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小鼠金属硫蛋白在聚胞藻中的金属诱导表达与纯化 被引量：14
1
作者 郭祥学 赵晖 +2 位作者 施定基 徐旭东 茹炳根 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期405-411,共7页
应用蓝藻类金属硫蛋白基因启动子（ｓｍｔＯＰ）的金属诱导性，在单细胞的聚胞藻ＰＣＣ６８０３中表达小鼠金属硫蛋白结构基因（ｍＭＴ１ｃＤＮＡ）。在大肠杆菌ＨＢ１０１中构建含有ｓｍｔＯＰ和ｍＭＴ１ｃＤＮＡ的穿梭表达载... 应用蓝藻类金属硫蛋白基因启动子（ｓｍｔＯＰ）的金属诱导性，在单细胞的聚胞藻ＰＣＣ６８０３中表达小鼠金属硫蛋白结构基因（ｍＭＴ１ｃＤＮＡ）。在大肠杆菌ＨＢ１０１中构建含有ｓｍｔＯＰ和ｍＭＴ１ｃＤＮＡ的穿梭表达载体ｐＫＴＭＲＥ，经质粒转移，链霉素筛选，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交分析鉴定得稳定的转基因工程藻落。同时，做小批量锌诱导表达，并纯化了外源蛋白，５Ｌ培养液含鲜藻重５０ｇ，得到３５ｍｇｍＭＴ１；转基因藻在高金属浓度下的耐受性测定表明，外源基因的表达提高了蓝藻对金属离子的抗性，约为野生藻的２倍。 展开更多
关键词 聚胞藻PCC6803 smtO-P区域 金属硫蛋白 蓝藻
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植物类MT与植物络合肽 被引量：18
2
作者 张晓钰 茹炳根 《生命科学》 CSCD 2000年第4期170-172,共3页
金属硫蛋白在哺乳动物的解毒方面发挥着重要作用，植物本身也存在类似的解毒机制。研究表明，植物存在基因编码的类MT，另外还有非基因编码的植物MT，又称植物络合肽。类MT在必需重金属离子（例如Zn2＋、Cu2＋）的代谢中发挥着重要作用... 金属硫蛋白在哺乳动物的解毒方面发挥着重要作用，植物本身也存在类似的解毒机制。研究表明，植物存在基因编码的类MT，另外还有非基因编码的植物MT，又称植物络合肽。类MT在必需重金属离子（例如Zn2＋、Cu2＋）的代谢中发挥着重要作用，而植物络会肽在非必需重金属离子（例如Cd2＋）的解毒中起到关键作用。本文综述了类MT和植物络合肽之间的关系以及各自的生物合成途径、相关的结构与功能、在植物中的分布等。 展开更多
关键词 类MT 植物络合肽 代谢 解毒 金属硫蛋白
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金属硫蛋白突变体的植物高效表达载体的构建及其在烟草中的表达 被引量：11
3
作者 张晓钰 李伟 +2 位作者 张竞 何笃修 茹炳根 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第6期888-892,共5页
金属硫蛋白有α、β两个结构域（ｄｏｍ ａｉｎ），其中α结构域优先结合Ｃｄ２＋ 和Ｈｇ２＋ ．小鼠αα突变体在大肠杆菌中已经构建并得到表达，其转基因植株已得到，可在Ｃｄ３００（３００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长．为了进一步提高... 金属硫蛋白有α、β两个结构域（ｄｏｍ ａｉｎ），其中α结构域优先结合Ｃｄ２＋ 和Ｈｇ２＋ ．小鼠αα突变体在大肠杆菌中已经构建并得到表达，其转基因植株已得到，可在Ｃｄ３００（３００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长．为了进一步提高外源基因在烟草中的表达量，首先用ＰＣＲ 的方法设计引物，在基因翻译起始密码子ＡＴＧ 附近加入植物偏爱的碱基组合ＡＡＣＡＡＴＧ．另外，将该突变体基因插入具有双３５ Ｓ（ＣａＭＶ３５Ｓ）强启动子的植物双元表达载体ｐＧＰＴＶｄ３５Ｓ－ＢＡＲ中，获得了带有αα突变体的植物双元表达载体．通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草ＮＣ８９，获得了抗除草剂的转基因植株．经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 和蛋白Ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ 检测，证明了αα突变体在烟草中的嵌合与表达．抗重金属实验证明转基因烟草可以在Ｃｄ４００（４００ μｍ ｏｌ／Ｌ）中生长． 展开更多
关键词 突变体 烟草转基因 抗性育种 MT 重金属
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