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p53基因对人肺癌细胞系耐药性的影响 被引量：5
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作者 陶虹 朱允中 +7 位作者 汪惠 赖百塘 张春彦 湛秀萍 王玥 杨学惠 岳文涛 张洪涛 《结核病与胸部肿瘤》 CAS 2008年第2期91-99,共9页
背景与目的肺癌细胞的耐药性是影响化疗疗效的重要因素之一，已有的研究表明p53基因异常与肿瘤细胞耐药性的产生密切相关。本研究的目的是探讨不同状态的p53基因对人肺癌细胞系耐药性的影响，为临床选择有针对性的化疗药物提供依据。方... 背景与目的肺癌细胞的耐药性是影响化疗疗效的重要因素之一，已有的研究表明p53基因异常与肿瘤细胞耐药性的产生密切相关。本研究的目的是探讨不同状态的p53基因对人肺癌细胞系耐药性的影响，为临床选择有针对性的化疗药物提供依据。方法采用质粒pEGFP，分别构建含正义、反义p53cDNA的真核细胞表达载体，测序法检测外源p53基因。用脂质体介导转染人肺癌细胞系801D，建立含不同p53基因状态的单克隆细胞系，分别为pEGFP-801D、pEGFP—sensep53—801D[含有正义p53，pEGFP—p53（RS）-801D]、pEGFP—antisensep53—801D[含有反义p53，pEGFP—p53（AS）-801D]。荧光显微镜观察细胞绿色荧光，PCR法检测外源基因，MTT法检测耐药性，流式细胞术检测细胞周期与凋亡。结果测序结果显示外源p53基因分别以正向、反向连接于载体，荧光显微镜下转染细胞可见绿色荧光，PCR法检测出外源p53基因和neo基因。pEGFP—p53（AS）1801D细胞系对顺铂（Cisplatin，DDP）的IC50为0．26±0．09mg／ml，显著低于母系（0．55±0．19μg／ml，P〈0．05）和空载系（0．77±013μg／ml，P〈0．05）。pEGFP—p53（RS）-801D细胞系对DDP的IC50为0．43±0．25μg／ml，显著低于空载（P=0．000）但高于pEGFP—p53（AS）-801D（P=0．041）。pEGFP—p53（RS）-801D细胞系对紫杉醇（Paclitaxel，TAX）的IC50为234±0．43ng／ml，显著低于母系（8．40±150ng／ml，P〈0．05），低于空载系但无显著差异。pEGFP—p53（RS）-801D细胞系对5氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5FU）的IC50为2．08±0．18μg／mL，显著低于母系（4．90±1．12μg／ml，p〈005）和空载系（3．41±0．86μg/ml，P〈005）。DDP能诱导pEGFP—p53（AS）-801D出现G2期阻滞，TAX、5FU诱导pEGFP—p53（RS）-801D细胞系分别出现G2、S期阻滞，DDP、TAX能诱导细胞凋亡和死亡。结论肺癌细胞中不同状态的p53基因对化疗药的耐药� 展开更多
关键词 P53基因 耐药 细胞周期 凋亡
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p53缺失和突变对人肺癌细胞系恶性表型影响的比较
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作者 汪惠 赖百塘 +7 位作者 李金照 杨学惠 张春彦 岳文涛 张洪涛 李曦 湛秀萍 王 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第4期245-249,共5页
目的　比较研究外源正义和反义 p5 3对所转染细胞系恶性表型的影响。 方法　构建正义和反义 p5 3cDNA真核细胞表达载体 pEGFP p5 3 (RS)和 pEGFP p5 3 (AS) ,用Lipofectin介导转染 80 1D细胞。PCR检测外源 p5 3和neo基因。荧光显微镜检... 目的　比较研究外源正义和反义 p5 3对所转染细胞系恶性表型的影响。 方法　构建正义和反义 p5 3cDNA真核细胞表达载体 pEGFP p5 3 (RS)和 pEGFP p5 3 (AS) ,用Lipofectin介导转染 80 1D细胞。PCR检测外源 p5 3和neo基因。荧光显微镜检查转染细胞绿荧光蛋白。免疫组化染色检测突变蛋白表达。比较pEGFP p5 3 (AS) 80 1D和 pEGFP p5 3 (RS) 80 1D的集落形成试验和裸鼠移植试验。用流式细胞术分析细胞周期。结果　PCR检测出外源 p5 3和neo基因存在于细胞 ,细胞可见绿色荧光。免疫组化检测示pEGFP p5 3(AS) 80 1D突变蛋白呈阴性 ,母系为阳性 ,表明反义 p5 3能封闭突变p5 3蛋白表达。pEGFP p5 3 (RS) 80 1D和pEGFP p5 3 (AS) 80 1D细胞集落形成率和裸鼠移植成瘤性均降低 ,pEGFP p5 3 (RS) 80 1D更为明显。pEGFP p5 3 (AS) 80 1D细胞周期阻滞于G1期。结论　在同一细胞背景下 ,p5 3缺失比p5 3突变对恶性增殖起更重要的作用。外源野生型p5 3在肿瘤细胞中可恢复重建其功能 ,外源反义 p5 3可封闭突变蛋白表达 ,阻止细胞停留于G1期。 展开更多
关键词 肺癌细胞系 恶性表型 P53基因 转染细胞 集落形成 基因缺失 基因突变 流式细胞术
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