BVDV、IBRV、BLV等病毒无交叉反应。本研究首次制备了牛肠道病毒2型单克隆抗体,建立了检测BEV-2抗原的双抗体夹心ELISA方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为进一步研究和开发快速诊断牛肠道病毒试剂盒奠定了基础。 展开更多

关键词 牛肠道病毒2型 单克隆抗体 夹心ELISA

下载PDF 职称材料

猪传染性胃肠炎病毒S基因A、D抗原共表达的复制缺陷型重组腺病毒构建及鉴定 被引量：2

7

作者 刘文晓 高志强 +4 位作者 蒲静 张伟 刘环 牛建蕊 张鹤晓 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第9期3-6,共4页

通过RT-PCR技术和重叠PCR技术扩增出含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的A抗原表位和D抗原表位,构建复制缺陷型腺病毒穿梭质粒。穿梭质粒与腺病毒骨架质粒经PacI线性化之后,共同转染AD-293细胞,获得共表达A、D抗原表位的复制缺陷型重组腺病... 通过RT-PCR技术和重叠PCR技术扩增出含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的A抗原表位和D抗原表位,构建复制缺陷型腺病毒穿梭质粒。穿梭质粒与腺病毒骨架质粒经PacI线性化之后,共同转染AD-293细胞,获得共表达A、D抗原表位的复制缺陷型重组腺病毒。经Western Blotting检测,该重组腺病毒能够正确表达目的蛋白基因,而且目的蛋白能够与猪传染性胃肠炎阳性血清反应。本研究结果为猪传染性胃肠炎重组疫苗研发奠定基础。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎 复制缺陷型腺病毒 疫苗

下载PDF 职称材料

双重RT-qPCR鉴别CSFV和BVDV方法的建立及初步应用 被引量：2

8

作者 韦雪华 张向东 +2 位作者 谢之景 田夫林 王贵升 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第5期28-31,35,共5页

为建立猪瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的鉴别检测方法,本研究根据CSFV Npro基因、BVDV 5'-UTR基因保守区域设计特异性引物和Taq Man探针,构建阳性重组质粒,优化反应条件,建立了双重RT-q PCR检测方法。该方法 CSFV和BVDV的... 为建立猪瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的鉴别检测方法,本研究根据CSFV Npro基因、BVDV 5'-UTR基因保守区域设计特异性引物和Taq Man探针,构建阳性重组质粒,优化反应条件,建立了双重RT-q PCR检测方法。该方法 CSFV和BVDV的检测灵敏度均为100拷贝/μL,具有良好的特异性和重复性;对206份猪病料进行检测,CSFV阳性59份、BVDV皆为阴性,与本实验室常用单项RT-q PCR试剂盒检测结果一致。本研究建立的双重RT-q PCR整个检测过程不到3 h,采取闭管反应,检测完毕直接处理,避免开盖造成气溶胶污染,具有简单、快捷、灵敏度高、生物安全性好等优点,可用于CSFV和BVDV的临床鉴别检测,为2种病毒的交叉污染的检测提供一种方便、快捷的方法。 展开更多

关键词 RT-QPCR CSFV BVDV

下载PDF 职称材料

水疱性口炎病毒糖蛋白的原核表达及间接ELISA诊断技术的试验 被引量：1

9

作者 郭金玉 张鹤晓 +5 位作者 高志强 林祥超 臧京帅 王麒文 牛建蕊 张乐萃 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第7期75-78,共4页

本研究利用重组质粒p ET-32a-NJ-G666(针对新泽西型水疱性口炎病毒截断的G蛋白基因片段约666 bp),将其转化至Rosetta宿主菌,用0.6 mmol/L IPTG在30℃诱导4 h,经10%聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,表达的重组蛋白分子质量与预期的30 k Da相符。... 本研究利用重组质粒p ET-32a-NJ-G666(针对新泽西型水疱性口炎病毒截断的G蛋白基因片段约666 bp),将其转化至Rosetta宿主菌,用0.6 mmol/L IPTG在30℃诱导4 h,经10%聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,表达的重组蛋白分子质量与预期的30 k Da相符。在此基础上,利用纯化的重组蛋白作为抗原包被酶标板,建立了可检测新泽西型VSV抗体的间接ELISA方法。该方法检测东部马脑脊髓炎和马西尼罗病毒的阳性血清均为阴性,且板内和板间变异系数均小于10%。试验结果表明,建立的间接ELISA方法特异性强、重复性好,为新泽西型VSV血清抗体的检测提供了依据。 展开更多

关键词 水疱性口炎病毒 原核表达 间接ELISA

下载PDF 职称材料

动物RNA病毒检测关键试剂—反转录酶(M-MLV RTase)的制备

10

作者 牛建蕊 高志强 +4 位作者 蒲静 张伟 刘环 刘文晓 张鹤晓 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第11期26-28,共3页

反转录酶是动物RNA病毒分子诊断用到的关键试剂之一。为获得纯度高、活性高、制备简单经济的M-MLV RTase,本试验将M-MLV RTase的基因序列进行密码子优化,合成并构建表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta宿主菌种,经IPTG诱... 反转录酶是动物RNA病毒分子诊断用到的关键试剂之一。为获得纯度高、活性高、制备简单经济的M-MLV RTase,本试验将M-MLV RTase的基因序列进行密码子优化,合成并构建表达载体。将表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta宿主菌种,经IPTG诱导后实现M-MLV RTase的可溶性表达。利用Ni2+柱亲和层析纯化载有6x His标记的重组MMLV RTase,对重组酶进行Western Blotting试验,鉴定为M-MLV RTase。通过对动物流感病毒RNA的普通RT-PCR和荧光RT-PCR检测来评价重组酶的活性并估测其活性单位。将活性单位相当的重组酶和商品酶进行比较,结果显示,制备的重组酶活性高,对不同浓度病毒RNA的检测结果与商品酶相当。研制的M-MLV RTase可以用于动物RNA病毒的分子诊断。 展开更多

关键词 M-MLV RTase 表达 纯化 RT-PCR

下载PDF 职称材料

猪圆环病毒2型ORF-2全基因重组腺病毒的构建与鉴定

11

作者 林祥超 高志强 +4 位作者 张鹤晓 张康 郭金玉 牛建蕊 张乐萃 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第1期24-26,共3页

扩增猪圆环病毒2型的ORF-2全基因(702 bp),将目的片段与缺陷型腺病毒穿梭质粒pacAd5CMV K-NpA连接,构建重组穿梭质粒CMV-ORF-2。将穿梭质粒与骨架质粒pacAd5 9.2-100经限制性内切酶PacI线性化后共转染293T细胞,进行细胞内重组。7~15 d... 扩增猪圆环病毒2型的ORF-2全基因(702 bp),将目的片段与缺陷型腺病毒穿梭质粒pacAd5CMV K-NpA连接,构建重组穿梭质粒CMV-ORF-2。将穿梭质粒与骨架质粒pacAd5 9.2-100经限制性内切酶PacI线性化后共转染293T细胞,进行细胞内重组。7~15 d后获重组腺病毒rAd5 CMV-OPFF-2与对照组重组腺病毒rAd5 CMV-GFP。使用293细胞进行病毒增殖,对增殖稳定的rAd5 CMV-ORF-2进行鉴定;rAd5 CMV-OPFF-2 TCID_(50),为10^(7.5/)50μL,用该代次rAd5 CMV-ORF-2进行PCV-2阳性血清中和试验,结果表明,重组腺病毒成功,PCV-2阳性血清不能中和重组腺病毒。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 ORF-2 缺陷型重组腺病毒

下载PDF 职称材料